腺梗豨薟草乙酸乙酯部位化學(xué)成分的研究

許鳳清， 劉金旗， 劉叢彬， 周 娟， 徐 冉

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽合肥230012）

腺梗豨薟草乙酸乙酯部位化學(xué)成分的研究

許鳳清， 劉金旗， 劉叢彬， 周 娟， 徐 冉

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽合肥230012）

目的 研究腺梗豨薟草Siegesbeckia pubescens Makino乙酸乙酯部位的化學(xué)成分。方法 該部位采用硅膠、Sephadex LH-20、MCI、RP-18以及HPLC色譜柱進(jìn)行分離純化，1H-NMR、13C-NMR結(jié)合報道文獻(xiàn)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果 從中分離鑒定出7個化合物，分別為16βH-17-羥基-貝殼杉烷-19-羧酸 （1）、對映-16βH，17，18-二羥基-貝殼杉烷-19-羧酸（2）、對映-16β，17-二羥基-貝殼杉烷-19-羧酸 （3）、18-乙酰基-豨薟酸 （4）、3，7-二甲氧基槲皮素 （5）、3-甲氧基槲皮素 （6）和奇壬醇 （7）。結(jié)論 化合物1和6為首次從該植物里分離得到。

腺梗豨薟草；乙酸乙酯部位；化學(xué)成分；分離鑒定

豨薟草為常用中藥，始載于唐代 《新修本草》，具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、解毒之功效，用于風(fēng)濕痹痛、筋骨無力、腰膝酸軟、四肢酸軟、半身不遂、風(fēng)疹濕瘡等癥［1］，其性味苦寒，入肝、腎經(jīng)，早期主要用于治療急慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和腰腿痛，療效較好。后來，其用途被逐漸擴(kuò)大，目前臨床上常用豨薟草治療冠心病［2-3］、高血壓［4-5］、腦血管意外后遺癥［6］等病癥，并取得了理想的效果。另外，它還有較好的抗血栓作用［7-8］。本實驗在前期工作［9-11］的基礎(chǔ)上，為尋找腺梗豨薟草的抗血栓活性成分，對該植物進(jìn)行化學(xué)成分研究，結(jié)果從其乙酸乙酯部位中分離出4個對映-貝殼杉烷型二萜（1～4）、2個黃酮類化合物 （5～6）和1個對映-海松烯型 （7），結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chem icaIstructures of compounds1-7

1 實驗儀器與材料

AV-400核磁共振儀，TMS為內(nèi)標(biāo) （德國Bruker公司）；APIQSTAR Pulsari液相四級桿飛行時間質(zhì)譜儀（加拿大MDS公司）；Waters Auto Purification HPLC 2545-2489制備色譜儀（美國Waters公司）。Sephadex LH-20（瑞典Amersham Biosciences公司）；MCI-gel CHP-20P（75～150μm，日本Mitsubishi Chemical公司）；RP-18 ODS（40～63 μm，德國Merck公司）；柱層析硅膠 （200～300目，青島海洋化工有限公司）。所用試劑為化學(xué)純或分析純。顯色方法為紫外燈下波長254 nm處觀察熒光，或噴灑10%硫酸乙醇溶液，105°C下加熱顯色。

藥材于2013年10月采自安徽省岳西縣石關(guān)鄉(xiāng)，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源教研室楊青山老師鑒定為菊科植物腺梗豨薟Siegesbeckia pubescens Makino的地上部分，標(biāo)本 （編號XF201301）保存于安徽中醫(yī)藥大學(xué)天然藥化研究室。

2 提取分離

取腺梗豨薟草干燥地上部分10.7 kg，粉碎成粗粉，95%乙醇潤濕，裝入滲漉筒，依次用95%和70%乙醇滲漉，合并滲漉液，減壓濃縮至浸膏狀，回收溶劑。浸膏加水混懸，依次以石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，分別得到石油醚、乙酸乙酯 （220.8 g）和水部位浸膏。取乙酸乙酯部位213.2 g，乙醇溶解后吸附于400 g硅膠 （200～300目）上，經(jīng)硅膠柱色譜（2.0 kg，9.0 cm×60 cm），二氯甲烷-甲醇（95：5、9：1、85：15、4：1，V/V，各20 L）系統(tǒng)梯度洗脫，TLC檢測后合并相同流份，得到Fr.1～Fr.5。

