14 335例婦科門診就診者人乳頭狀瘤病毒感染結果的報告

賀國麗，蔡俊宏

(海南省人民醫院，海口 570311)

人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸病變與宮頸癌的主要病因，已知與宮頸癌相關的高危型HPV型別有14種，研究報道認為宮頸的HPV感染率和感染型別存在著地區差異。本文通過對14 335份宮頸細胞刷片標本的14種高危HPV亞型檢測，初步了解本地區女性高危HPV感染率以及所感染高危亞型的分布情況，為本地區癌前病變和宮頸癌的篩查以及預防性和治療性疫苗的應用提供資料和依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2009～2012年我院婦科門診就診或體檢者的宮頸刷片標本共14 335份，患者年齡17～78歲，平均(36．85 ±9．69)歲。

1.2 試劑與儀器

凱普HPVDNA提取試劑盒、DNA擴增試劑盒和HPV核酸分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學有限公司)、PCR擴增儀、Hybrmiax醫用核酸分子快速雜交儀。

1.3 標本采集

擴陰器暴露宮頸口后，用特制宮頸刷順時針轉5圈以上，將刷頭折斷放入已加有專用細胞保存液的取樣管中，立即送檢或4℃保存在48小時內檢測。

1.4 分型檢測

1.4.1 DNA模板的制備 樣本制備過程按凱普公司的HPVDNA提取試劑盒使用說明進行。將樣品管渦旋振蕩混勻，取500μl宮頸細胞保存液，14 000 r/min離心5min，沉淀加400μl溶液Ⅰ于100℃水浴15min，再加入 400μl溶液Ⅱ，14 000r/min 離心5min，棄去上清，獲取核酸沉淀，用60μl溶液Ⅲ溶解核酸沉淀后備用。

1.4.2 PCR擴增 使用凱普DNA擴增試劑盒擴增，反應體系及反應條件根據試劑盒說明書。每管23．25μl PCRmix和0．75μl Taq 酶配制擴增反應液，各加已提取的DNA樣本模板1μl進行擴增。PCR反應條件為 95℃ 預變性 9min，95℃20s，55℃30s，72℃30s，共40 個循環，72℃延伸5min。

1.4.3 雜交并顯色 按照Hybrmiax醫用核酸分子快速雜交儀操作步驟進行雜交試驗并顯色。

1.4.4 結果判讀 檢測結果陽性為肉眼清晰可見的紫藍色圓點，根據試劑盒提供的膜條HPV分型分布圖判讀結果。

1.5 統計方法

用Excel建立數據庫并進行統計，χ2檢驗統計分析。

2 結果

2.1 高危HPV各亞型感染率

在14 335例標本中，高危HPV陽性4 496例，陽性率為31．36%。位居前三位的高危亞型為52、16、58，感染率分別為 22．75%、20．82%、15．01%，其 余 依 次 是 18(7．59%)、33(6．49%)、68(5．75%)、31(5．18%)、39(3．49%)、56(3．12%)、66(2．67%)、59(2．56%)、35 和 51 分別(1．75%)、45(1．07%)。因低危HPV陽性僅80例且型別分散，未納入統計分析。

在HPV陽性者中，單一亞型感染者3 804例，占84．61%;2種亞型混合感染者 531例，占11．81%;3種亞型混合感染106例，占2．36%;4種亞型混合感染35例，占0．78%;5種亞型混合感染18例，占 0．40%;7種亞型混合感染 2例，占0．05%。各亞型感染情況見表1。

表1 14種高危HPV亞型感染分布及感染率

2．2 各年齡段女性宮頸高危HPV檢出情況

在4 496例高危HPV陽性的受檢者中，以＜50歲居多為3 928例，占87．37%。在各年齡段中，＜30歲 1 238例，陽性率為 33．92%;31～40歲1 389例，陽性率 26．71%;41～50 歲1 301 例，陽性率30．60%;51～60歲398例，陽性率46．88%;＞60歲170例，陽性率44．39%。HPV感染率在＜30歲與31～40 歲(χ2=53．10，P ＜0．005)、31～40 歲與41～50 歲(χ2=16．39，P ＜0．005)、41～50 歲與 51～60 歲(χ2=84．28，P ＜0．005)年齡段之間的差異有統計學意義。在51～60歲與＞60歲年齡段的差異無統計學意義(χ2=0．62，P ＞0．25)。見表2。

表2 不同年齡段高危HPV感染情況

2.3 HPV多重感染情況

在HPV多重感染中，以二種亞型的混合感染多見，陽性率在 ＜30歲與 31～40歲(χ2=1．31，P ＞0．25)、31～40 歲與41～50 歲(χ2=0．27，P ＞0．5)、41～50歲與 ＞50 歲(χ2=1．68，P ＞0．25)之間的差異均無統計學意義。HPV三種亞型及以上的多重感染中，陽性率在 ＜30歲與31～40歲(χ2=38．69，P ＜ 0．005)、41～50 歲與 ＞ 50 歲(χ2=89．60，P＜0．005)的差異有統計學意義;在31～40歲與41～50歲年齡段的差異無統計學意義(χ2=0．89，P ＞0．5)。見表3。

