HPLC法同時測定山梔茶中的3種苷類成分

喬 里， 汪石麗， 關煥玉， 廖尚高， 劉麗娜， 李勇軍*

（1.貴州醫科大學貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州貴陽550004；2.貴州醫科大學民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心，貴州貴陽550004；3.貴州醫科大學附屬醫院，貴州貴陽550004）

HPLC法同時測定山梔茶中的3種苷類成分

喬 里1，3， 汪石麗1， 關煥玉2， 廖尚高2， 劉麗娜1， 李勇軍2*

（1.貴州醫科大學貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州貴陽550004；2.貴州醫科大學民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心，貴州貴陽550004；3.貴州醫科大學附屬醫院，貴州貴陽550004）

目的 建立HPLC法同時測定山梔茶Pittosporum glabratum Lindl.中3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素-4，4′-O-雙-β-D-葡萄糖苷、異落葉松樹脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷的含有量。方法 山梔茶提取液分析采用Diamosil C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫；體積流量1.0 mL/min；柱溫30℃；檢測波長210 nm。結果 這3種成分均達到基線分離，線性關系良好 （r≥0.999 9），加樣回收率在98.5%～100.5%之間，RSD均小于3%。結論 該方法靈敏準確、可靠穩定，可用于山梔茶藥材的質量評價。

山梔茶；3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷；丁香脂素-4，4′-O-雙-β-D-葡萄糖苷；異落葉松樹脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷；HPLC

山梔茶為海桐花科海桐花屬植物光葉海桐Pittosporum glabratum Lindl.的干燥根［1］，收載于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中，具有鎮靜、散瘀、止痛等作用，常用于神經衰弱、風濕性關節炎等疾病［1-7］。文獻 ［8-10］ 報道，山梔茶主要含有三萜類、木脂素類、環烯醚萜類等成分，其醇提取物具有鎮痛和降壓作用［11-12］。目前，尚無關于山梔茶質量控制方面的文獻報道，本實驗根據該植物具有鎮靜、散瘀止痛的效果，選用鎮痛模型來篩選其活性部位，并利用HPLC法對該部位的化學成分進行了研究，結果從中分離得到具有代表性和專屬性的苷類成分，分別為3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷 （S1）、丁香脂素-4，4′-O-雙-β-D-葡萄糖苷 （S2）、異落葉松樹脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷 （S3），該方法可用于山梔茶的質量評價。

1 儀器與試藥

Prominenece UFLC超快速HPLC色譜儀，包括LC-20AD二元梯度泵、SIL-20A自動進樣器、DGU-20A3在線真空脫氣機、SPD-20A紫外檢測器、CTO-20A柱溫箱、LC-Solution色譜工作站（日本島津公司）；Water Purifier超純水機（四川沃特爾科技發展有限公司）；AE240電子天平 （十萬分之一，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素-4，4′-O-雙-β-D-葡萄糖苷、異落葉松樹脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷（均為本實驗室自制，經核磁共振光譜鑒定，純度以峰面積歸一化法計算，均大于98.0%）。乙腈和磷酸均為化學純、其余試劑均為分析純 （國藥集團化學試劑有限公司）。山梔茶采收于貴州省，經貴陽醫學院生藥學教研室龍慶德副教授鑒定為光葉海桐Pittosporum glabratum Lindl.的干燥根和莖枝。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；流動相為乙腈 （A）-0.1%磷酸水溶液 （B），梯度洗脫 （0～16 min，12%A；16～19 min，12%～15%A；19～39 min，15%A）；體積流量1.0 mL/min；柱溫30℃；紫外檢測波長210 nm；進樣量10μL。在該色譜條件下，各指標成分色譜峰的分離度均大于1.5，見圖1。

2.2 對照品溶液的制備和線性關系考察 精密稱取S1、S2、S3適量，加入50%甲醇制成質量濃度分別為45.50、63.50、9.05μg/mL的混合對照品溶液，即得。然后，分別精密吸取1、2、4、8、16、22μL進樣，在 “2.1”項色譜條件下測定，以各成分峰面積為縱坐標 （Y），進樣量 （μg）為橫坐標 （X），進行回歸計算，結果S1、S2、S3的回歸方程和相關系數分別為Y=1.80×106X-6.07×104（r= 0.999 9）、Y=3.40×106X-1.47×105（r= 0.999 9）、Y=2.10×106X-4.61×104（r= 0.999 9）。由此可知，S1、S2、S3分別在0.045 5～1.001、0.063 5～1.397、0.009 05～0.199 1μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取藥材 （批號20121112）粉末 （過40目篩）1.0 g，加入50%甲醇20 mL，稱定質量，加熱回流提取1 h，放冷，

再稱定質量，50%甲醇補足減失質量，振搖混勻，過濾，取續濾液1.5 mL，離心10 min（10 000 r/min），取上清液，即得。

2.4 精密度、穩定性、重復性試驗 在 “2.1”項色譜條件下，對同一供試品溶液連續測定6次，計算出S1、S2、S3的RSD分別為0.7%、0.6%、0.7%，表明儀器精密度良好。

取同一供試品溶液適量，在 “2.1”項色譜條件下分別于0.5、1、2、4、8、24 h內測定，記錄峰面積，計算出S1、S2、S3的RSD分別為1.2%、0.8%、1.0%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

精密稱取同一批號藥材6份，每份1.0 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在 “2.1”項色譜條件下進行測定，計算出S1、S2、S3的RSD分別為1.3%、0.5%、1.1%，表明該方法重復性良好。

