丹紅注射液對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護作用及其對白細胞介素-8的影響

于洪艷 朱 丹 丁 寧

丹紅注射液對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護作用及其對白細胞介素-8的影響

于洪艷1朱 丹1丁 寧2

目的 探討丹紅注射液對大鼠心肌缺血/再灌注損傷（MI/RI）的保護作用及其對白細胞介素-8（IL-8）的影響。方法 SD大鼠完全隨機分為假手術組、模型組、丹紅注射液組，每組12只，采用結扎冠狀動脈左前降支前30 min，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型。在結扎前15 min予以靜脈注射丹紅注射液8 ml/kg。觀察丹紅注射液對MI/RI模型大鼠心肌組織病理、血清IL-8水平、心肌組織IL-8 mRNA及IL-8蛋白表達水平。結果 丹紅注射液能改善MI/RI模型大鼠心肌組織病理形態，降低血清中IL-8含量和心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白表達水平。結論 丹紅注射液能夠通過對IL-8的調節減輕心肌缺血/再灌注損傷。

心肌缺血-再灌注；丹紅注射液；白細胞介素-8

心肌缺血-再灌注損傷（Myocardial ischemia/ reperfusion injury,MI/RI）是經皮冠狀動脈成形術、冠狀動脈溶栓術、冠狀動脈旁路移植術、冠狀動脈內支架植入術等進行有效的心肌再灌注縮小心肌梗死面積治療后發生的損傷[1]。MI/RI已成為影響心肌梗死患者缺血/再灌注后心臟結構和功能恢復的主要因素。研究表明，心肌缺血能夠引起急性炎性反應，再灌注后會加劇炎性反應，導致不可逆的細胞損傷[2]。本實驗通過大鼠建立MI/RI模型，研究丹紅注射液對MI/RI的保護作用及其對白細胞介素-8（IL-8）的影響，為丹紅注射液的臨床應用提供依據?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選取SD大鼠36只，體質量（200± 20）g，雌雄各半。由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物許可證編號為：SCXK（京）2007-0001。適應性馴養1周，自由飲水、攝取標準顆粒飼料。室溫20～23 ℃，相對濕度40%～80%。將大鼠完全隨機分為3組，即假手術組、模型組、丹紅注射液預處理組，每組12只。

1.2 試劑及試藥 心電圖記錄儀（日本 KOHDEN公司）；全自動生化儀（美國TECHICON公司）；小動物呼吸機（成都泰盟科技有限公司）；普通光學顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；IL-8多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（上海北諾生物科技有限公司）；熒光定量PCR儀（西安天隆科技有限公司）；Western blot印跡轉移電泳儀（君意東方電泳設備有限公司）。IL-8酶聯免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司）。丹紅注射液由山東省步長制藥有限公司提供。

1.3 模型制備[3]采用20%烏拉坦50 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定。將心電圖記錄儀的針狀電極分別插入四肢皮下，接心電圖記錄儀，記錄標準肢體Ⅱ導聯心電圖。頸部備皮，行氣管插管，接大鼠呼吸機通氣。距離胸骨左緣0.5 cm處，從第3、4肋間開胸，剪開心包膜，暴露心臟。在肺動脈圓錐左緣與左心耳右緣之間暴露冠狀動脈左前降支。用4-0無損傷縫合線在左心耳根部下方2 mm處，以深1～2 mm、寬2～3 mm穿于帶凹槽的細聚乙烯管制成的冠脈阻斷小環，穿過心肌表層。假手術組不結扎。模型組、丹紅注射液預處理組均結扎冠狀動脈左前降支30 min，造成心肌缺血后，在凹槽部剪斷結扎用的無損傷縫合線，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型。其中結扎缺血模型成功標準為心電圖示ST段明顯抬高，并與T波融合，心肌顏色變淺紅色；再灌注模型成功標準為剪斷結扎用的無損傷縫合線后ST段降低≥1/2，心肌逐漸紅潤。

表1 3組MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白相對表達量比較(±s)

表1 3組MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白相對表達量比較(±s)

注：與假手術組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01

組別 例數 血清IL-8(μg/L) 心肌組織IL-8mRNA相對表達量 心肌組織IL-8mRNA相對表達量假手術組 12 36±8 0.42±0.09 0.45±0.07模型組 12 94±11# 0.87±0.14# 0.92±0.16#丹紅注射液預處理組 12 63±9* 0.65±0.11* 0.69±0.12*