表3 多重HPV感染情況

3 討論

盡管HPV感染在女性人群中是非常普遍的，但是HPV的感染率有較大的地區性差異，報道的范圍為 1．4%～25．6%［1］。國外一項對多個地區的157 879名細胞學正常女性的檢測分析顯示，全球的HPV感染率為10．4%，其中非洲為22．1%，中美洲為20．4%，南美洲為12．3%，北美洲為11．3%，亞洲為8．0%，歐洲為8．1%［2］，分析認為形成這一差異的主要原因，應該是各地區間經濟發展不平衡所導致的生活水平和條件不同造成的［3-4］。目前尚無全國性的宮頸HPV感染情況的權威性結果，但已有不少省市區發表了各自的HPV感染情況報告，如深圳市為 24．5%、湖南長沙 44．45%、潮州地區8．25%、西安長安區 23．56%、廣西南寧 20．50%、重慶地區為37．3%、成都農村地區為21．98%，黔北地區23．76%、浙南地區 28．98%、陜西咸陽 18．70%，浙江臺州地區對10 007例婦科門診患者檢測的HPV感染率為44．45%［3-11］。本文的門診感染者中以高危亞型感染為主，且高危型HPV陽性率達31．36%，屬于感染率比較高的地區，值得重視。因為這些受檢者系門診就診者，不是接受普查的人群，是否存在偏差還待下一步研究證實。

研究結果顯示，HPV亞型的分布與種族、年齡、地域等諸多因素有關聯。全世界范圍內共同的最常見感染亞型是16型，18型位居第二，45型在非洲、歐洲、北美洲位居第三，31型在南美洲位居第三，52、58型在亞洲常見［12］。我國浙江臺州、深圳、黔北地區和湖南長沙、浙南地區報道的HPV高危亞型位居前三位的是 HPV16、52、58 和 16、58、52，南寧和潮州地區為52、16、58。本文位于前三位的亦分別為 52、16、58 亞型，分別占 22．75%、20．82%、15．01%，而西安報道的是 16、18、31，江蘇常州地區是16、58、39。中國南方地區52、58亞型的感染率似乎較北方高［7］，然而 HPV52、HPV58的感染率，是否在國內的其它地區也遠超過HPVl8，還有待于相關的研究確定。造成這種優勢亞型分布的差異可能與地理環境、社會生物因素或宿主的遺傳免疫因素有關［4，7］。

HPV單一亞型感染是主要的感染模式，占60%以上，高于多種亞型感染。本文中單一高危亞型感染占84．61%，多重感染占15．39%，其中二個亞型混合感染占11．81%、三個亞型感染占2．36%、四個亞型感染占0．78%、五個亞型感染占0．40%、七個亞型感染占0．04%。檢測結果表明HPV是以單一感染為主的，52、16、58、18、33、68、31 是本地區的常見亞型，而在多重感染中 16、58、52、18、33 仍然為最常見基因型，與國內報道的大部分情況相似。

二種亞型的混合感染率，在各年齡段之間沒有差異。而三種及以上的多重感染率以＜30歲和＞50歲年齡段為高，可能是因為年輕女性的性生活活躍、存在流產、分娩事件的影響以及健康意識不強;而老年女性卵巢功能減退，免疫力下降，病毒清除能力減弱，健康意識弱化，導致這二個年齡段容易出現多型 HPV 的混合感染［4，6，8，11］。

預防和治療HPV感染的理想方法是疫苗接種，而研制和應用HPV疫苗就需要了解各地區HPV型別的感染狀況、感染的優勢型別。雖然目前認為HPV52、58、33亞型與宮頸癌的相關性低于HPV16、18，但它們在我國所呈現的高感染率和普遍性應該予以足夠的重視［3，6，7，10，11］。現在國際上使用的疫苗主要是二價疫苗(16/18)或四價疫苗(16/18/6/11)，并沒有包含我國高發的高危型52、58、33等，所以現有的HPV疫苗如要在我國推廣使用尚有待于改進增加型別。HPV58和52是我國包括子宮頸癌高發區婦女中位居第一、第二或第三種的型別，因此這些型別在亞洲(尤其是中國高發區)人群中具有重要意義，包括58、52、33型的HPV疫苗才能為我國及相關國家婦女提供更高保護率。正如WHO專家提出，如果增加 HPV31，33，35，45，52 和 58 型，可以在預防世界70%的宮頸癌基礎上增加約20%對宮頸癌的預防能力［6］，因此應用于我國的HPV疫苗應該至少覆蓋16、58、52亞型。

本文通過HPV分型檢測方法對海南地區婦科門診就診者的高危型HPV感染情況進行了分析，結果顯示HPV以單一型感染為主;感染率是31．36%;位居前幾位亞型是 16、52、58、18、33、68、31 型;多重感染亞型可有七種之多;HPV感染與年齡有一定關系。明確HPV在特定地區及人群的感染率及型別分布差異，對HPV所致疾病的防治及宮頸癌疫苗研制應用具有重要的指導意義。

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