宮月舒膠囊對大鼠子宮平滑肌收縮的影響

方 艷， 張 兵， 應(yīng)小平， 王小平， 李水花

（1.陜西中醫(yī)藥大學，陜西咸陽712046；2.陜西摩美得制藥有限公司，陜西咸陽712000；3.渭南職業(yè)技術(shù)學院，陜西渭南714000）

宮月舒膠囊對大鼠子宮平滑肌收縮的影響

方 艷1， 張 兵2， 應(yīng)小平1， 王小平1， 李水花3*

（1.陜西中醫(yī)藥大學，陜西咸陽712046；2.陜西摩美得制藥有限公司，陜西咸陽712000；3.渭南職業(yè)技術(shù)學院，陜西渭南714000）

目的 觀察復(fù)方中藥宮月舒膠囊 （肉桂、川芎、當歸、延胡索、白芥子、三七、沉香）對大鼠離體及家兔在體子宮平滑肌收縮的影響。方法 選用健康未孕雌性成年大鼠40只，隨機分為正常對照組、縮宮素組及宮月舒膠囊提取液大、中、小劑量藥組；人工造成動情期，以提高子宮的敏感性。40 h后，處死大鼠并取出子宮，置于縮宮素和宮月舒膠囊提取液中，觀察離體子宮張力、收縮強度、頻率和活動力，比較單用縮宮素和加用受試藥后對以上各指標的影響。選用健康未孕雌性成年家兔40只，隨機分為垂體后葉素模型對照組、痛經(jīng)寶顆粒陽性藥物組及宮月舒膠囊大、中、小劑量藥組；麻醉后取一側(cè)剝離周圍組織的子宮角，給藥后，觀察子宮平滑肌收縮頻率、痙攣性收縮持續(xù)時間、峰電位數(shù)、及峰電位強度；比較單用垂體后葉素和加用受試藥后對以上各指標的影響。結(jié)果 宮月舒膠囊提取液可通過降低離體大鼠子宮平滑肌的收縮張力、收縮強度、收縮頻率及活動力，從而不同程度顯著地對抗縮宮素致大鼠離體子宮平滑肌的強烈收縮，并呈一定的量效及時效關(guān)系；宮月舒膠囊亦可通過縮短在體家兔子宮平滑肌痙攣收縮持續(xù)時間、減少峰電位數(shù)及減弱峰電位強度，從而對抗垂體后葉素誘發(fā)在體家兔子宮平滑肌痙攣的作用，并呈一定的量效關(guān)系。結(jié)論 宮月舒膠囊臨床上可用于治療痛經(jīng)。

宮月舒膠囊；子宮平滑肌；縮宮素；垂體后葉素

痛經(jīng)是婦科常見病和多發(fā)病，運用不同的調(diào)查方法，其發(fā)病率20%～90%［1-2］。于經(jīng)期或經(jīng)期前后出現(xiàn)的癥狀，如周期性下腹疼痛，痛連腰骶、會陰、肛門、大腿內(nèi)側(cè)，常伴有面色蒼白，冷汗淋漓，四肢厥逆，惡心嘔吐，嚴重者甚至可以影響到工作和生活。目前，西藥治療痛經(jīng)，主要為鎮(zhèn)痛、解痙等對癥處理，及內(nèi)分泌、擴張宮頸等治療方法，但其副作用明顯，患者難以接受且復(fù)發(fā)率高，難以根治［3］。故研制治療痛經(jīng)的中藥新藥是必須的。本文主要從宮月舒膠囊對縮宮素致大鼠離體子宮平滑肌強烈收縮及垂體后葉素誘發(fā)在體家兔子宮平滑肌痙攣的影響進行藥效學研究，具體報告如下。

1 材料

1.1 樣品及試劑 宮月舒膠囊粉（2.33 g生藥/g粉）和宮月舒膠囊提取液 （100%，w/w）均由陜西摩美得制藥有限公司提供，批號分別為951207和960810，痛經(jīng)寶顆粒由河南省宛西制藥廠生產(chǎn)，批號940915；將宮月舒膠囊分別用純凈水配置成1.5 g/3 mL、0.5 g/3 m L、0.15 g/3 m L高、中、低

質(zhì)量濃度的混懸液，將痛經(jīng)寶顆粒用純凈水配置成1 g/3 m L的混懸液；己烯雌酚注射液（2 mg/m L）（廣州明興制藥廠，批號940721-1）；苯甲酸雌二醇注射液 （2 mg/mL） （上海第九制藥廠，批號941101）；縮宮素注射液 （10μg/mL，批號930330），垂體后葉素注射液 （10 U/m L，批號9501052），均由上海生物化學制藥廠生產(chǎn)；ASP、鹽酸腎上腺素注射液 （10μg/mL）等。

