CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細胞在食管鱗癌中的表達與預后的關系

張艷芳

CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細胞在食管鱗癌中的表達與預后的關系

張艷芳

目的 探討食管鱗癌組織中CD44v6蛋白和浸潤的CD3+T淋巴細胞表達情況及對預后的影響。方法 應用免疫組織化學法（SP）檢測CD44v6蛋白、CD3+T細胞在60例食管鱗癌患者中的表達，另選取30例癌旁正常組織為對照，分析其與臨床病理參數之間的關系。結果 CD44v6蛋白在食管癌及癌旁正常組織陽性表達率分別為53.3%、16.7%，二者差異有統計學意義（P＜0.05）；CD3+T淋巴細胞在食管癌及癌旁正常組織陽性表達率分別為56.7%、80.0%，二者差異有統計學意義（P＜0.05）；CD44v6蛋白高表達及CD3+T淋巴細胞低表達均與食管鱗癌浸潤深度、淋巴結轉移呈正相關（P＜0.05），但與分化程度、病變長度無關（P＞0.05）；食管癌中CD3+T淋巴細胞和CD44V6蛋白的表達呈顯著負相關（r=-0.481，P＜0.01）。結論 CD44v6蛋白高表達和CD3+T淋巴細胞低表達與食管鱗癌發生發展、浸潤轉移密切相關。

食管腫瘤；CD44v6蛋白；CD3+T淋巴細胞；免疫組織化學法；表達；預后

細胞免疫是機體抗腫瘤免疫反應的重要組成部分。腫瘤組織中浸潤的淋巴細胞（TILs），主要是指位于腫瘤間質內的T淋巴細胞，TILs的密度、活化狀態及類型在一定程度上反映了機體的免疫水平，與臨床預后密切相關。同時，又有研究發現，腫瘤組織中雖然有大量TILs，但并未對腫瘤的生長起到抑制作用[1-3]，反而促進了癌細胞的浸潤、轉移。CD44v6蛋白是屬于黏附分子家族成員，研究發現，在腫瘤細胞中呈高表達，而在正常組織中呈低表達或不表達[4-5]，且與腫瘤預后密切相關。因此，本研究通過免疫組織化學法（SP）研究CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細胞在食管鱗癌中的表達與關系，進一步明確其與食管癌病理分級、浸潤及轉移、預后的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料 60例食管癌手術標本來自安陽市腫瘤醫院2009年1月1日至2010年1月1日收治的胸科手術患者。所有標本經胃鏡或手術病理確診，術前均未行化療或放療，臨床病例資料完整。其中男23例，女37例，年齡42～79歲，平均（56±3）歲。參照國際抗癌聯盟（UICC）2009年第7版TNM分期標準，Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期12例；鱗癌高、中、低分化者分別為16、29和15例。另選取30例癌旁正常組織（距食管癌原發灶3 cm，并經病理證實）作為對照。

1.2 方法 鼠抗人CD44v6特異性抗體和鼠抗人CD3 特異抗體均購于北京中杉生物技術公司，標本經 4%甲醛固定，石蠟包埋組織連續切片 3張（厚度4～5 μm），進行常規蘇木精-伊紅（HE）染色，SP檢測CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細胞的表達情況。常規設陽性對照，并以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對照，光學顯微鏡下觀察顯色結果。

1.3 染色結果判斷 以雙盲法進行染色判斷，CD44v6陽性染色為棕黃色顆粒，主要為胞膜顯色，部分胞質顯色，CD3+陽性染色為棕黃色，為胞膜顯色。每例標本隨機選5個高倍視野，染色強度計分：不著色為0分；淡黃色為1分；著色呈黃色為2分；棕褐色為3分。染色陽性細胞百分比計分：＜5%為0分；5%～25%為1分；26%～50%為2分；＞50%為3分。根據染色強度、陽性細胞百分比乘積判斷結果：≥2者為陽性，＜2者為陰性。

1.4 統計學分析 所有數據錄入計算機，采用SPSS 17.0統計軟件進行分析。組間率的比較采用χ2檢驗；相關性檢驗行Spearman相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細胞的表達 CD44v6蛋白在癌旁正常食管組織陽性表達率為 16.7%（5/30），在食管原發灶中的陽性表達率為 53.3%（32/60），差異有統計學意義（P＜0.05）。CD3+T淋巴細胞在癌旁組織陽性表達率為80.0%（24/30），在食管原發灶中的陽性表達率為56.7%（34/60），差異有統計學意義（P＜0.05），見表1及圖1、2。CD44v6高表達及CD3+T淋巴細胞低表達與食管