1.4 方法 假手術組大鼠僅對左冠狀動脈前降支用4-0縫合線穿過心肌表層，不進行結扎。穿縫合線后予以靜脈注射0.9%氯化鈉注射液8 ml/kg。模型組大鼠在結扎冠狀動脈左前降支前15 min予以靜脈注射0.9%氯化鈉注射液8 ml/kg。丹紅注射液組大鼠在結扎冠狀動脈左前降支前15 min予以靜脈注射丹紅注射液8 ml/kg。

1.5 觀察指標 采用ELISA法檢測血清中IL-8的水平；采用反轉錄-聚合酶鏈式反應檢測IL-8 mRNA表達；采用蛋白免疫印跡法檢測IL-8蛋白表達。

1.6 統計學分析 采用SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 丹紅注射液預處理對MI/RI大鼠心肌組織病理形態學的影響 假手術組大鼠心肌細胞結構完整，排列整齊，無心肌纖維的破壞；核內物質分布均勻，無水腫斷裂，胞間間隙正常。模型組大鼠心肌細胞結構模糊，邊界不清，心肌纖維變長呈波浪形、排列紊亂，發生斷裂，細胞內水腫明顯，有炎性細胞浸潤。丹紅注射液預處理組大鼠散在少量細胞結構模糊，邊界不清，僅少量炎性細胞浸潤?？梢?，丹紅注射液預處理能夠抗 MI/RI，具有保護心肌細胞的作用。

2.2 血清IL-8水平、心肌組織IL-8 mRNA、IL-8蛋白相對表達量 與假手術組大鼠比較，模型組大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA和蛋白表達水平均明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，丹紅注射液預處理組大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA和蛋白表達水平均明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.01），見表1。

3 討論

致炎因子、炎性介質及其介導的炎性反應在MI/RI的病理生理中起重要作用[4]。中性粒細胞、單核/巨噬細胞、淋巴細胞以及內皮細胞等在心肌缺血再灌注時，通過細胞內信號轉導機制發生細胞炎癥級聯反應，導致白細胞介素-6、腫瘤壞死因子、血小板活化因子、血栓素等多種炎性細胞因子大量生成，生成的炎性細胞因子被激活后又能合成和釋放有趨化作用的炎性介質，進一步擴大了炎性反應，導致組織的損傷和破壞。IL-8是巨噬細胞和上皮細胞等分泌的細胞因子，是炎癥早期最具影響的介質之一，能夠結合趨化因子受體對中性粒細胞有細胞趨化作用而實現其對炎性反應的調節，促使炎性介質釋放和誘導其他炎性因子啟動炎癥級聯放大反應，使受損心肌的惡性循環加重[5]。本研究發現，采用結扎冠狀動脈左前降支前30 min，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型，模型組心肌組織病理表現出明顯的損傷，同時伴有IL-8明顯升高，其參與了MI/RI的發生和發展，參與了炎癥級聯反應，使心肌組織受損。而通過丹紅注射液預處理后血清中IL-8含量和心肌組織 IL-8 mRNA表達水平、IL-8蛋白相對表達量明顯下降。提示丹紅注射液可能是通過對IL-8的調節減輕MI/RI。

[1] 高妮妮,王芳,廉哲勛.PI3K-Akt-eNOS信號通路在三磷酸腺苷后處理減輕兔心肌缺血再灌注損傷中的作用[J].中國循環雜志, 2014,29(1):59-63.

[2] 趙潤英,郝偉,孟祥軍,等.阿魏酸川芎嗪對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及分子機制研究[J].中國實驗方劑學雜志, 2012,18(19):230-234.

[3] 王淑俠,蘭小莉,王吉文,等.大鼠MI/R損傷模型的改進與評價[J].解剖學進展,2000,6(4):371-371.

[4] 陳秋紅,李欽,楊偉俊,等.黃酮類化合物抗心肌缺血再灌注損傷的相關機制研究進展[J].中國臨床藥理學雜志,2013,29(12):958-960.

[5] 王震,董化江,何文彤,等.蕨麻正丁醇提取物對心肌缺血再灌注損傷大鼠白細胞介素-8的影響[J].新鄉醫學院學報,2013,30(7): 509-511.

R542.2

A

1673-5846(2015)08-0020-02

1齊齊哈爾市中醫醫院，黑龍江齊齊哈爾 161000

2黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江哈爾濱 150001

于洪艷（1973.10-），本科學歷，副主任藥師，副院長。從事藥理學研究

丁寧（1968-），本科學歷，副主任醫師。研究方向：心腦血管疾病的診斷學研究。E-mail：ningning_680512@163.com