P53在膽囊上皮內瘤變及膽囊癌組織中的表達及臨床意義

潘獻柱，吳義春

汪曉慶，謝琳琳 （安徽醫學高等專科學校病理學教研室，安徽 合肥230601）

膽囊癌是消化系統常見腫瘤之一，具有惡性程度高、易侵犯等特點。該病早期無特異性的癥狀和體征，預后極差［1］。膽囊癌的發生發展是一個多基因、多階段的過程，其發生機制十分復雜，許多癌基因的激活及抑癌基因的失活參與了這一過程。本研究擬采用SP法檢測膽囊上皮內瘤變及膽囊癌中P53的表達，探討其在膽囊癌發生中的作用和其在臨床病理診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

所有標本取自安徽省第二人民醫院2010年1月至2014年6月手術切除標本，共138例。其中低級別上皮內瘤變標本54例（男18例，女36例），高級別上皮內瘤變標本45例（男19例，女26），膽囊癌39例（男15例，女24例）。女性多于男性。患者年齡35～79歲，平均年齡（42.9±2.1）歲。

試劑：即用型兔抗人COX－2單克隆抗體、鼠抗人P53單克隆抗體，均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.2 方法

采用免疫組織化學SP法檢測所有標本中的P53和COX－2蛋白的表達。按照SP試劑盒操作程序進行。用已知的陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。P53為淺黃色或棕黃褐色顆粒，定位于細胞核（圖1）。高倍鏡下每張切片隨機選擇4個視野，每個視野計數200個細胞，計算每張切片陽性細胞數百分比。細胞內無著色為（－），陽性細胞數 ＜25%為 （＋），25～50%為（＋ ＋），＞50%為（＋ ＋ ＋）。COX－2以胞漿染色呈棕黃色至深棕黃色為陽性（圖2）。

1.3 統計學分析

運用SPSS 17.0軟件進行分析。計數資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組P53表達率的比較

P53在膽囊癌組織（見圖1）中的陽性表達率明顯高于其在上皮內瘤變中的表達，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組P53表達率的比較

2.2 各組P53和COX－2表達率之間的關系

不同組別中組織表達P53蛋白和COX－2蛋白（見圖2）呈正相關（P＜0.01）。見表2。

圖1 膽囊癌細胞核P53陽性表達（SP法）

圖2 膽囊癌細胞槳COX－2陽性表達（SP法）

表2 P53與COX－2表達率之間的關系

3 討論

P53基因位于人染色體17p，控制著細胞的代謝、DNA的修復與合成，是迄今發現的與人類腫瘤相關性最高的基因，分為野生型和突變型兩種。野生型P53是抑癌基因，可導致細胞凋亡，其產物野生型P53蛋白（wtP53）有維持基因穩定、抑制癌變、調節細胞分化和衰老等功能［2］。P53基因一旦突變、雜合性丟失或與病毒結合，P53蛋白結構就會改變，其不僅失去正常wtP53的生長抑制作用，還具有癌基因的功能，從而促進腫瘤發生［3］。

P53基因缺失或突變是許多腫瘤發生的原因之一。野生型P53蛋白的半衰期極短，較難檢測。利用免疫組織化學只能檢測到突變型P53蛋白的表達［4］。本研究表明，P53蛋白在上皮內瘤變中就已出現，并隨著膽囊組織異型性不斷增加，表達率也不斷升高，組間具有統計學差異（P＜0.05）。從而表明P53基因突變及表達發生在膽囊癌的形成階段，膽囊上皮從上皮內瘤變到癌變這一過程中，P53基因突變具有重要意義，與膽囊癌變關系密切，并可作為膽囊良、惡性病變鑒別診斷的輔助指標。

環氧合酶－2（COX－2）能夠將花生四稀酸轉化為前列腺素，并且是這一過程中的關鍵限速酶，在腫瘤的發生、發展過程中起著十分重要的作用［5］。COX－2的表達與膽囊癌的浸潤程度、淋巴結轉移和Nevin分期有密切關系。本研究檢測了COX－2蛋白在膽囊上皮內瘤變和膽囊癌組織中的表達，結果發現其表達率也隨膽囊組織異型性增加而增加（P＜0.05），并與P53蛋白表達呈正相關（（P＜0.01）。有研究顯示兩者都能促進腫瘤的血管生成，而新生血管生成是腫瘤生長和轉移的前提［6］。本研究認為，COX－2及P53通過在腫瘤血管生成等方面相互作用，促進了膽囊癌的發展。因此，聯合檢測膽囊癌組織中COX－2及P53表達，可為臨床膽囊癌的早期診斷、病情進展、惡性程度的判斷及預后估測提供重要參考依據。

［1］Artico M，Bronzetti E，Alicino V，et al.Human gallbladder carcinoma：Role of neurotrophins，MIB－1，CD34and CA15－3 ［J］.Eur J Histochem，2010，54（1）：50～55.

［2］Hu J，Chen C，Su Y，et al.Vascular endothelial growth factor promotes the expression of cyclooxygenase 2and matrix metalloproteinases in Lewis lung carcinoma cells ［J］.Exp Ther Med，2012，4（6）：1045～1050.

［3］Chen W J，Xiong Z A，Tang Y，et al.Feasibility and effect of ultrasound microbubble－mediated wild－type p53gene transfection of HeLa cells ［J］.Exp Ther Med，2012，3（6）：999～1004.

［4］Lara J F，Thor A D，Dressler L G，et al.p53Expression in Node Positive Breast Cancer Patients：Results from the Cancer and Leukemia Group B（CALGB）9344Trial（159905）［J］.Clin Cancer Res，2011，17（15）：5170～5178.

［5］Zhang L，Wu Y D，Li P，et al.Effects of cyclooxygenase－2on human esophageal squamous cell carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2011，17（41）：4572～4580.

［6］Jiang J，Jin M S，Suo J，et al.Evaluation of malignancy using Ki－67，p53，EGFR and COX－2expressions in gastrointestinal stromal tumors［J］.World J Gastroenterol，2012，18（20）：2569～2575.