鎘對(duì)雞肝臟的影響

文│蔡洪波（遼寧省建平縣八家農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

鎘對(duì)雞肝臟的影響

文│蔡洪波（遼寧省建平縣八家農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料。1日齡健康海蘭公雞160只，常規(guī)飼養(yǎng)，至30日齡時(shí)進(jìn)行染毒試驗(yàn)。

2.試驗(yàn)方法。

（1）鎘毒性試驗(yàn)。160只30日齡海蘭公雞隨機(jī)分為2組，即對(duì)照組、加鎘組，每組80只，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，加鎘組飼喂基礎(chǔ)日糧＋氯化鎘150毫克/千克。分籠常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食，每日記錄飼料和飲水消耗，每7天稱(chēng)體重1次。自試驗(yàn)開(kāi)始的第15天、30天、45天、60天分別從對(duì)照組、加鎘組中取10只雞剖殺，分別采取肝臟組織樣品用于各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。試驗(yàn)期為60天，試驗(yàn)期內(nèi)觀察試驗(yàn)雞的臨床表現(xiàn)，并記錄之。

（2）臨床癥狀檢查。定期稱(chēng)重、觀察，收集各試驗(yàn)組雞的臨床癥狀，篩選出雞鎘中毒臨床指標(biāo)。

（3）組織樣品的采集與處理。心臟采血，放入潔凈試管，置于室溫下，自行析出血清，分裝備用。雞剖殺后，稱(chēng)取肝臟重量用于測(cè)定臟器系數(shù)。采取肝臟組織塊固定于10%中性福爾馬林溶液中，用于病理組織學(xué)的檢查。采取肝臟組織塊0.5克，快速勻漿用于抗氧化功能指標(biāo)的檢測(cè)。

（4）病理學(xué)檢查。

眼觀變化。常規(guī)剖檢，觀察肝臟病理變化，準(zhǔn)確記錄試驗(yàn)結(jié)果。

光鏡檢查。采取肝臟組織樣1.5厘米×1.5厘米×0.5厘米，10%中性福爾馬林溶液固定，按照常規(guī)方法制作病理石蠟切片，在C35AD型OLYMPUS生物學(xué)顯微鏡下觀察病理組織學(xué)變化，記錄結(jié)果。

（5）測(cè)定肝臟的臟器系數(shù)。肝臟臟器系數(shù)＝肝臟重（克）/體重（千克）。

（6）抗氧化功能指標(biāo)的測(cè)定。血清和肝臟組織勻漿中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性的檢測(cè)采用DTNB法；血清和肝臟組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）活性的檢測(cè)采用黃嘌呤氧化法；血清和肝臟組織勻漿中丙二醛（MDA）含量的測(cè)定采用硫化巴比妥酸法。

（7）試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SAS for Windows 6.12軟件。

二、結(jié)果與分析

1.臨床癥狀觀察。同對(duì)照組比較，試驗(yàn)至30日時(shí)，加鎘組雞出現(xiàn)較明顯的臨床癥狀，冠及肉髯萎縮，精神萎靡，跛行，飲食欲減退或廢絕，離群、蹲臥、嗜睡、腹瀉。40日時(shí)部分病例鼻孔流出多量的膿性黏液，可聽(tīng)見(jiàn)拉風(fēng)箱似的呼吸聲。多數(shù)病例嚴(yán)重下痢，初呈水樣稀便，然后轉(zhuǎn)為灰白色或黃白色黏稠物。至試驗(yàn)結(jié)束，可見(jiàn)跗關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腫大。

對(duì)照組羽毛光亮，精神狀態(tài)良好，飲食正常。

2.病理學(xué)檢查結(jié)果。

（1）病理解剖學(xué)檢查結(jié)果。加鎘組表現(xiàn)為：脾臟充血，萎縮，表面有白色纖維膜，皮質(zhì)與髓質(zhì)界限不明顯；胸腺萎縮；法氏囊萎縮充血、出血；右心擴(kuò)張，心肌變性；肝臟體積腫大質(zhì)脆，呈土黃色，膽囊腫大；肺臟實(shí)變被覆纖維素膜，呈紫紅色；氣囊壁增厚渾濁呈灰白色；胃腸黏膜充血，腸腔充滿黏稠淡黃色粥樣物，腹腔中有多量的淡黃色微渾濁的液體；腎腫大。

對(duì)照組器官形態(tài)無(wú)明顯異常變化。

（2）病理組織學(xué)檢查結(jié)果。加鎘組肝細(xì)胞脫落、變性，細(xì)胞壞死，胞漿內(nèi)脂肪變性，隨著染鎘時(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟損害加重，空泡樣變性增多，部分肝細(xì)胞壞死形成壞死灶。

對(duì)照組肝細(xì)胞發(fā)育正常，細(xì)胞核明顯，界限清晰。

3.肝臟臟器系數(shù)的測(cè)定結(jié)果。

由表1可以看出，各時(shí)間段對(duì)照組和加鎘組臟器系數(shù)均逐漸降低，但隨著染鎘時(shí)間的延長(zhǎng)，加鎘組臟器系數(shù)低于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著(P＜0.05)或差異極顯著（P＜0.01）。結(jié)果表明鎘能夠降低雞肝臟的臟器系數(shù)。

