兒童A型流感病毒與呼吸道合胞病毒性肺炎血清細胞間黏附分子-1的表達及意義

江文輝趙明奇陳 翊連廣琬

兒童A型流感病毒與呼吸道合胞病毒性肺炎血清細胞間黏附分子-1的表達及意義

江文輝①趙明奇①陳 翊①連廣琬①

目的：探討兒童A型流感病毒肺炎與呼吸道合胞病毒性肺炎中血清可溶性細胞間黏附分子-1的表達及其意義，以指導臨床治療和預防。方法：選取于本科住院的肺炎兒童，根據逆轉錄聚合酶鏈反應結果分為FA組（A型流感病毒陽性）36例，RSV組（呼吸道合胞病毒陽性）22例，同時選取同期來本院體檢的健康兒童41例為對照組，分析比較三組兒童的血清sICAM-1值。結果：FA組和RSV組血清sICAM-1值均高于對照組，比較差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：A型流感病毒肺炎與呼吸道合胞病毒性肺炎兒童中sICAM-1表達水平升高，是導致兒童氣道炎癥的重要炎癥因子之一，可為臨床治療采用抗粘附療法及抗炎抑制炎性因子提供佐證。

兒童； A型流感病毒； 呼吸道合胞病毒； 肺炎； 血清可溶性細胞間黏附分子-1

肺炎是兒科常見肺部疾病，嚴重威脅小兒的健康及生命，據統計，在世界范圍內肺炎是5歲以下兒童主要死亡原因，在我國兒童死亡原因中占首位[1]。隨著病原學變遷以及疾病譜的改變，病毒所致的小兒肺炎有逐年增高趨勢[2]。為探討兒童A型流感病毒（FA）肺炎與呼吸道合胞病毒性（RSV）肺炎時血清可溶性細胞間黏附分子-1（solube intercellular adhesion moleculet， sICAM-1）表達水平的差異，應用酶聯免疫吸附試驗法對2013年1-4月在本科住院的FA肺炎和RSV肺炎兒童進行血清sICAM-1水平檢測，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1-4月在本科住院的符合肺炎診斷標準[3]的兒童，用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法進行檢測呼吸道病原學9項（包括A型流感病毒、B性流感病毒、合胞病毒、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、人偏肺病毒、人博卡病毒及腸道病毒），篩選出A型流感病毒陽性病例36例（FA組），男27例，女9例，年齡3～60個月，平均（31.4±22.7）月；呼吸道合胞病毒陽性病例22例（RSV組），男14例，女8例，年齡1～38個月，平均（8.5±2.1）月，兩觀察組均排除兩種或以上病原混合感染患兒；另設正常兒童對照組41例，系同期來本院體檢的健康兒童，其中男24例，女17例，年齡3～50個月，平均（12.1±1.9）月，無心、肺、肝、腎臟等基礎疾病，3周內無傳染性病史及變態反應等病史。FA組、RSV組分別與對照組年齡比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖1。FA組、RSV組分別與對照組性別構成比較，差異無統計學意義（P＞0.05），圖2。

圖1 三組兒童年齡比較圖注：group1：RSV組；group2：對照組；group3：流感組

圖2 三組兒童性別構成比較注：group1：RSV組；group2：對照組；group3：流感組

1.2 方法 （1）標本采集：采集住院當天的咽拭子標本，放入含雙抗和二性霉素的1640取材液中，冰上運送至實驗室。（2）核酸提取：各檢測項目病毒核酸采用擴增熒光定量檢測試劑盒的配套抽提試劑提取。（3）病毒核酸檢測：FA、RSV采用廣州華銀醫藥科技有限公司的病毒核酸檢測試劑盒，采用PCR-熒光探針法，操作按試劑盒說明進行。（4）血清可溶性細胞間粘附分子-1（sICAM-1）測定：各組入選兒童空腹抽取靜脈血3 mL，分離血清，-40 ℃備用待檢。所有標本的血清sICAM-1采用酶聯免疫吸附試驗法， 試劑盒由深圳欣博盛生物科技有限公司提供，按試劑盒說明書要求操作，結果用ELx800酶標儀讀取。

1.3 統計學處理 使用SPSS 20.0統計學軟件分析數據，應用t檢驗和線性回歸方法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

酶聯免疫吸附試驗法檢測三組兒童的血清sICAM-1水平，FA組兒童血清sICAM-1水平為（1312.8±756.2）μg/mL，RSV組為（991.7±183.4）μg/mL，對照組為（852.3±170.8）μg/mL。RSV組、FA組分別與對照組血清sICAM-1水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。在調整了的年齡和性別影響因素采用線性回歸比較方法RSV組、FA組分別與對照組血清sICAM-1水平比較仍有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 調整了年齡和性別的差異后三組兒童的血清sICAM-1比較