2.5 加樣回收試驗 精密稱取含有量已知的同一批號藥材 （批號20121112）6份，每份0.5 g，分別精密加入含有3種被測成分 （S1 0.011 375 mg/mL、S2 0.017 725 mg/mL、S3 0.003 475 mg/mL）的混合對照品溶液20 mL，按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，在 “2.1”項色譜條件下測定，計算各成分的含有量和回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n=6）Tab.1 Resu It of recovery tests（n=6）

2.6 樣品測定 精密稱取不同產地藥材粉末18批，每批1.0 g，按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，在 “2.1”項色譜條件下測定，根據外標法進行計算，結果見表2。

表2 樣品測定結果Tab.2 Determ ination resu It of sam p Ies

3 討論

3.1 樣品溶液制備 本實驗分別以甲醇 （100%、

70%、50%、30%）、70%乙醇為溶劑，用索氏、回流和超聲法進行提取，并考察了提取時間。結果發現，50%甲醇回流提取1 h時效率最高。

3.2 檢測波長的選擇 本實驗采用DAD檢測器對待測成分在190～400 nm波長范圍之內進行紫外掃描，發現3個化合物在210 nm處均有較大吸收，而且峰形好、干擾少、色譜圖較理想，故選擇210 nm作為檢測波長。

3.3 流動相的選擇 本實驗考察了不同流動相（甲醇-0.1%磷酸水溶液、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-水）對各成分峰型及分離度的影響，發現含甲醇的流動相對S3不能有效分離，并且加入含磷酸的流動相時，基線更平穩。最終選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液作為流動相。

［1］ 貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材民族藥材質量標準：2003年版［S］.貴陽：貴州科技出版社，2003：48.

［2］ 中藥辭海編輯委員會.中藥辭海［M］.北京：中國醫藥科技出版社，1993：489.

［3］ 《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編［M］.北京：人民衛生出版社，1996.

［4］ 國家中醫藥管理局 《中華本草》編委會.中華本草：第4卷［M］.上海：上海科學技術出版社，1999：61.

［5］ 國家中醫藥管理局 《中華本草》編委會.中華本草：苗藥卷［M］.上海：上海科學技術出版社，2004：261.

［6］ 江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］.上海：上海科學技術出版社，2001，184.

［7］ 中國科學院 《中國植物志》編輯委員會.中國植物志：第35卷［M］.北京：科學出版社，1979：11.

［8］ 聶田田，趙煥新，白 虹，等.光葉海桐根的化學成分［J］.中國天然藥物，2011，9（3）：180-184.

［9］ 趙煥新，聶田田，郭煥杰，等.光葉海桐根中的一個新三萜類化合物［J］.藥學學報，2013，48（6）：887-890.

［10］ Zhao H X，Nie T T，Guo H J，et al.Two new neolignan glycosides from Pittosporum glabratum Lindl.［J］.Phytochem Lett，2012，5（2）：240-243.

［11］ 楊華中，周玉英，肖永新，等.光葉海桐莖葉鎮痛作用實驗研究［J］.中國現代醫學雜志，1996，6（3）：14-15.

［12］ 肖永新，楊華中，周玉英，等.光葉海桐莖葉總皂甙（SPGL）對心肌收縮力及血壓的影響［J］.中藥藥理與臨床，1992，8（5）：29-30.

SimuItaneous determ ination of three gIycosides in Pittosporum glabratum by HPLC

QIAO Li1，3， WANG Shi-li1， GUAN Huan-yu2， LIAO Shang-gao2， LIU Li-na1， LIYong-jun2*

（1.Guiyang Medical University，Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，Guiyang 550004，Ghina；2.Guiyang MedicalUniversity，Engineering Research Genter for the Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Ghinese Medicine，Ministry of Education，Guiyang 550004，Ghina；3.The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Ghina）

AIM To establish an HPLCmethod for simultaneously determining the contents of 3，4，5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside，syringaresinol-4，4′-bis-O-β-D-glucopyranoside and isolariciresinol 9′-O-β-D-glucopyranoside in Pittosporum glabratum Lindl.METHODS The analysis of P.glabratum extractwas performed on Diamonsil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）with gradient elution，mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid aqueous solution，flow rate was1.0 mL/min，detection wavelength was set at210 nm，and column temperaturewasmaintained at30℃.RESULTS These three constituents reached the baseline separationswith good linear relationships（r≥0.999 9），whose average recoverieswere in the ranges of 98.5%-100.5%，and RSDswere all less than 3%.CONCLUSION Thismethod is sensible，accurate，reliable and stable，which can be used for the quality evaluation of P.glabratum.

Pittosporum glabratum Lindl.；3，4，5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside；syringaresinol-4，4′-bis-O-β-D-glucopyranoside；isolariciresinol 9′-O-β-D-glucopyranoside；HPLC

R284.1

A

1001-1528（2015）11-2448-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.024

2014-07-02

國家科技支撐計劃課題 （2013BAI11B01）；貴州省科學技術基金項目 （20102217）；貴州省中藥現代化科技產業研究開發專項 （黔科合中藥字 ［2013］5062，黔科合重G字 ［2013］4001）；貴州醫學院院基金 （2012021號）

喬 里（1988—），男，碩士，研究方向為中藥質量標準。Tel：15186975613，E-mail：rootulysses@aliyun.com

*通信作者：李勇軍 （1973—），男，碩士，教授，研究方向為藥效物質基礎、中藥新藥制備工藝及質量標準。Tel：（0851）6908468，E-mail：liyongjun026@126.com