1.2 實驗動物 SD大鼠及家兔均由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司購進，清潔型，合格證號SCXK（滬）-476566。

1.3 實驗儀器 DC-00型離體器官測定儀，JL-3B三筆計錄儀，XD-1型放大器等。

2 方法

2.1 對縮宮素致大鼠離體子宮強烈收縮的影響［4-7］選用體質(zhì)量210～260 g的健康雌性成年SD大鼠40只。實驗分空白對照組，縮宮素模型對照組（縮宮素300 U/L），宮月舒膠囊大劑量組 （縮宮素300 U/L+宮月舒提取液0.4 g/30 m L）、宮月舒提取液中劑量組（縮宮素300 U/L+宮月舒提取液0.2 g/30 mL）及宮月舒提取液小劑量組 （縮宮素300 U/L+宮月舒提取液0.1 g/30 mL）。實驗前40 h，取未孕大鼠皮下注射 （SC）己烯雌酚 （0.2 mg/100 g體質(zhì)量），人工造成動情期，以提高子宮的敏感性。實驗時，頸椎脫臼處死大鼠，剖腹，取出子宮，立即置于盛有戴克隆氏（De-Jalonssol）營養(yǎng)液的玻璃平皿中，剝離附著子宮壁的結(jié)締組織和脂肪組織，剪取子宮約2 cm，陰道端結(jié)扎并固定于L型管的小鉤上，置于盛有營養(yǎng)液的溶槽中，另一端與肌力換能器相連接。恒溫水浴保持工作溫度37℃，并不斷用增氧泵向營養(yǎng)液中通O2，60～80個氣泡/min，穩(wěn)定30 min后，記錄一段正常曲線（量程定為1，走紙速度5 mm/min），再加入縮宮素和受試藥，觀察離體子宮張力、收縮強度、頻率和活動力，比較單用縮宮素和加用受試藥后對以上各指標的影響。

2.2 對家兔在體子宮平滑肌肌電活動的影響［8-9］取 （2.57±0.2）kg的健康成年雌性家兔40只，隨機均分5組：宮月舒膠囊大 （1.5 g/kg）、中（0.5 g/kg）、小（0.15 g/kg）劑量試藥組。分別用高、中、低質(zhì)量濃度宮月舒膠囊混懸液3 mL/kg灌胃；陽性藥物對照組 （痛經(jīng)寶顆粒1 g/kg），用配制的痛經(jīng)寶顆粒混懸液3 mL/kg灌胃；垂體后葉素模型對照組 （純凈水3 mL/kg灌胃）。實驗時，用3%戊巴比妥靜脈注射麻醉后，剖腹，找出一側(cè)子宮角，剝離周圍組織，用在體子宮平滑肌電位的細胞外記錄方法，將雙電極插入子宮漿膜下，二電極距離0.5 cm，然后皮膚切口處插一針頭，作無效電極，待穩(wěn)定30 min后，用XD-1型放大器和JL-3B記錄儀記錄正常肌電（紙速1 mm/s，時間常數(shù)10 s，標準電壓1 mV）。然后靜脈注射垂體后葉素注射液0.5 U/kg（10 s）30 min，待垂體后葉素作用消失后，灌胃給藥 （3 mL/kg），給予相應(yīng)藥物后，觀察對子宮肌電的影響，待40～45 min藥物吸收后，再靜脈注射等量垂體后葉素。記錄時間均為靜脈注射垂體后葉素即刻至5 min。觀察指標為收縮頻率（f簇/5min）、痙攣性收縮持續(xù)時間（s/次）、峰電位數(shù)（P.V.N，次/5 min）及峰電位強度（P.V.H，mV），比較單用垂體后葉素和加用受試藥后對以上各指標的影響。

3 統(tǒng)計學處理

4 結(jié)果

4.1 對縮宮素致大鼠離體子宮強烈收縮的影響

正常子宮平滑肌單加入縮宮素后，收縮強度、頻率均明顯增加。約10 min作用達高峰，隨后基本保持穩(wěn)定，直至40 min，各項指標仍處于較高水平。再加入不同量宮月舒膠囊提取液10 min，均可不同程度地對抗縮宮素所致的子宮平滑肌強烈收縮，且隨受試藥量的增加作用增強 （表1）。盡管宮月舒膠囊提取液0.1 g/30 mL組與單用縮宮素組比，對大鼠離體子宮張力和收縮強度變化均無統(tǒng)計學意義，但該質(zhì)量濃度仍可使收縮頻率明顯降低，故而子宮活動力 （強度×頻率）減弱，與單縮宮素組比較有極顯著差異 （P＜0.01）；從時效上看 （表2），宮月舒膠囊提取液0.4 g/30 mL和0.2 g/30 mL于藥后10 min即可明顯對抗縮宮素引起的子宮平滑肌各指標的提高，直至30 min，與單縮宮素組比較仍有顯著或極顯著差異 （P＜0.05，P＜0.01）。宮月舒膠囊提取液具有對抗縮宮素致大鼠