表1 肝臟的臟器系數(shù)的測(cè)定結(jié)果

4.抗氧化功能的測(cè)定結(jié)果。

（1）血清和肝臟組織勻漿中GSH-Px活性的測(cè)定結(jié)果。由表2、3可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)血清、肝臟中的GSH-Px活性由對(duì)照組至加鎘組依次降低，隨著時(shí)間延長(zhǎng)加鎘組呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系。在同一時(shí)間段對(duì)照組與加鎘組之間比較差異極顯著（P＜0.01）；30天后加鎘組各時(shí)間段之間差異極顯著（P＜0.01）。這表明鎘能夠降低雞體內(nèi)和肝臟中GSH-Px活性。

（2）血清和肝臟組織勻漿中SOD活性的測(cè)定結(jié)果。由表4、5可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)血清、肝臟中的SOD活性由對(duì)照組至加鎘組依次降低，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)加鎘組肝臟中的SOD活性逐漸下降。對(duì)照組與加鎘組間差異均極顯著（P＜0.01）；30天后加鎘組各時(shí)間點(diǎn)間差異極顯著（P＜0.01）。由此可見(jiàn)，鎘能夠降低雞體內(nèi)和肝臟中的SOD活性。

（3）血清和肝臟組織勻漿中MDA含量的測(cè)定結(jié)果。由表6、7可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)肝臟中MDA含量由對(duì)照組至加鎘組依次升高，隨著時(shí)間延長(zhǎng)加鎘組呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系。各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組與加鎘組之間差異均極顯著（P＜0.01）；鎘組在30天前差異不顯著，30天后各時(shí)間點(diǎn)間差異極顯著（P＜0.01）。這一結(jié)果表明鎘能夠增加雞體內(nèi)和肝臟內(nèi)MDA含量。

表2 血清中GSH-Px活性的測(cè)定結(jié)果NU/毫升

表3 肝臟中GSH-Px活性的測(cè)定結(jié)果NU/毫克.Pr

表4 血清中SOD活性的測(cè)定結(jié)果NU/毫升

表5 肝臟中SOD活性的測(cè)定結(jié)果NU/毫克.Pr

表6 血清中MDA含量的測(cè)定結(jié)果NU/毫升

表7 肝臟中MDA含量的測(cè)定結(jié)果NU/毫克.Pr

三、討論

1.雞鎘中毒模型的建立。為復(fù)制雞鎘中毒模型，本試驗(yàn)通過(guò)在其日糧中添加一定劑量的鎘，經(jīng)60天的試驗(yàn)，根據(jù)雞的臨床表現(xiàn)、剖檢變化、病理學(xué)、血液學(xué)和組織學(xué)指標(biāo)，表明雞鎘中毒模型復(fù)制成功。

2.鎘對(duì)雞肝臟毒性作用。本試驗(yàn)對(duì)雞肝臟病理解剖學(xué)檢查結(jié)果表明，加鎘組的肝臟表現(xiàn)為充血、出血，不同程度的腫脹，并有局灶性壞死。光鏡可見(jiàn)肝細(xì)胞核變形，細(xì)胞空泡樣變性，隨著染鎘時(shí)間的延長(zhǎng)，空泡樣變性越加明顯，并出現(xiàn)壞死灶。所觀察到的鎘對(duì)雞肝臟解剖學(xué)和組織學(xué)的損傷情況，可以表明鎘能夠通過(guò)損傷雞肝臟來(lái)影響其功能，發(fā)揮了毒性作用。

3.鎘對(duì)雞肝臟抗氧化系統(tǒng)功能的影響。GSH-Px是一種抗氧化酶類(lèi)，能夠分解過(guò)氧化物，去除細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)和有機(jī)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的毒物，以維持細(xì)胞膜的還原狀態(tài)，從而起到保護(hù)細(xì)胞膜的作用。SOD能夠清除細(xì)胞內(nèi)的氧離子等自由基，發(fā)揮抗氧化功能。MDA是自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用中形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物。因此，MDA的量常?？煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞受損的程度。

本試驗(yàn)結(jié)果表明鎘能夠影響血清及肝臟組織勻漿中GSH-Px、SOD活性和MDA含量，即隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，酶活性下降，MDA含量增加，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間效應(yīng)。正常動(dòng)物機(jī)體內(nèi)有比較完善的抗氧化系統(tǒng)，如GSH-Px、SOD等，可以保護(hù)組織細(xì)胞不受氧化物和自由基的損傷。本試驗(yàn)結(jié)果與之前報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果一致，可見(jiàn)鎘所導(dǎo)致的氧化脅迫是其發(fā)揮毒性機(jī)制的主要途徑。

四、結(jié)論

本試驗(yàn)以雞為試驗(yàn)動(dòng)物，在日糧中添加一定濃度的鎘，復(fù)制雞鎘中毒模型。通過(guò)對(duì)試驗(yàn)雞的臨床表現(xiàn)及肝臟的病理變化的觀察，同時(shí)進(jìn)行了肝臟的臟器系數(shù)和氧化脅迫等方面的檢測(cè)。研究結(jié)果表明鎘能夠?qū)е码u肝臟發(fā)生損傷，并且誘導(dǎo)雞肝臟發(fā)生氧化脅迫，導(dǎo)致雞體內(nèi)血清和肝臟中GSH-Px和SOD活性降低、MDA含量升高，破壞機(jī)體清除自由基及抗氧化防御系統(tǒng)，造成雞肝臟發(fā)生氧化損傷。加鎘組在病理組織學(xué)上改變的差異為判斷和分析鎘中毒提供了依據(jù)。