麻醉方法對痙攣型癱瘓大鼠動物模型構建的影響①

王玉昌，龐偉，許洪偉，馮歡歡，范艷萍

麻醉方法對痙攣型癱瘓大鼠動物模型構建的影響①

王玉昌，龐偉，許洪偉，馮歡歡，范艷萍

目的探討雙側頸總動脈間斷性結扎術建立大鼠痙攣型癱瘓模型時的最適麻醉劑量及方式。方法Wistar大鼠60只，隨機分成6組，每組10只，均行雙側頸總動脈間斷性結扎術。A組予10%水合氯醛5 ml/kg皮下注射，B組予10%水合氯醛4 ml/kg皮下注射，C組予10%水合氯醛4 ml/kg腹腔注射，D組予10%水合氯醛3 ml/kg皮下注射，E組予10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射，F組予10%水合氯醛2 ml/kg皮下注射。比較每組麻醉起效時間、維持時間、術中死亡率。結果A組在麻醉中全部死亡，F組無深度麻醉。B組起效時間(6.5±0.7)min，維持時間(121.4±3.9)min，死亡率0；C組起效時間(5.5±1.1)min，維持時間(122.0±3.6)min，死亡率30%；D組起效時間(9.6±0.8)min，維持時間(106.7±3.7)min，死亡率0；E組起效時間(7.4±1.2)min，維持時間(105.3±3.5) min，死亡率20%。皮下注射總體死亡率0，腹腔注射總體死亡率25%。結論雙側頸總動脈間斷性結扎術建立大鼠痙攣型癱瘓模型時，采用10%水合氯醛4 ml/kg皮下注射麻醉，大鼠麻醉死亡率低，起效時間短，維持時間長。

痙攣型癱瘓；水合氯醛；麻醉；雙側頸總動脈間斷性結扎術；大鼠

[本文著錄格式]王玉昌，龐偉，許洪偉，等.麻醉方法對痙攣型癱瘓大鼠動物模型構建的影響[J].中國康復理論與實踐, 2015,21(3):269-271.

CITED AS:Wang YC,Pang W,Xu HW,et al.Anesthesia selection for modeling spastic paralysis in rats[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian,2015,21(3):269-271.

痙攣型腦癱是腦性癱瘓中發病率最高的一種類型，約占腦癱總數的60%～70%[1]。身體大肌群的痙攣不僅限制個體功能的發揮，還嚴重影響個體的社會參與，導致許多兒童終生殘疾，成為臨床、公共衛生和社會問題[2-3]。構建一種穩定的痙攣型癱瘓模型能夠更好地對痙攣肌深入研究。

麻醉是基礎研究的基本技術之一，也是體現對動物人文關懷的一項重要內容[4-6]。本研究探討雙側頸總

動脈間斷性結扎術建造痙攣性癱瘓模型時，麻醉劑的最適劑量及給藥方式。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級5日齡Wistar新生大鼠60只，體重(21.10± 1.25)g，由吉林長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，動物許可證號：SCXK(吉)-2011-0004。室溫21～26℃、相對濕度43%～45%環境下飼養。

大鼠按體重編號01～60，運用隨機數字表法，隨機確定抽樣的起點和抽樣的順序，依次抽出10個數字，進入A、B、C、D、E、F組。A組予10%水合氯醛5 ml/kg皮下注射；B組予10%水合氯醛4 ml/kg皮下注射；C組予10%水合氯醛4 ml/kg腹腔注射；D組予10%水合氯醛3 ml/kg皮下注射；E組予10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射；F組予10%水合氯醛2 ml/kg，皮下注射。

1.2 方法

麻醉前禁食24 h，禁飲6 h。行腹腔注射麻醉時，用左手的小指與無名指抓住大鼠尾巴，另外3個手指抓住大鼠頸部，使腹部向上，頭處于低位，使內臟移向上腹；右手持注射器于右下腹部刺入，向前穿行0.5 cm，再以45°穿過腹肌[7]。行皮下注射麻醉時，左手的小指與無名指抓住大鼠的尾巴，另外3個手指抓住大鼠頸部，使腹部向上；右手持注射器于右下腹部刺入皮下，針頭刺入角度不宜大于45°，以免刺入肌層。

1.3 麻醉效果觀察

行雙側頸總動脈間斷性結扎術的麻醉要求為深度麻醉，麻醉維持時間≥90 min。麻醉給藥后，動物倒下，全身無力，肌肉松弛，呼吸平穩，針刺大鼠足底無反應，表明已達到適宜的麻醉狀態。記錄從第1次腹腔注射或皮下注射到針刺大鼠足底無反應的時間為麻醉起效時間。一段時間后，大鼠四肢開始抖動，此時針刺大鼠足底有反應，表明開始進入蘇醒狀態。從大鼠麻醉起效到針刺大鼠足底有反應的時間記作麻醉維持時間[8]。大鼠麻醉后，若呼吸心跳停止，則判斷為麻醉中死亡。

1.4 統計學分析

運用SPSS 17.0統計軟件對數據進行處理。起效時間和維持時間用(±s)表示，死亡率用百分比表示。起效時間和維持時間組間差異顯著性檢驗采用t檢驗，皮下注射與腹腔注射組間差異顯著性檢驗采用χ2檢驗。顯著性水平α=0.05。

