正交試驗優選絞股藍口服液的最佳工藝

王 堯， 程宗琦， 吳 憩

（蘇州大學附屬第一醫院藥劑科，江蘇蘇州215006）

正交試驗優選絞股藍口服液的最佳工藝

王 堯， 程宗琦， 吳 憩

（蘇州大學附屬第一醫院藥劑科，江蘇蘇州215006）

目的 優選絞股藍口服液的最佳工藝。方法 以絞股藍總皂苷為指標，紫外-可見分光光度法測定其含有量，L9（34）正交試驗法優選最佳工藝。結果 最佳提取條件為12倍量水，煎煮3次，每次1 h。結論 該工藝穩定可靠，可為制劑生產提供依據。

絞股藍口服液；絞股藍總皂苷；紫外-可見分光光度法；正交試驗

絞股藍別名七葉膽、南人參，系葫蘆科植物絞股藍Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino的干燥根狀莖或全草，在我國主要分布于秦嶺和長江以南地區，如陜西安康、湖北神農架、廣西金秀等，其中陜西安康為該植物原產地。中醫認為，絞股藍具有清熱解毒、祛痰止咳、鎮靜安神、益氣強身等功效，藥理和臨床試驗表明，其提取物具有明顯的降血脂、降血糖、抗潰瘍、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老、保肝及增強免疫功能等作用，該植物的主要藥效成分為絞股藍總皂苷，其中絞股藍皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅻ分別與人參皂苷Rb1、Rb3、Rd、K的結構相同。本實驗采用正交試驗法對其工藝進行優化，以期獲得最佳工藝參數，為制劑生產提供科學依據。

1 儀器與試藥

UV-1800型紫外可見分光光度計 （日本島津公司）；AL-204型電子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；RE-3000A旋轉蒸發器 （上海亞榮生化儀器廠）；HHS型電熱恒溫水浴鍋 （天津市華北實驗儀器有限公司）。

人參皂苷Rb1對照品 （批號110704-200420，中國食品藥品檢定研究院）。絞股藍 （批號131116，產地陜西安康）。95%乙醇 （太倉新太酒精有限公司）；甲醇、高氯酸、冰醋酸均為分析純 （天津市大茂化學試劑廠）。

2 方法與結果

2.1 不同溶劑提取試驗

2.1.1 提取溶劑的選擇 針對絞股藍所含的活性成分，本實驗以絞股藍總皂苷含有量為指標，比較水、70%乙醇對其提取率的影響。

2.1.2 提取方法

2.1.2.1 水提法 取絞股藍80 g，加入8倍量水，回流提取兩次，每次1 h，過濾，濾液合并，減壓濃縮至200 mL左右。

2.1.2.2 醇提法 取絞股藍80 g，加入8倍量70%乙醇，回流提取兩次，每次1 h，過濾，濾液合并，減壓濃縮至200 mL左右。

2.2 絞股藍總皂苷含有量測定方法學考察

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥的人參皂苷Rb1對照品10 mg，置于5 mL量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為2.0 mg/m L的貯備液。

2.2.2 樣品溶液的制備 按 “2.1.2.1”項下方法制備。

2.2.3 吸收波長的確定 精密量取對照品貯備液100μL，置于15 mL具塞試管中，揮干甲醇，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1.6 mL，搖勻，密塞，置60℃水浴中加熱15 min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，精密加入冰醋酸10 m L，搖勻。另精密量取甲醇溶液100μL，置于15 mL具塞試管中，同法操作，作為空白溶液，于400～800 nm處進行紫外掃描，確定最大吸收波長。結果表明，人參皂苷Rb1在550 nm處有最大吸收。

2.2.4 線性關系的考察 精密量取對照品貯備液50、100、150、200、250μL，分別置于 15 mL具塞試管中，按“2.2.3”項下方法操作。另精密量取甲醇溶液250μL，置于15 mL具塞試管中，同法操作，作為空白溶液，在550 nm波長處測定吸收度。以吸光度 （A）對人參皂苷Rb1取樣量（C）進行回歸，得到回歸方程A=0.672C+0.020 2，r=0.990 9，說明人參皂苷Rb1取樣量在0.10～0.50 mg范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗 取對照品溶液100μL，按 “2.2.3”項下方法操作，連續進樣5次，測定吸光度，計算RSD。結果，RSD為0.11%，說明儀器精密度良好。

