HPLC 法測定參芪健胃顆粒中阿魏酸含量

勾曉丹 姜麗華 張瑩瑩 趙明杰

1.遼寧省朝陽市藥品檢驗檢測所，遼寧 朝陽 1220002.遼寧省朝陽市食品藥品監督執法支隊，遼寧 朝陽 122000

參芪健胃顆粒收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十冊，由黨參、當歸、黃芪等十四味藥材加工制成。具有溫中健脾、理氣和胃之功效。主治脾胃虛寒型的慢性萎縮性胃炎、適用于胃脘脹痛、痞悶不適、喜氣喜按、噯氣呃逆等癥。原標準中只有性狀、鑒別和檢查項，無其他檢定方法。為控制參芪健胃顆粒的質量，本文參考有關文獻，采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法對處方中當歸的有效成分阿魏酸的含量進行了測定，經方法學驗證，結果較為滿意，為參芪健胃顆粒定量指標提供了依據。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器 島津LC-2010A 型高效液相色譜儀(包括LC-2010 型紫外檢測器;LC Solution 色譜工作站);CPA225D 型電子天平(十萬分之一);BSA224-CW 型電子天平(萬分之一)。

1.2 試劑與試藥 乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水;阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:110773-201313);參芪健胃顆粒(河南輔仁堂制藥有限公司，批號:201311421、201403232、201411111)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱CAPCELL PAK C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.085%磷酸(17∶83);柱溫:35℃，體積流量:1.0 ml/min;檢測波長316 nm;對照液和供試品液進樣量均為10 μl。理論板數:按阿魏酸計算理論板數不低于5000;分離度大于1.5，外標法計算含量。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取對照品12mg，置100ml 量瓶，加入70%甲醇適量使溶解，標定至刻度，搖勻。精取5ml 置50ml 量瓶，70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異下供試品適量，研細，精密稱定1.8g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續濾液經0.45μm 濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照液 按照處方制法制備缺少當歸的模擬樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 陰性干擾實驗 取“2.2”項下3 種溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀測定。結果陰性對照液色譜圖中在阿魏酸峰對應的保留時間附近未檢出干擾峰(圖1)。

2.3.2 線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20μl 注入液相色譜儀，測定，以濃度(X)為橫坐標，以峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=62811255.05X-7641.88 (r=0.9999)。結果表明，阿魏酸在0.01354～0.2708μg 范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取對照液10 μl，重復進樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計算，結果RSD=0.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一批號樣品6 份，分別依法處理，測定結果RSD=0.5%，表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗 取同一供試品溶液，室溫放置，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h 進樣，測得峰面積值RSD=0.8%。結果表明，供試品溶液在24 h 內基本穩定。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取己知含量的樣品(批號:201411111，阿魏酸含量為0.0079 mg/g)6 份，每份1.8g，精密加入阿魏酸對照品溶液(0.0120mg/ml)1ml，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計算回收率(表1)。

表1 回收率試驗測定結果

2.4 樣品含量的測定 取3 批樣品，按供試品溶液方法制備，分別進樣10μl，依法測定，采用外標法計算樣品中阿魏酸的含量(表2)。

表2 樣品中阿魏酸的測定結果(n=3)

3 討論

本實驗中，阿魏酸在316nm 處有最大吸收，因此選用316nm 作為檢測波長。

在實驗過程中，按照參考文獻，用乙腈-0.085%磷酸，阿魏酸色譜峰基本達到了基線分離，其他組分無干擾，且穩定性良好。經過反復實驗，最終建立了適合本品的流動相比例為乙腈-0.085%磷酸(17∶83)。

綜合考慮提取分離中藥有效成分常用方法的優缺點，本方法以70%甲醇為溶劑，由于溶劑浸提法費時，效率一般，故采用加熱回流提取法作為參芪健胃顆粒中阿魏酸的提取方法。

參芪健胃顆粒具有溫中健脾、理氣和胃之功效，用途廣泛，但原有標準過于簡單。本文闡述的含量測定方法專屬性強、重現性好、陰性對照無干擾、方法可靠，使參芪健胃顆粒原有的質量標準得到充實、完善，更能準確、有效控制參芪健胃顆粒的質量。

［1］國家藥典委員會.中國藥典一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:124-125.

［2］中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥方成制劑第十冊［S］.北京:人民衛生出版社，1995:103.

［3］邱穎.RP-HPLC 法測定丹燈通腦軟膠囊中葛根素和阿魏酸的含量［J］.安徽醫藥，2013，17 (2):212-213.

［4］黃羅，郭健新，劉詠梅，等.HPLC 測定阿魏酸的含量探討［J］.中成藥，2004，26 (2):134-136.

［5］夏明，董曉燁.當歸養榮丸中阿魏酸的含量測定［J］.醫藥導報，2010，29 (1):103-104.