鼻淵通竅顆粒質(zhì)量鑒定的實(shí)驗(yàn)研究*

潘鳳群

(廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州510006)

引言

中成藥鼻淵通竅顆粒是由十四味中藥包括麻黃、蒼耳子、野菊花、白芷、連翹、茯苓，甘草等組成．傳統(tǒng)用藥依其疏風(fēng)清熱、宣塞通竅、治療鼻竇炎等功效，廣泛應(yīng)用于急慢性鼻炎、鼻竇炎等外邪犯肺證的治療．

鼻淵通竅顆粒的藥理藥效作用已被大量相關(guān)報(bào)道研究證實(shí)．張志亮［1］等對(duì)本顆粒劑對(duì)急性鼻竇炎的療效進(jìn)行了觀察，得出鼻淵通竅顆粒配合抗生素來(lái)治療急性鼻竇炎的療效確切，用藥安全的結(jié)論;張一航等對(duì)鼻淵通竅顆粒的臨床研究主要集中在其治療兒童慢性鼻竇炎的功效上，臨床研究結(jié)果表明鼻淵通竅顆粒具有顯著的治療兒童慢性鼻竇炎的療效［2］．現(xiàn)有的研究報(bào)告中已有關(guān)于鼻淵通竅顆粒中鹽酸麻黃堿［3］及黃芩苷［4］的含量測(cè)定項(xiàng)目，郝光啟等在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)中增加了辛夷與丹參的薄層鑒別，并將鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的總量測(cè)定由原來(lái)的紫外分光光度法(UV)改為高效液相色譜法(HPLC)，方法學(xué)驗(yàn)證表明改進(jìn)的含量測(cè)定方法更加方便、可靠，測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確［5］．

野菊花為組成鼻淵通竅顆粒的一味中藥，已有相關(guān)研究報(bào)告表明，野菊花具有抗病原微生物、抗炎免疫、降壓和保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用［6］，主要含有萜類、揮發(fā)油、多糖、黃酮等眾多成分，其天然活性成分為蒙花苷［7］．尚未有報(bào)道以蒙花苷作為鼻淵通竅顆粒的質(zhì)量控制指標(biāo)，因此，筆者對(duì)具有藥效活性的蒙花苷的含量測(cè)定進(jìn)行研究．此外，還研究了野菊花與蒼耳子的薄層鑒別．結(jié)果表明，所建立的薄層鑒別及蒙花苷含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、專屬性較強(qiáng)、重復(fù)性良好，樣品的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，適于作為鼻淵通竅顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充指標(biāo)．

1 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品和材料

高效液相色譜儀系統(tǒng):儀器島津LC－20 AT泵、SPD－M20A檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器(SIL－HTC)、柱溫箱(CTO－20AC)．Merck硅膠G薄層色譜板，水為超純水(高效液相色譜法專用)，乙腈為色譜純，甲醇等其他試劑均為分析純．

野菊花的對(duì)照藥材(批號(hào):120995－201105)，蒼耳子對(duì)照藥材(批號(hào):121168－201005)來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品檢定院;蒙花苷對(duì)照品(111528－201107)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所．

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1 野菊花的鑒別［8］

取兩個(gè)批次的鼻淵通竅顆粒各1．5 g，研細(xì)，精確加入乙醇45 mL，20 min超聲處理，將超聲過(guò)的溶液濾過(guò)，將濾液蒸干，以水10 mL溶解殘?jiān)?，過(guò)聚酰胺柱(3 g，14～30目)，用水50 mL分次洗脫，將水液棄去，用乙醇30 mL分次洗脫，并收集乙醇洗脫液，將洗脫液水浴蒸干，用乙醇1 mL將殘?jiān)耆芙猓鳛楣┰嚻啡芤海Q取野菊花對(duì)照藥材1 g置于具塞錐形瓶中，加入無(wú)水乙醇30 mL，經(jīng)過(guò)20 min超聲處理，濾過(guò)，將濾液蒸干，用乙醇1 mL將殘?jiān)耆芙?，以此作為野菊花?duì)照藥材溶液．取野菊花陰性試樣5 g，用與供試品溶液相同的制備方法制備，作為野菊花陰性對(duì)照溶液．照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述制備好的供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各5μL及野菊花對(duì)照藥材溶液1μL，分別依次點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層色譜板上，將乙酸乙酯－水－甲醇(體積比為100∶13∶17)［9］作為展開劑，展開，取出，常溫晾干，置365 nm紫外燈下觀察檢視，所得到的供試品色譜圖中，在與對(duì)照藥材相對(duì)應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照試液處則無(wú)此斑點(diǎn)．

