正交試驗法優選葛根配方顆粒的提取工藝

杜遠東

陜西省漢中市食品藥品檢驗檢測中心，陜西 漢中 723000

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata (Wild.)Ohwi 或甘葛藤P.thomsonii Benth 的干燥根，其主要活性成分為異黃酮類化合物，如葛根素、大豆素、大豆苷等。葛根配方顆粒是葛根飲片經水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥顆粒劑［1］。將葛根飲片制備為顆粒劑，可以有效地去除植物纖維等無活性成分，增加穩定性，易儲存，服用方便。

1 材料與儀器

1.1 材料 葛根(西安盛興飲片廠);葛根素對照品(批號:0766-200611，中國藥品生物制品檢定所);甲醇(色譜級);超純水(實驗室自制)。

1.2 儀器 Waters 高效液相色譜儀(Waters2695 Separations Module，Waters2996 PAD 檢測器)，含在線真空脫氣機、四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱;梅特勒GB204 電子天平;SB3200DT 超聲波清洗機(寧波新莖生物科技股份有限公司);101 型電熱鼓風干燥箱(北京科偉永鑫實驗儀器設備廠);艾柯-Advanced-06 型超純水機(成都唐氏康寧科技發展有限公司)。

2 方法與結果

2.1 提取方法

2.1.1 采用傳統工藝提取 稱取100g 藥材，加入水量沒過藥材面1～2cm 即可，浸泡0.5h，用武火煎煮至沸騰，然后改用文火煎煮，30min/次，提取2 次，合并藥液，濃縮，定容至250ml，備用。

2.1.2 水沸后提取 稱取100g 藥材，加入沸水中，水量以沒過藥材面1～2cm 即可，武火煮沸后，改用文火，30min/次，提取2 次，合并藥液，濃縮，定容至250ml，備用。

2.1.3 水提 稱取藥材100g，分別加入10、8 倍量的水提取，第一次提取1h，第二次提取30min，濾出藥液，合并藥液，濃縮，定容至250ml，備用。

2.1.4 60%乙醇提取［2］稱取100g 藥材，加入5 倍量的60%乙醇回流提取，第一次提取1.5h，第二次提取1 h，濾取藥液，合并藥液，減壓回收乙醇，定容至250ml，備用。

2.1.5 95% 乙醇提取 稱取100g 藥材，加入5 倍量的95%乙醇回流提取，第一次提取1.5h，第二次提取1 h，濾取藥液，合并藥液，減壓回收乙醇，定容至250ml，備用。

2.2 高效液相色譜測定含量

2.2.1 色譜條件［3］以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相:甲醇-水(25∶75);檢測波長:250nm。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素標準品10.4mg，加30%的乙醇定容至50ml，稀釋5 倍，制成2mg/50ml 的對照品溶液，用微孔濾膜過濾，備用。

2.2.3 供試品溶液 吸取各樣品溶液2ml，用30%的乙醇定容至100ml，用微孔濾膜過濾，備用。

2.2.4 結果 由表1 可知，60%乙醇提取所得的葛根素含量最高，因此溶劑選擇60%乙醇。

表1 不同提取方法葛根素含量結果

2.3 正交設計試驗優選葛根提取工藝 選取浸泡時間(A)、加醇量(B)、提取時間(C)、提取次數(D)四個水平，以葛根素含量與干膏收率為指標的進行正交試驗，優化葛根提取工藝。按“2.2”的方法測定葛根素含量，因素水平、正交試驗、正交試驗結果、直觀分析、方差分析的結果見表2、3、4、5、6。

表2 正交因素水平表

表3 正交試驗設計

表4 正交試驗結果

表5 直觀分析

表6 方差分析

以干膏收率與葛根素含量的綜合評分為考察指標，直觀分析表(表5)中極差R 值最小的為誤差項。對各因素進行直觀分析，A 因素:K2＞K3＞K1;C 因素:K2＞K3＞K1。D 因素:K2＞K3＞K1;B 因素干膏收率為K1＞K3＞K2;含量測定為K2＞K3＞K1，綜合考慮，B 因素選K3。根據以上結果分析得出工藝為A2B3C2D2，即為用60%乙醇，12倍的量，浸泡1h，提取2 次，每次1.5 h。

表7 驗證試驗結果

2.4 驗證試驗 分別稱取20g 葛根藥材，按優選最佳工藝條件進行3 次驗證試驗，結果見表7。

3 結論

正交試驗結果表明，該優選工藝合理、穩定、重現性好，為葛根配方顆粒的生產工藝奠定了基礎。

［1］顧志平，陳碧珠，馮瑞之.中藥葛根及其同屬植物資源的利用和評價［J］.藥學學報，1996，31 (5):3.

［2］匡海學.中藥化學［M］.1 版.北京:中國中醫藥出版社，2003:178.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:313.