3 討論

近二、三十年來，由于診斷技術的進步，特別是聚合酶鏈反應（PCR）的應用，肺炎病原檢出率尤其是病毒感染逐漸增加[4]。肺炎時，感染性因素經氣道入肺，刺激肺泡，產生多種炎癥細胞因子，他們再刺激肺內多炎癥細胞因子介導外周循環的炎癥細胞遷徙到肺間質和肺泡，進一步釋放大量炎癥介質和細胞因子造成炎癥反應的進一步加重[5-7]。細胞粘黏分子是一大類膜蛋白，在免疫調節、炎癥反應、病毒感染等生理和病理生理過程中發揮重要作用。細胞間黏附分子-1（ICAM-1）是近年來發現的一種重要生物活性物質，對局部炎癥的發生和形成具有重要作用[8]。氣道上皮細胞既是炎癥的靶細胞，又扮演著效應細胞的角色，可分泌和表達多種細胞因子及黏附分子，從而參與炎癥反應的全過程。在靜息狀態下，白細胞和內皮細胞黏附的黏附分子表達量低，在炎癥介質的作用下，白細胞和內皮細胞的黏附分子表達增多。有體外實驗研究顯示RSV感染可顯著上調氣道上皮ICAM-1表達，RSV毛細支氣管炎患兒也存在黏附分子表達增多[9]。流感病毒感染人臍靜脈內皮細胞后，在炎癥因子作用2 h時，內皮細胞表面的ICAM-l增加約30倍，ICAM-l的增高在12～24 h達到高峰，可持續72 h[10]。sICAM-1是ICAM-l的另一種形式，表達于血管內皮細胞，可調節白細胞和血管內皮細胞的黏附，促進白細胞向組織內遷移，白細胞激活后釋放各種酶和自由基，可引起組織的損失[11]。它在哮喘中的作用機制已引起相當重視，而ICAM-l與其他肺部炎癥性疾病的關系研究甚少，國內外已有多項研究證實鼻病毒后，ICAM-1由于其雙重作用而成為注視的焦點：（1）作為上皮細胞之間、或上皮細胞結合滲出的白細胞如嗜酸細胞和淋巴細胞亞群的黏附分子[12]；（2）主要的RV的受體。體外和體內研究證實RV感染上調ICAM-1表達。近年來隨著黏附機制對肺損傷與修復機制的闡明，越來越多的證據表明黏附分子參與并介導細胞以及細胞與基質間的相互作用，在決定肺內炎癥和纖維化過程中起著重要作用。ICAM-1在呼吸系統中參與許多炎癥性疾病，其中黏附功能是參與許多炎癥性疾病的重要病理生理基礎。中性粒細胞與內皮細胞結合，而后滲出至炎癥部位是一個多重性的過程，這過程需要不同種細胞黏附分子（如ICAM-1、選擇素、整合素）的上調參與。由于黏附分子在炎癥形成過程中起著決定性作用，尤其是在肺組織中的表達，乃至ARDS的發病以及治療中均有其非常重要的實驗意義以及臨床價值。因而有選擇性地抑制及調節CAMs功能，可望抑制炎性細胞浸潤及炎性反應[13]。

肺部病毒性感染時，感染上皮細胞通過高表達ICAM-1促進其與中性粒細胞黏附，從而導致氣道損傷。研究發現感染呼吸道合胞病毒72 h后，上皮細胞表達ICAM-1明顯上升，IFN-γ、IL-1、TNF-α均能增進其表達，最早可于感染后24 h達頂峰，從而提高中性粒細胞和嗜酸性粒細胞黏附至呼吸道上皮細胞，進而引起各種炎癥細胞游走入氣道產生損傷，病毒感染后1～2 d支氣管上皮細胞ICAM-1表達量成倍增長，抗ICAM-1單克隆抗體可抑制中性粒細胞與上皮細胞黏附。實驗中鼠肺組織中ICAM-1及其受體表達含量在攻毒后1 d即開始升高，第4天達高峰[14]。在以往對呼吸道合胞病毒和腺病毒肺炎的研究中，炎癥細胞黏附是其肺部感染的重要環節，而ICAM-1與其結合是炎癥細胞黏附聚集的關鍵。ICAM-1正常呈低水平表達，受到炎癥因子刺激數小時后迅速表達，表達上調的ICAM-1與其白細胞表面受體相互作用介導了炎癥反應中白細胞跨內皮遷徙及想炎癥部位的積聚過程[15]。

A型流感病毒和呼吸道合胞病毒是導致嬰幼兒毛細支氣管炎和肺炎住院的主要的病原體之一。本研究結果顯示住院呼吸道合胞病毒性肺炎的平均年齡在8個月左右，A型流感病毒性肺炎的平均年齡在12個月左右，提示這兩種病原的肺炎住院兒童以嬰幼兒為主，尤其是12個月以下嬰兒，但男女無性別上的差異。FA組、兒童血清sICAM-1水平為（1312.8±756.2）μg/mL，RSV組兒童血清sICAM-1水平為（991.7±183.4）μg/mL，與正常對照組sICAM-1水平（852.3±170.8）μg/mL比較，差異有統計學意義，提示FA和RSV感染后氣道上皮和血管內皮受損，促發了炎性因子的釋放，sICAM-1就是其中之一，因此，在治療上宜選用抗黏附抗炎抑制炎性因子的藥物，以減輕或緩解病程。

[1]胡亞美，江載芳.諸福棠實用兒科學[M].第7版.北京：人民衛生出版社，2005：1180.