Fr.2（7.2 g）經(jīng)MCI柱（0.8 L，4.0 cm×80 cm），80%、100%甲醇洗脫后，F(xiàn)r.2-1（80%甲醇）再經(jīng)Sephadex LH-20柱（75 g，2.0 cm×150 cm），得到化合物3（12.48 mg）；Fr.2-2（100%甲醇）經(jīng)Sephadex LH-20柱（75 g，2.0 cm×150 cm），二氯甲烷-甲醇 （1：1）洗脫，得到化合物5（12.35 mg）、3（21.18 mg）；Fr.2-2-1（36.8 mg）用甲醇溶解，經(jīng)制備液相，甲醇-水 （90：10）洗脫，215 nm波長檢測，得到化合物1（21.56mg）。

Fr.3（20.5 g）經(jīng)MCI柱（0.8 L，4.0 cm× 80 cm），80%、100%甲醇洗脫后，80%甲醇部位經(jīng)RP-18色譜柱（100 g，3.5 cm×40 cm），甲醇-水 （50%、80%、100%，各200 mL）梯度洗脫，合并后得到Fr.3-1～Fr.3-3。Fr.3-1經(jīng)硅膠柱色譜（50 g，3.5 cm×50 cm），氯仿-甲醇 （9：1）洗脫，得到化合物6（11.36 mg）和7（1.58 g）；Fr.3-2經(jīng)硅膠柱色譜（15 g，2.0 cm×30 cm），Pet-Me2CO（95：5）洗脫，得到白色針晶化合物4（3.52 mg）；Fr.3-3（315 mg）經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱（75 g，2.0 cm×150 cm），二氯甲烷-甲醇 （1：1）洗脫，再進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱和HPLC制備色譜，甲醇-水 （85：15）洗脫，215 nm波長檢測，得到化合物2（11.78 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶 （甲醇），分子式C20H32O3，ESI-MS m/z：321［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.48（1H，brs，H-17a），3.39（1H，dd，J=8.4，2.9 Hz，H-17b），1.22（3H，s，H-18），0.92（3H，s，H-20）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：183.5（C-19），67.4（C-17），56.9（C-5），55.2（C-9），44.9（C-15），44.7（C-4），43.6（C-8），43.3（C-16），41.6（C-7），40.7（C-1），39.5（C-10），38.1（C-13），37.8（C-3），37.1（C-14），31.3（C-12），28.9（C-18），22.3（C-6），19.0（C-2），18.8（C-11），15.5（C-20）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］一致，確定化合物1為對映-17-羥基-16βH-貝殼杉烷-19-羧酸（ent-17-hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid）。

化合物2：白色針狀結(jié)晶 （甲醇），分子式C20H32O4，ESI-MS m/z：359［M+Na］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：3.75（1H，d，J=10.4 Hz，H-18b），3.43（1H，d，J=10.4 Hz，H-18b），3.28（2H，overlapped，H-17），1.01（3H，s，H-20）。13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：179.8（C-19），70.8（C-18），67.6（C-17），56.8（C-9），52.3（C-5），50.8（C-4），46.3（C-15），45.7（C-8），44.3（C-16），42.5（C-7），41.7（C-1），40.5（C-10），39.5（C-13），37.9（C-14），33.3（C-3），32.5（C-12），23.3（C-6），19.9（C-2），19.8（C-11），16.4（C-20）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13］一致，確定化合物2為對映-16βH，17，18-二羥基-貝殼杉烷-19-羧酸（Siegesbeckic acid）。

化合物3：白色固體 （甲醇），分子式C20H32O4，ESI-MS m/z：359［M+Na］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：3.68（1H，d，J=11.3 Hz，H-17a），3.57（1H，d，J=11.3 Hz，H-17b），1.17（3H，s，H-18），0.97（3H，s，H-20）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：181.6（C-19），82.8（C-16），66.8（C-17），58.0（C-5），57.3（C-9），53.7（C-15），46.1（C-8），45.7（C-13），44.6（C-4），43.3（C-3），41.9（C-1），40.8（C-10），39.1（C-7），38.1（C-14），29.4（C-18），27.2（C-12），23.3（C-6），20.2（C-11），19.5（C-2），16.2（C-20）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［14-15］一致，確定化合物3為對映-16β，17-二羥基-貝殼杉烷-19-羧酸（ent-16β，17-dihydroxykauran-19-oic acid）。