2．2 蒼耳子的鑒別

取兩個(gè)批次鼻淵通竅顆粒各1．5 g，研細(xì)，加乙醇30 mL，水浴回流1 h，用定性濾紙濾過(guò)，將濾液蒸干，殘?jiān)盟?0 mL使其完全溶解，濾過(guò)，將濾液通過(guò)經(jīng)過(guò)處理的D－101型大孔樹脂柱，用30 mL水分次洗脫，棄去水液，再用50 mL體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇分次洗脫，將20%的洗脫液完全收集，放置于水浴濃縮至20 mL，室溫放冷，分別用水飽和正丁醇提取2次，每次20 mL，并合并正丁醇液，將正丁醇液蒸干，殘?jiān)?．5 mL乙醇使其溶解，作為供試品溶液．另取蒼耳子對(duì)照藥材1 g，加入乙醇回流1 h，同法制成為對(duì)照藥材溶液．再取蒼耳子陰性對(duì)照樣品5 g，制備方法同供試品，制備陰性對(duì)照品溶液．照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述制備的供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL及蒼耳子的對(duì)照藥材溶液4μL，分別依次點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層色譜板上，將乙酸乙酯－甲酸－丁酮－水(體積比為6∶1∶2∶1)作為展開劑［10］，在展開缸中展開，取出，室溫晾干，置氨蒸汽中氨熏至斑點(diǎn)清晰可見，在日光下檢視．在供試樣品、對(duì)照藥材、陰性對(duì)照薄層色譜圖中，在相應(yīng)的位置處樣品與對(duì)照藥材具有相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照溶液相對(duì)應(yīng)位置處無(wú)此斑點(diǎn)，證明陰性無(wú)干擾．

2．3 蒙花苷含量測(cè)定

2．3．1 色譜條件

色譜柱為Thermo ODS－2 hypers11 Dim(200 mm×4．6 mm，5μm);流動(dòng)相為乙腈－水(體積比為30∶70);檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為334 nm;流速為1．0 mL·min－1;柱溫為25℃;進(jìn)樣量為10μL．

2．3．2 對(duì)照品溶液的制備

對(duì)照品1:精密稱取蒙花苷對(duì)照品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)86．7%)10．38 mg，置于200 mL具塞容量瓶中，加入適量的甲醇溶解，定容，搖勻，即得蒙花苷對(duì)照品溶液，其質(zhì)量濃度為0．0450 mg/mL．

對(duì)照品2:精密稱定蒙花苷對(duì)照品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為86．7%)18．64 mg，置于250 mL具塞容量瓶中，加入適量的甲醇溶解，定容，搖勻，即得蒙花苷對(duì)照品溶液，其質(zhì)量濃度為0．05875 mg/mL．

2．3．3 供試品溶液的制備

取鼻淵通竅顆粒0．25 g(批號(hào)120805)，研細(xì)，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，室溫環(huán)境中稱定重量，30 min超聲處理，室溫放冷，再一次稱定重量，用甲醇補(bǔ)充減失的重量并搖勻，濾過(guò)，收集續(xù)濾液作為供試品溶液．

2．3．4 陰性對(duì)照溶液的制備

分別取適量鼻淵通竅顆粒和野菊花陰性對(duì)照樣品，用與“2．2．2”條下相同的供試品溶液的制備方法制備蒙花苷陰性的對(duì)照溶液．

2．3．5 專屬性

在上述色譜條件下，分別取蒙花苷對(duì)照品溶液、鼻淵通竅顆粒蒙花苷陰性對(duì)照溶液、鼻淵通竅顆粒供試品溶液各10μL，依次注入高效液相色譜儀，記錄40 min內(nèi)的色譜圖，結(jié)果顯示，在與蒙花苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處，陰性對(duì)照溶液未見色譜峰顯示，故認(rèn)為陰性無(wú)干擾．

2．3．6 精密度試驗(yàn)考察

吸取蒙花苷對(duì)照品溶液10μL，按2．1條下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，分別記錄6個(gè)色譜峰峰面積，經(jīng)計(jì)算，6次進(jìn)樣蒙花苷的色譜峰峰面積的標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為0．5%．