離體子宮平滑肌強烈收縮的作用。即可使子宮平滑肌的收縮強度、頻率及活動力明顯降低，但與痛經(jīng)寶顆粒比較無顯著差異。

表1 宮月舒膠囊對大鼠離體子宮平滑肌收縮的量效關(guān)系Tab.1 Dose-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ieson the contractions of uterine smoothmuscIe in rats in vitron=8）

表1 宮月舒膠囊對大鼠離體子宮平滑肌收縮的量效關(guān)系Tab.1 Dose-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ieson the contractions of uterine smoothmuscIe in rats in vitron=8）

注：與空白對照組比較，△P＜0.01；與縮宮素模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與宮月舒膠囊小劑量組比較，□P＜0.05，□□P＜0.01；與宮月舒膠囊中劑量組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組 別 張力/cm 強度/cm 頻率/（次.min-1） 活動力/（頻率×強度）0.35±0.32 9.50±5.98 3.485±2.647縮宮素模型對照組 1.70±1.61△ 8.75±1.29△ 21.5±8.38△ 172.0±56.61△宮月舒膠囊小劑量組 0.58±0.41* 7.76±2.81 12.0±1.85** 91.24±28.77**宮月舒膠囊中劑量組 0.25±0.16*□ 4.61±1.27**□ 10.0±3.85** 45.00±18.87**□□宮月舒膠囊大劑量組 0.07±0.11**□□# 2.70±2.49**□□ 6.50±4.31**□□ 11.29±7.38***□□##空白對照組0

表2 宮月舒膠囊對大鼠離體子宮平滑肌收縮的時效關(guān)系Tab.2 Tim e-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ies on the contractions of uterine smooth muscIe in rats in vitros，n=8）

表2 宮月舒膠囊對大鼠離體子宮平滑肌收縮的時效關(guān)系Tab.2 Tim e-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ies on the contractions of uterine smooth muscIe in rats in vitros，n=8）

注：與縮宮素模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與宮月舒膠囊小劑量組比較，□P＜0.05，□□P＜0.01；與宮月舒膠囊中劑量組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

不同時間測定值10 min 20 min 30 min張力/cm 縮宮素模型對照組指標 組 別1.70±1.61 1.25±1.31 1.36±1.11宮月舒膠囊小劑量組 0.58±0.41 0.29±0.21 0.22±0.19*宮月舒膠囊中劑量組 0.25±0.16*□ 0.24±0.18 0.19±0.18*宮月舒膠囊大劑量組 0.07±0.11*□□# 0.07±0.01*□# 0.06±0.12**強度/cm 縮宮素模型對照組 8.75±1.29 9.02±1.61 8.76±1.70宮月舒膠囊小劑量組 7.76±2.81 6.47±3.12 5.46±3.10宮月舒膠囊中劑量組 4.61±1.27**□ 4.60±1.59** 4.94±1.96**宮月舒膠囊大劑量組 2.70±2.49**□□ 2.27±2.21**□□# 2.24±2.11**□#頻率/（次.min-1） 縮宮素模型對照組 21.50±8.38 17.63±6.76 16.25±6.59宮月舒膠囊小劑量組 12.00±1.85** 11.67±1.51* 12.33±3.20*宮月舒膠囊中劑量組 10.00±3.85** 9.63±3.70* 8.63±3.82*宮月舒膠囊大劑量組 6.50±4.31**□□ 5.00±3.42**□□# 4.88±3.44**□□活動力 縮宮素模型對照組 172.0±56.61 152.64±51.93 135.08±44.53宮月舒膠囊小劑量組 91.24±28.77** 71.82±23.21** 62.93±24.36**宮月舒膠囊中劑量組 45.00±18.87**□□ 41.74±15.80**□□ 39.99±20.68**宮月舒膠囊大劑量組 11.29±7.38**□□## 12.11±10.31**□□## 13.28±11.08**□□##

