江陵鳳凰山168號墓西漢古尸組織血型物質的驗證

張楊，吳順清，魏彥飛 （荊州文物保護中心技術研究部，湖北 荊州434020）

吳晶晶，吳剛珂，袁萬博 ，李俊立 長江大學荊州臨床醫學院

荊州市中心醫院檢驗醫學部，湖北 荊州434020

我國文物考古工作者1975年在湖北省江陵縣（今荊州市）紀南城鳳凰山一六八號墓中發現的西漢古男尸出土近40年，是當時我國發現的時代最早的一具古尸。古尸出土后長期浸泡在由福爾馬林配制的保存液中，為了解西漢古尸的血型物質保存情況，采集其左上臂肌肉，運用抑制凝集試驗的方法，對古尸血型進行了驗證。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體），效價≥1∶128，上海血液生物有限公司，批號：20130612，4℃冰箱保存；百分之一紅細胞懸液，取健康人的A型、B型紅細胞各3份，用生理鹽水洗滌3次，制成壓積紅細胞，按1∶100的比例制成紅細胞懸液；所驗證組織取自于西漢古尸左上臂肌肉組織，對照組織為已知血型為O型的人肝臟組織。一次性使用培養板，浙江拱東醫用塑料廠，批號：100607。

1.2 方法

取古尸左上臂肌肉組織及已知O型血人肝臟組織少量，分離成細絲狀，用生理鹽水洗滌兩次后，分成二等分放入一次性使用培養板的五個凹孔中。

取5支潔凈玻璃試管，分別標記1～5號，每管加入500μL生理鹽水，再取500μL抗A血型定型試劑加入1號小試管中混勻后，從1號試管中吸出500μL加入2號試管中混勻，依次類推直至5號試管，最后從5號試管吸出500μL棄去。抗B血型定型試劑倍比稀釋同上步驟。

向已分成二等分的古尸左上臂肌肉組織及已知O型血人肝臟組織的凹孔中分別滴加不同稀釋倍數的抗A、抗B血型定型試劑100μL，置室溫中2h，然后放置4℃冰箱72h，接著取出至室溫下平衡。從凹孔中吸出已被吸收的抗A、抗B血型定型試劑各50μL放置另一潔凈凹孔中，用生理鹽水倍比稀釋，再滴加相應的已配制好的1∶100紅細胞懸液50μL，搖勻后室溫放置10min，顯微鏡下觀察是否發生凝集現象。若發生凝集現象則說明組織中不含相應的A、B血型物質，若不發生凝集現象則說明組織中含有相應的A、B血型物質。

2 結果

將所用抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）稀釋成1／2、1／4、1／8、1／16、1／32的倍數分別進行試驗，紅細胞懸液與左上臂肌肉組織浸泡過的抗A、抗B血型定型試劑均未發生凝集，與肝臟組織浸泡過的抗A、抗B血型定型試劑均發生了凝集，結果表1，凝集情況分別見圖1、圖2、圖3、圖4。

表1 兩種組織的抑制凝集試驗結果

圖1 古尸組織＋抗A血型定型試劑，紅細胞不凝集

圖2 古尸組織＋抗B血型定型試劑，紅細胞不凝集

圖3 肝臟組織＋抗A血型定型試劑，紅細胞凝集

圖4 肝臟組織＋抗B血型定型試劑，紅細胞凝集

3 討論

江陵鳳凰山西漢古尸的發現是我國考古工作的重大發現，對其血型的驗證是對古尸研究的重要課題之一。某些血型抗原以可溶解的形式存在于血清、血漿、唾液、尿液［1～5］等體液中，也可以非溶解性物質的形式存在于發、骨、皮膚等組織中，這些血型物質可以中和相應的抗體。古尸出土前長期浸泡在棺液中，而出土后又浸泡在保存液中已經長達近40年，無法采取其體液等進行試驗，故本研究采取了其左上臂肌肉組織進行檢測。

組織中可溶性抗原與特異性抗體一定時間的接觸而被中和，這些中和抗體的過程抑制了該抗體對紅細胞的凝集反應，按照這種原理，筆者對古尸組織進行了不同滴度特異性抗體的抑制凝集試驗，古尸血型物質被成功檢出，而且結果相對穩定。國內外均有關于古尸的毛發、骨組織、肌組織等血型檢測的報道［6～8］，也表明保存相對較好的古尸在千年后仍可檢測出ABO血型，可能是因為A及B血型物質是多糖－氨基酸復合物，由半乳糖和氨基酸（即N－乙酰氨基葡萄糖）聚合而成［3，4，9］，結構比較穩定，不與含甲醛等化學物質的保存液產生化學反應。

就實驗而言，本研究采用的抑制凝集試驗方法中，同時進行了已知血型組織作為對照，且檢出結果正確，這就保證了對古尸所檢出血型結果為AB型的準確性，且與40年前所鑒定的結果一致［6］。此方法雖然用材量較多，反應時間較長，但操作易于掌握，結果可靠。

由此可見，本例西漢古尸的血型檢出，表明其出土近四十年仍保存較好，血型物質未被破壞，亦表明ABO血型是人類基因遺傳重要特征之一［10～11］，兩千一百多年前的人類與現在的人類均有ABO血型系統，為人類早已形成的特征。檢出血型結果與40年前所鑒定結果一致，也表明了所使用的保存液對血型物質起到了很好的保護作用。

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