2.2.6 重復性試驗 取樣品溶液20μL，共5份，按“2.2.3”項下方法操作，測得RSD為0.23%，說明該方法重復性良好。

2.2.7 穩定性試驗 取樣品溶液20μL，分別在0、2、4、8、12、24 h測定吸光度。結果，RSD為1.02%，說明樣

品溶液在24 h內較穩定。

2.2.8 加樣回收率試驗 取樣品溶液20μL，分別加入對照品溶液20、30、40μL，按 “2.2.3”項下方法操作，測得平均回收率為99.8%，RSD為1.08%。

2.3 不同提取方法結果的比較 精密量取提取液20μL，按 “2.2.3”項下方法操作，測定吸收度，計算絞股藍總皂苷的含有量，結果見表1。由表可知，水和70%乙醇提取效果相當，從經濟效益角度考慮，絞股藍宜采用水煎煮的提取方法。

表1 不同提取溶劑對絞股藍總皂苷提取得率的影響

2.4 正交試驗

2.4.1 正交試驗設計 為考察提取工藝條件對絞股藍總皂苷提取率的影響，采用L9（34）正交試驗表進行設計，對加水量 （A）、煎煮時間 （B）、煎煮次數 （C）進行工藝研究，以絞股藍總皂苷的含有量為指標，確定工藝最佳參數。因素水平表見表2。

表2 因素水平

2.4.2 正交試驗結果 按照因素水平進行操作，將各樣品提取液濃縮成一定量，測定各正交樣品中絞股藍總皂苷的含有量，計算總皂苷提取率 （提取液中總皂苷量/藥材量×100%），結果見表3、表4。由表3可知，3個因素的極差順序為C＞A＞B，因此C（煎煮次數）對提取工藝影響最大，其次為A（加水量），B（煎煮時間）影響最小。由表4可知，因素C對提取有顯著影響，A次之，B幾乎無影響。考慮成本因素，確定最佳提取工藝為A3B1C3，即藥材加12倍量水，煎煮3次，每次1 h。

表3 L9（34）正交試驗

表4 方差分析

2.4.3 最佳提取工藝驗證 按照正交試驗所得的最佳提取工藝條件提取3批樣品，測定其總皂苷含有量。結果表明，該工藝重復性好、條件合理、穩定可行，見表5。

表5 工藝條件的驗證試驗結果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇 在預實驗中，比較水和醇的提取效果，結合文獻 ［3］，選擇70%乙醇進行實驗研究。結果表明，水和70%乙醇提取對絞股藍總皂苷含有量無顯著性影響，但水提成本低，溶劑不需回收，而醇提須回收乙醇。因此，從經濟效益、工藝步驟及安全角度考慮，本實驗采用水煎煮工藝。

3.2 提取部位 絞股藍受產地氣候、土壤條件、采收時間、采樣部位等因素影響，其總皂苷的含有量會有很大不同。本實驗雖未對絞股藍入藥部位進行考察，但結合文獻［8］報道，絞股藍葉中總皂苷含有量比莖高4～5倍，而且以陜西安康產者為最優［9］。因此，在工藝生產中大多選擇陜西安康產絞股藍葉作為入藥部位。

3.3 煎煮參數 正交試驗結果顯示，煎煮次數對提取工藝影響最大，其次加水量，煎煮時間影響最小。綜合生產成本因素后，確定最佳工藝參數為12倍量水，煎煮3次，每次1 h。經驗證，該工藝條件穩定可靠，可為制劑生產提供依據。

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R944

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1001-1528（2015）12-2767-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.044

2014-09-03

王 堯 （1983—），女，助理研究員，研究方向為醫院制劑。Tel：（0512）67780477、13812777984，E-mail：wangyao01301 @126.com