4.2 對家兔在體子宮平滑肌肌電活動的影響 兔正常子宮肌電呈有規(guī)律性慢波或出現(xiàn)快波峰形電位，少數(shù)呈無規(guī)律性或出現(xiàn)低幅單個或簇狀峰形電位。從表3～6可知，各組間，動物子宮肌電活動頻率無明顯改變，但從其它三項指標看，大、中劑量的宮月舒膠囊和痛經(jīng)寶顆粒均可明顯對抗垂體后葉素所致子宮的痙攣性收縮，即可使痙攣收縮持續(xù)時間縮短，峰電位數(shù)減少及峰電位強度減弱，與單用垂體后葉素組比較，在統(tǒng)計學上有顯著意義。宮月舒膠囊具有對抗垂體后葉素誘發(fā)兔在體子宮平滑肌痙攣的作用，即可使子宮平滑肌肌電的峰電位強度降低，峰電位數(shù)明顯減少以及痙攣持續(xù)時間縮短，但與痛經(jīng)寶顆粒比較無顯著差異。

表3 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響—頻率Tab.3 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the frequencies of uterinem yoeIectric activities in rabbitn=8）

表3 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響—頻率Tab.3 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the frequencies of uterinem yoeIectric activities in rabbitn=8）

正常 靜脈注射垂體后葉素 用藥后模型對照組組 別 f/（簇.5 min-1）3.20±0.79 4.11±0.93 3.67±1.23宮月舒膠囊小劑量組 2.50±0.55 3.88±1.89 3.25±1.17宮月舒膠囊中劑量組 3.50±0.76 4.88±1.46 4.00±1.20宮月舒膠囊大劑量組 3.00±1.69 3.75±1.17 3.30±1.16陽性藥物對照組3.50±1.07 4.63±1.77 4.25±1.75

表4 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響—痙攣持續(xù)時間Tab.4 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the spasm durations in uterinem yoeIectric activities in rabbits

表4 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響—痙攣持續(xù)時間Tab.4 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the spasm durations in uterinem yoeIectric activities in rabbits

注：與模型對照組比較，**P＜0.01；與宮月舒膠囊小劑量組比較，△△P＜0.01；與宮月舒膠囊中劑量組比較，□□P＜0.01

正常 靜脈注射垂體后葉素 用藥后 變化值模型對照組組 別痙攣持續(xù)時間/（s.次-1）11.70±11.44 33.42±22.41 36.45±26.91 3.03±9.11宮月舒膠囊小劑量組 12.88±14.21 35.86±18.86 34.46±22.09 -1.40±5.86宮月舒膠囊中劑量組 11.20±5.19 30.50±18.55 21.48±16.65 -9.02±3.87**△△宮月舒膠囊大劑量組 11.17±7.99 44.65±17.16 12.44±7.32 -32.21±15.43**△△□□陽性藥物對照組 11.94±10.66 42.67±22.30 21.46±12.42 -21.21±17.46**△△

表5 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響-峰電位數(shù)Tab.5 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the numbers of spike potentiaIin uterinemyoeIectric activities in rabbitsn=8）

表5 宮月舒膠囊對兔子宮肌電的影響-峰電位數(shù)Tab.5 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the numbers of spike potentiaIin uterinemyoeIectric activities in rabbitsn=8）

注：與模型對照組比較，**P＜0.01；與宮月舒膠囊小劑量組比較，△△P＜0.01

組 別峰電位數(shù)/（≥0.1 mv個.5 min-1）正常 靜脈注射垂體后葉素 用藥后 變化值（△）21.56±19.73 65.10±52.43 62.00±49.21 -3.10±14.90宮月舒膠囊小劑量組 13.43±7.04 41.14±23.60 41.86±28.46 0.71±8.12宮月舒膠囊中劑量組 19.29±13.65 60.29±37.89 30.0±16.36 -30.29±23.94**△△宮月舒膠囊大劑量組 22.25±67.15 67.75±33.10 33.00±21.47 -34.75±17.73**△△陽性藥物對照組 18.80±9.74 59.80±49.41 29.70±25.76 -30.10±41.28模型對照組**△△

表6 宮月舒膠囊對兔子宮肌電約影響-峰電位強度Tab.6 E ffects of Gongyueshu Capsu Ies on the strengths of spike potentia Iin uterinem yoeIectric activities in rabbitsn=8）

表6 宮月舒膠囊對兔子宮肌電約影響-峰電位強度Tab.6 E ffects of Gongyueshu Capsu Ies on the strengths of spike potentia Iin uterinem yoeIectric activities in rabbitsn=8）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與宮月舒膠囊小劑量組比較，△P＜0.05；與宮月舒膠囊中劑量組比較，□P＜0.05