2 結果

A組在麻醉中全部死亡，F組80%未達到深度麻醉，其他20%麻醉維持時間＜90 min，均不符合手術要求，不進行統計學分析。

4組起效時間由小到大排列依次為：C組＜B組＜E組＜D組。4組麻醉維持時間從大到小排列依次為：B組=C組＞D組=E組。見表1。

B組、D組均無麻醉中死亡大鼠；C組死亡3只，E組死亡2只。皮下注射總體死亡率0，腹腔注射總體死亡率25%(χ2=7.916,P=0.048)。

表1 各組起效時間、維持時間比較(min)

綜合水合氯醛的起效時間、維持時間、死亡率及手術的具體要求，采用B組10%水合氯醛4 ml/kg皮下注射進行麻醉為最佳方案。

3 討論

隨著國內外對骨骼肌痙攣的深入研究，發現特有的功能狀態影響著肌肉的收縮特性[9-10]。痙攣是一個復雜的問題，可以作為獨立因素對個體造成殘疾，也可以與其他方面的問題，如疼痛、感覺異常、攣縮等協同，阻礙患者的康復進程[11]。《國際功能、殘疾與健康分類》(ICF)理論框架給了現代康復醫學新的理論指導[12]。骨骼肌痙攣增加了原發性疾病的致殘率，直接影響個體的活動能力，嚴重者甚至影響個體的社會參與能力。Martin等一直在找尋痙攣嚴重程度的內在誘因[13-15]，而構建一種穩定的痙攣型癱瘓模型能更好地深入研究痙攣。

實驗動物麻醉是動物實驗成功的前提之一。合理、合適的麻醉不僅能保證實驗的正常進行，還能體現對待實驗動物的人道主義[16-18]。在成熟大鼠的麻醉

中，腹腔注射給藥一直被廣泛運用。本研究是對5日齡新生大鼠行雙側頸總動脈間斷性結扎術[19]建立痙攣型癱瘓模型而設計，新生乳鼠在麻醉劑的注射方式及麻醉劑量的耐受性均有別于成熟大鼠。

國內外報道，腹腔注射水合氯醛麻醉，大鼠死亡率為10%～20%[20-22]。本組腹腔注射麻醉的死亡率為25%，超過了以往研究的平均水平。腹腔注射全身麻醉的劑量經驗值為6 ml/kg。在預實驗中，10%水合氯醛6 ml/kg，無論腹腔注射還是皮下注射，死亡率均為100%。故本研究設定了5 ml/kg、4 ml/kg、3 ml/kg、2 ml/kg 4個劑量，皮下注射與腹腔注射兩種注射方式進行比較。在本研究顯示，用5 ml/kg進行麻醉，死亡率仍為100%；而2 ml/kg皮下注射麻醉不符合造模手術對麻醉要求。

綜合起效時間、維持時間、死亡率及手術的具體要求，本研究建議，對5日齡Wistar仔鼠，麻醉維持時間超過90 min時，麻醉劑量推薦10%水合氯醛4 ml/kg，相對安全的注射方式為皮下注射。

建立痙攣型癱瘓模型對仔鼠的種系沒有過多要求。國際上常用的實驗大鼠為Wistar種系和Sprague-Dawley種系等。Sprague-Dawley新生大鼠麻醉劑量是否與Wistar大鼠一致，需要進一步研究。

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Anesthesia Selection for Modeling Spastic Paralysis in Rats

WANG Yu-chang,PANG Wei,XU Hong-wei,FENG Huan-huan,FAN Yan-ping
Rehabilitation Medical Research Institute of Jiamusi University,Jiamusi,Heilongjiang,154002,China

Objective To explore the optimal dose and ways of anesthesia for creating a rat model of spastic paralysis with intermittent bilateral common carotid artery ligation.Methods 60 Wistar rats were randomly divided into groups A,B,C,D,E and F.Group A was anaesthetized with 10%chloral hydrate 5 ml/kg injected subcutaneously,while group B with 4 ml/kg subcutaneously,group C with 4 ml/kg intraperitoneally,group D with 3 ml/kg subcutaneously,group E with 3 ml/kg intraperitoneally,group F with 2 ml/kg subcutaneously.The onset and duration of anesthesia,and intraoperative and postoperative mortality were compared.Results All the rats in the group A died during anesthesia,while the group F did not achieve the depth of anesthesia,and abandoned.The onset time was(6.5±0.7)min,maintained(121.4± 3.9)min,mortality was 0 in the group B,and it was(5.5±1.1)min,(122.0±3.6)min,30%in the group C;(9.6±0.8)min,(106.7±3.7)min,0 in the group D,(7.4±1.2)min,(105.3±3.5)min,20%in the group E.The overall mortality rate was 0 in the groups accepted subcutaneous injected and 25%of intraperitoneal injection.Conclusion Anesthesia with 10%chloral hydrate 4 ml/kg subcutaneous injection is optimal of lower mortality,faster onset and longer maintaining in rats for spastic paralysis model with intermittent bilateral common carotid artery ligation.

spastic paralysis;chloral hydrate;anesthesia;intermittent bilateral common carotid artery ligation;rats

10.3969/j.issn.1006-9771.2015.03.006

R741

A

1006-9771(2015)03-0269-03

2014-11-24

2014-12-19)

1.黑龍江省研究生創新科研項目(No.LM2014-049)；2.佳木斯大學校級科技創新團隊(No.Cxtd-2013-02)。

佳木斯大學康復醫學院，黑龍江省小兒腦性癱瘓防治療育中心，黑龍江佳木斯市154002。作者簡介：王玉昌(1987-)，男，漢族，山東曹縣人，碩士研究生，研究方向：小兒腦損傷的發病機制和防治研究。通訊作者：龐偉，男，副教授、副主任醫師。E-mail:pangwei76@aliyun.com。