[2]董琳，李昌崇，陳小芳，等.呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎血清Th2類細胞因子及粘附分子水平的研究[J].中華兒科雜志，2002，40（4）：235-236.

[3]關秀茹，王優良，張萱，等.流感病毒與血管內皮細胞功能變化的體外實驗研究[J].中國動脈硬化雜志，2011，19（8）：641-644.

[4]陳一芳.哮喘兒童血清可溶性細胞間粘附分子-1測定與氯雷他定治療效應的觀察[J].浙江實用醫學，2000，5（6）：1-2.

[5]徐莉，崔文賢，瞿云，等.支原體肺炎患兒血清可溶性細胞間粘附分子-1及心肌酶譜聯合檢測的意義[J].中國婦幼保健，2013，28（17）：2723-2725.

[6]劉純義，金萍，楊艷霞.血清可溶性細胞間黏附分子-1與重癥肺炎的關系研究[J].中國當代兒科雜志，2007，9（6）：537.

[7]馬亞萍，肖延風.過敏性紫癜患兒血清人可溶性細胞間粘附分子-1水平的變化及臨床意義[J].中國醫藥指南，2011，9（33）：99.

[8]盧美萍.感染性肺炎新生兒血清可溶性細胞間粘附分子-1水平的變化[J].浙江醫學，2001，23（5）：274-275.

[9]羅運春，王強，張信良.哮喘兒童血清可溶性細胞間粘附分子-1和白介素-8質量濃度測定及其意義[J].中國實用兒科雜志，2006，21（2）：135-136.

[10]鄭忠生，陳潮欽，黃新蘇.非小細胞肺癌患者血清可溶性細胞間粘附分子-1的水平及臨床價值[J].河北醫學，2004，10（3）：196-198.

[11]諸留珍.兒童支氣管哮喘血清可溶性細胞間粘附分子-1的變化及其臨床意義[J].江蘇醫藥，2002，28（8）：595-596.

[12]盧美萍，孫眉月.新生兒敗血癥血清可溶性細胞間粘附分子1水平的變化[J].浙江大學學報：醫學版，2001，30（3）：119-121.

[13]羅冠瀛.支氣管哮喘患者血清可溶性細胞間粘附分子-1和白介素-4水平測定及其臨床意義[J].嶺南急診醫學雜志，2008，13（4）：249-250.

[14]羅宏.支氣管哮喘患者血清可溶性細胞間粘附分子-1水平及意義[J].山西醫科大學學報，2000，31（3）：222-223.

[15]潘建平.肺癌患者血清可溶性細胞間粘附分子-1與C-反應[J].浙江大學學報：醫學版，2000，29（4）：149-150.

The Expression of Solube Intercellular Adhesion Moleculet-1 with Children Suffered from Influenza-A and Respiratory Syncytial Virus Pneumonia

JIANG Wen-hui， ZHAO Ming-qi， CHEN YU， et al.//Medical Innovation of China，2015，12（01）：007-009

Objective： The expression and significance of serum soluble intercellular adhesion molecule-1 in children with influenza A virus pneumonia and respiratory syncytial virus pneumonia in -1， in order to guide the clinical treatment and prevention. Method： In our hospital from pneumonia in children， according to the reverse transcriptase polymerase chain reaction results were divided into FA group （A influenza virus positive） 36 cases， group RSV （respiratory syncytial virus positive） in 22 cases， at the same time in healthy children at our hospital physical examination 41 cases as control group， serum sICAM-1 were compared between the three groups children’s value. Result： In FA group and RSV group， serum sICAM-1 values were higher than those in the control group， there was significant difference （P＜0.05）. Conclusion： The expression of A increased the level of sICAM-1 influenza virus pneumonia and respiratory syncytial virus pneumonia in children， which is one of the important inflammatory airway inflammation in children， can provide clinical treatment with anti adhesion therapy and anti-inflammatory， inhibiting inflammatory factors to provide evidence.

Children； Influenza A virus； Respiratory syncytial virus； Pneumonia； Serum soluble intercellular adhesion molecule-1

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.01.003

2014-05-26） （本文編輯：王宇）

①廣州市婦女兒童醫療中心 廣東 廣州 510120

江文輝

First-author’s address： Guangzhou Women and Children Center， Guangzhou 510120， China