2．3．7 線性關(guān)系考察

分別精密吸取蒙花苷對(duì)照品(質(zhì)量濃度為0．045 0 mg/mL)溶液1，5，7，10，15μL注入高效液相色譜儀中，記錄40 min內(nèi)的色譜圖，記錄蒙花苷峰的峰面積，以進(jìn)樣量為x，峰面積為y，進(jìn)行線性回歸，得蒙花苷線性回歸方程(n=5)為:y=12357x－132．7，r2=0．999 9，結(jié)果表明蒙花苷在0．045 0～0．614 9μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系．

2．3．8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取鼻淵通竅顆粒同一樣品6份，每份0．25 g，分別按2．2．2條下方法制備供試品溶液，按2．1條下的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜峰峰面積，計(jì)算蒙花苷含量，結(jié)果鼻淵通竅顆粒蒙花苷的平均含量為2．059 mg·g－1，RSD為4．2%．

2．3．9 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察

取同一供試品溶液，按2．1條下色譜條件，放置于室溫環(huán)境中，分別在0，4，6，9，15，18，24 h測(cè)定，記錄40 min內(nèi)的薄層色譜圖，記錄色譜峰峰面積，鼻淵通竅顆粒中蒙花苷色譜峰面積的RSD為3．4%，表明在24 h內(nèi)，供試品溶液是穩(wěn)定的．

2．3．10 蒙花苷回收率試驗(yàn)

取已知含量的鼻淵通竅顆粒，研細(xì)，分別取0．1，0．25，0．5 g各三份，精密稱定，分別加入0．058 75 mg·mL－1的蒙花苷對(duì)照品溶液5，10，20 mL，按“2．2．2”條下方法制備溶液，分別注入高效液相色譜儀，記錄40 min內(nèi)的色譜圖，記錄色譜峰峰面積并計(jì)算回收率．結(jié)果:低、中、高蒙花苷質(zhì)量濃度回收率(n=3)分別為100．1%(RSD=3．2%)、101．0%(RSD=3．3%)、102．9%(RSD=2．4%)，平均回收率(n=9)為101．3%．

2．3．11 樣品含量測(cè)定

分別取5個(gè)批號(hào)的鼻淵通竅顆粒樣品，精密稱定，按2．2條下方法制備供試品溶液，按2．1條下色譜條件，每個(gè)溶液進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積，并用外標(biāo)法計(jì)算樣品中蒙花苷的含量，結(jié)果見表1．

表1 鼻淵通竅顆粒樣品測(cè)定結(jié)果

2．3．12 耐用性試驗(yàn)

通過(guò)對(duì)比不同流動(dòng)相比例及更換Sepax bio－C18(250 mm×4．6 mm，5μm)色譜柱考察所建立的含量測(cè)定方法的耐用性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)柱效和分離度無(wú)明顯變化，說(shuō)明本法耐用性較好．

3 討論

3．1 確定薄層色譜法(TLC)的鑒別條件

本實(shí)驗(yàn)對(duì)于鼻淵通竅顆粒中的蒼耳子、野菊花的薄層鑒別方法，采用2010版《中國(guó)藥典》中的方法，而對(duì)提取方法及薄層展開條件改進(jìn)，經(jīng)過(guò)方法學(xué)的驗(yàn)證，最終確定了本制劑中兩種藥材的薄層鑒別方法．

3．2 供試品溶液的制備

在提取溶劑的選擇上，本文分別考察了水、甲醇及體積分?jǐn)?shù)分別75%、50%、30%的甲醇5種溶劑，結(jié)果表明甲醇的提取效果較好．最終確定25 mL甲醇，每次超聲提取30min為最佳提取方法．

3．3 流動(dòng)相的選擇

分別考察了以乙腈－冰醋酸溶液(體積比為20∶80)［11］、甲醇－冰醋酸［12］(體積比為42∶58)、乙腈－水(體積比為30∶70)［13］等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果選擇以乙腈－水(體積比為30∶70)所得到的色譜圖基線較為平穩(wěn)，分離效果好．

4 結(jié)語(yǔ)

本研究中，制劑中蒼耳子、野菊花通過(guò)薄層色譜法進(jìn)行的薄層定性鑒別，對(duì)鼻淵通竅顆粒蒙花苷的含量采用HPLC進(jìn)行的測(cè)定，具有專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為鼻淵通竅顆粒的綜合質(zhì)量控制提供了科學(xué)補(bǔ)充方法．

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