鱗癌浸潤深度、淋巴結轉移呈正相關（P＜0.05），但與分化程度及病變長度無關（P＞0.05），見表2。

表1 癌旁正常食管組織和食管鱗癌組織中CD44v6蛋白及CD3+T淋巴細胞的表達

圖1 食管鱗癌組織中CD44v6蛋白的表達（×400）

圖2 食管鱗癌組織中CD3+T淋巴細胞的表達（×400）

表2 CD44v6蛋白及CD3+T淋巴細胞與食管鱗癌臨床病理參數間的關系

2.2 CD44v6蛋白與CD3+T細胞在食管癌中表達的相關性分析 60例食管鱗癌組織中，CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細胞同時表達陽者11例（18.3%），同時表達陰性者5例（8.3%），僅CD44v6蛋白表達者21例（35.0%），僅CD3+T淋巴細胞表達者23例（38.3%）；采用 Spearman相關分析結果顯示，CD44v6蛋白與 CD3+T淋巴細胞之間呈負相關（r=-0.481，P＜0.01）。

3 討論

CD44具有不同亞型，分為標準型 CD44（standard CD44）即CD44s，變異型即CD44v，其中CD44v又可根據其外顯子拼接方式、種類不同分為CD44v1～10等10多種。CD44v可與透明質酸結合，介導參與細胞與細胞外基質結合及細胞偽足形成，從而使細胞運動能力增強。研究發現，CD44v6在多種腫瘤中表達上調，與腫瘤的不良預后相關。目前，關于CD44v6在食管癌中的研究結果不一。有學者發現，食管癌中CD44v6的表達明顯高于正常組織，且在淋巴結轉移陽性組及T3/T4組患者中，CD44v6的表達明顯升高，差異有統計學意義[6]。也有報道認為，CD44及CD44v6在淋巴結轉移癌中的表達明顯比對應的原發灶弱，轉移淋巴結的數目越多，表達也越弱[7]。本研究顯示，CD44v6在食管癌組織中表達高于正常組織，且陽性表達者較易發生脈管浸潤和遠處轉移，研究結果與文獻[7]報道相似，CD44v6隨淋巴結轉移及浸潤深度加深而增高，腫瘤的浸潤深度（T1-2/T3-4）、淋巴結有無轉移（N0/N+）表達之間存在差異，表明CD44v6在食管癌的浸潤、淋巴結轉移中起重要作用。CD44v6過表達提示預后不良，可作為判斷食管癌預后的一項指標。

淋巴細胞的浸潤需要腫瘤微環境內一系列黏附分子、趨化因子的參與。本研究發現，大多數TILs主要位于食管癌間質內，在癌旁組織內可見較多的CD3+T淋巴細胞浸潤，而在癌巢內CD3+T淋巴細胞減少，提示腫瘤組織內存在T淋巴細胞的排斥現象。同時發現，在中晚期腫瘤組織內，浸潤的淋巴細胞明顯減少，提示腫瘤微環境內存在負向調節因子，阻止了T淋巴細胞向腫瘤內的浸潤。從CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細胞的表達發現，CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細胞在食管癌中同時出現，但呈負相關，并且均與淋巴結轉移、浸潤深度有關，提示腫瘤細胞產生的CD44v6蛋白，可促使淋巴細胞歸巢，從而使腫瘤組織中浸潤的淋巴細胞明顯減少，進一步削弱了免疫反應，腫瘤細胞逃脫了免疫系統的監視與清除[8]，促進了腫瘤的進展。

因此，通過檢測食管癌組織中CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細胞的表達情況，篩查高危復發患者，能更好地判斷食管癌患者的預后，指導臨床輔助治療。

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Relationship CD44v6 protein Expression and CD3+T lymphocytes and Prognosis in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Zhang Yanfang

Objective To explore the expression of CD44v6 protein and CD3+T cells and their prognostic value in esophageal squamous cell carcinoma.Methods Immunohistochemical method(SP)detection of CD44v6,CD3+T cells expressing esophageal squamous cell carcinoma in 60 cases,and another 30 cases selected normal tissues adjacent to cancer as control,analyze its relationship with clinicopathological parameters.Results CD44v6 protein in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate was 53.3%,16.7%,respectively,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD3+T lymphocytes in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate respectively 56.7%,80.0%,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD44v6 protein expression and CD3+T lymphocytes were associated with low expression in esophageal squamous cell invasion,lymph node metastasis was positively correlated(P＜0.05)However,the degree of differentiation, independent of lesion length(P＞0.05); esophageal cancer in CD3+T lymphocytes and CD44V6 protein expression

Esophageal neoplasm;CD44v6;CD3+T cells;Immunohistochemistry;Expression;Prognosis

R735.1

A

1673-5846(2015)06-0073-03

安陽市腫瘤醫院內五科，河南安陽 455000

showed a significant negative correlation(r=-0.481,P＜0.01).Conclusion CD44v6 protein expression and low expression of CD3+T lymphocytes in the development of esophageal squamous cell carcinoma occurs in closely related to invasion and metastasis.