化合物4：白色針狀結(jié)晶 （甲醇），分子式C22H34O5，ESI-MS m/z：401［M+Na］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：4.35，3.92（each 1H，d，J=10.4 Hz，H-18a，18b），3.28（2H，overlapped，H-17），2.01（3H，s，H-2′），1.03（3H，s，H-20）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：178.5（C-19），172.5（C-1′），73.2（C-18），67.6（C-17），56.8（C-9），53.1（C-5），49.6（C-4），46.2（C-15），45.6（C-8），44.3（C-16），42.4（C-7），41.5

（C-1），40.5（C-10），39.5（C-13），37.9（C-14），33.6（C-3），32.5（C-12），23.6（C-6），20.6（C-2′），19.8（C-2），19.6（C-11），16.1（C-20）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［16］一致，確定化合物4為18-乙酰基-豨薟酸（ent-18-acetoxy-17-hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid）。

化合物5：黃色粉末 （甲醇），分子式C17H14O7，分子量330。1H-NMR（400 MHz，Acetone-d6）δ：12.77（1H，s，5-OH），7.67（1H，d，J=1.8 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6′），6.93（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.65（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.30（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），3.91（3H，s，7-OCH3），3.85（3H，s，3-OCH3）。13C-NMR（100 MHz，Acetone-d6）δ：179.4（C-4），166.4（C-7），162.6（C-5），157.6（C-9），157.2（C-2），149.9（C-4′），146.4（C-3′），139.2（C-3），121.1（C-1′），121.7（C-6′），116.5（C-2′），116.4（C-5′），106.4（C-10），98.4（C-6），92.8（C-8），60.2（3-OCH3），56.5（7-OCH3）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［17］一致，確定化合物5為3，7-二甲氧基槲皮素（3，7-dimethoxyquercetin）。

化合物6：黃色針狀結(jié)晶 （甲醇），分子式C16H12O7，分子量316。1H-NMR（400MHz，Acetoned6）δ：12.80（1H，s，5-OH），7.68（1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6′），6.97（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.47（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.23（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），3.84（3H，s，3-OMe）。13C-NMR（100 MHz，Acetone-d6）δ：179.4（C-4），164.7（C-7），163.1（C-5），157.7（C-9），156.6（C-2），148.9（C-4′），145.7（C-3′），139.1（C-3），122.9（C-1′），122.0（C-6′），116.2（C-2′），116.1（C-5′），105.7（C-10），99.2（C-6），94.3（C-8），60.0（3-OCH3）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［17］一致，確定化合物6為3-甲氧基槲皮素（3-methoxyquercetin）。

化合物7：白色方晶 （乙醇），mp 194～196℃，10%硫酸乙醇溶液顯紫紅色，與奇壬醇對照品在CHCl3-MeOH（9：1）及Pet-Me2CO（3：2）條件下展開，發(fā)現(xiàn)兩者Rf值及顯色行為均相同，混合后熔點不下降。因此，確定化合物7為奇壬醇（kirenol）。

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Chem icaIconstituents from the ethyIacetate fraction of Siegesbeckia pubescens

XU Feng-qing， LIU Jin-qi， LIU Cong-bin， ZHOU Juan， XU Ran

（School of Pharmacy，Anhui University of Ghinese Medicine，Hefei 230012，Ghina）

AIM To investigate the chemical constituents from the ethyl acetate fraction of Siegesbeckia pu-

Siegesbeckia pubescens Makino；ethyl acetate fraction；chemical constituents；isolation and identification

R284.1

A

1001-1528（2015）11-2451-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.025

2015-01-13

高校省級優(yōu)秀青年人才基金重點項目 （2013SQRL041ZD）；安徽中醫(yī)藥大學(xué)自然科學(xué)基金重點項目 （azy016）

許鳳清（1979—），女，博士，副教授，從事天然藥物化學(xué)成分研究。Tel：18949806078；E-mail：qingfx@eyou.com

bescens.METHODS The isolation and purification of this fraction were performed on silica，Sephadex LH-20，MCI，RP-18 and HPLC column.The structures of isolated compounds were then identified on the basis of1HNMR，13C-NMR and reported literatures.RESULTS Seven compounds were isolated and elucidated as ent-17-hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid（1），siegesbeckic acid（2），ent-16α，17-dihydroxykauran-19-oic acid（3），18-acetoxy-ent-17-hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid（4），3，7-dimethoxyquercetin（5），3-methoxyquercetin（6），kirenol（7）.CONCLUSION Compounds 1 and 6 are obtained from S.pubescens for the first time.