峰電位強度/mV正常 靜脈注射垂體后葉素 用藥后 變化值模型對照組組 別2.05±0.55 2.95±0.60 2.75±0.49 -0.20±0.35宮月舒膠囊小劑量組 1.83±1.08 3.07±0.78 2.86±1.07 -0.21±0.72宮月舒膠囊中劑量組 1.86±0.90 3.43±0.38 2.57±0.54 -0.86±0.35*宮月舒膠囊大劑量組 2.06±0.32 3.69±1.28 2.44±0.56 -1.25±0.85**△□陽性藥物對照組 1.95±0.50 3.40±2.04 2.65±1.65 -0.75±0.82*

5 討論

西醫(yī)認為原發(fā)性痛經(jīng)與子宮內(nèi)膜前列腺素合成、分泌關(guān)系密切，從而引起子宮平滑肌不協(xié)調(diào)收縮、甚至痙攣性收縮，造成子宮供血不足，導(dǎo)致厭氧代謝物積貯，刺激痛覺神經(jīng)元而引起痛經(jīng)。治療主要采用解痙鎮(zhèn)痛劑、前列腺素合成酶抑制劑、鈣離子通道阻滯劑等［10］。祖國醫(yī)學認為，痛經(jīng)的病位在沖任、胞宮，與腎、脾、肝三臟密切相關(guān)，變化在氣血，表現(xiàn)為痛癥［10］。主要是由于血瘀停滯、瘀阻胞宮、胞脈，使經(jīng)行滯澀，不通則痛。宮月舒膠囊是根據(jù) 《婦人大全良方》的 “芎歸散”，《產(chǎn)科發(fā)蒙》的 “芎歸加桂湯”及 《醫(yī)林改錯》的“少腹逐瘀湯”三方之方義、方藥化裁而成。其處方由肉桂、川芎、當歸、延胡索、白芥子、三七、沉香7味藥組成。方中肉桂性辛甘，歸腎、脾心、肝經(jīng)，具有補火助陽、散熱止痛、溫通經(jīng)脈的功效［11］；川芎性辛溫，歸肝、膽、心包經(jīng)，具有活血行氣，祛風止痛之功效［12］；當歸性溫，味甘辛，歸心、肝、脾經(jīng)，具有補血和血，調(diào)經(jīng)止痛，潤燥滑腸的作用［13］。諸藥合用具有溫經(jīng)散寒，活血止痛之功效。現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，桂枝湯中分離獲得的單體成分桂皮醇，能下調(diào)白細胞介素IL-1刺激微血管內(nèi)皮細胞rCMEC釋放升高的前列腺素PGE2

［14］；川芎提取物川芎嗪不僅是一種鈣離子拮抗劑［13］，還可抑制神經(jīng)病理痛大鼠的機械痛敏［15］；當歸精油對催產(chǎn)素或高鉀去極化液中Ca2+

所致的子宮平滑肌收縮均有抑制作用［6］。亦有研究表明，縮宮素不僅直接作用于子宮平滑肌細胞引起子宮收縮，而且還同時刺激內(nèi)膜細胞釋放前列腺素。縮宮素和前列腺素可從不同機制引起子宮平滑肌痙攣性收縮，是較公認的在體子宮痙攣 （類痛經(jīng)反應(yīng)）病理模型［16］。本研究通過動物體內(nèi)、體外實驗，結(jié)果表明，宮月舒膠囊可對抗縮宮素致大鼠離體子宮平滑肌的強烈收縮及垂體后葉素誘發(fā)在體家兔子宮平滑肌的痙攣，進一步為宮月舒膠囊臨床上治療痛經(jīng)提供了理論依據(jù)。

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Effect of Gongyueshu Capsu Ies on contraction of uterine sm ooth m uscIe in rats

FANG Yan1， ZHANG Bing2， YING Xiao-ping1， WANG Xiao-ping1， LIShui-hua3*

（1.Shaanxi Gollege of Ghinese Medicine，Xianyang 712046，Ghina；2.Shaanxi PharmaceuticalGo.，Ltd，Xianyang 712000，Ghina；3.Weinan Vocational and Technical Gollege，Weinan 714000，Ghina）

Gongyueshu Capsules；uterine smooth muscle；pitocin；pituitrin

R285.5

A

1001-1528（2015）11-2362-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.006

2015-03-18

陜西省科技廳自然科學基金資助項目 （2011k16-05-03）

方 艷 （1976—），女，碩士，副教授，從事中西醫(yī)結(jié)合臨床基礎(chǔ)研究。Tel： （029）38185117，E-mail：fangyan9494@ 163.com

*通信作者：李水花 （1973—），女，碩士，副教授，從事中西醫(yī)結(jié)合臨床基礎(chǔ)研究。Tel：（0913）2085062，E-mail：26-35269371@ qq.com