高脂飲食致大鼠脂肪肝實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?/h1>
2015-12-14 05:08:26巴圖得力根韓志強(qiáng)娜日蘇
中國(guó)民族民間醫(yī)藥 2015年15期 關(guān)鍵詞：血脂
張 偉 巴圖得力根 韓志強(qiáng) 娜日蘇
1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007;2.內(nèi)蒙古通遼市醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007;3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥臨床藥理研究所，內(nèi)蒙古 通遼 028007
隨著人們膳食結(jié)構(gòu)的改變，加上缺乏運(yùn)動(dòng)等原因，脂肪肝的發(fā)病率逐漸增高。目前，西方發(fā)達(dá)國(guó)家中的脂肪肝發(fā)病率為10%～24%，而我國(guó)脂肪肝發(fā)病率也成為病毒性肝炎之后的第二大肝病，上海和廣州兩地，脂肪肝的發(fā)病率就高達(dá)20%。如果不及時(shí)治療，將會(huì)進(jìn)一步惡化，導(dǎo)致肝纖維化甚至肝硬化，嚴(yán)重影響人們的身體健康，給家庭和社會(huì)帶來(lái)很大的負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討脂肪肝模型的復(fù)制方法，為進(jìn)一步研究脂肪肝發(fā)病機(jī)理提供一種較好的動(dòng)物模型。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 高脂飼料配方 膽固醇(批號(hào):F20030410)、脫氧膽酸鈉(批號(hào):F20030410)、吐溫80 (批號(hào):F20030410)、1-2 丙二醇(批號(hào):F20030410)均為分析純，夠自西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司;丙賽優(yōu)(批號(hào):030505，上海朝暉藥業(yè)有限公司);豬油自制。
1.1.2 脂肪乳的配制［1］按12.5%吐溫80、10%1-2 丙二醇、0.5%丙基硫氧嘧啶、15%豬油、1% 脫氧膽酸鈉、5%膽固醇的比例配制。先將豬油30g 放在200ml 的燒杯中，放在磁力攪拌器上加熱至40℃水浴中融化，加入10g膽固醇、1g 研細(xì)的丙基硫氧嘧啶，充分?jǐn)噭颍尤脒m量吐溫不斷攪拌直至乳化現(xiàn)象產(chǎn)生，制成油相。另一燒瓶中加入30ml 蒸餾水和1-2 丙二醇20ml，加熱至60℃，然后加入膽鹽2g 溶解，制成水相。將兩個(gè)燒杯液體充分混勻即可成為穩(wěn)定的脂肪乳劑，使用時(shí)37℃水浴融。
1.1.3 普通飼料 玉米面35.45%，白面29.55%，麩皮12.5%，豆粉12%，魚粉8%，酵母粉2%。
1.1.4 試劑盒 TG、TC 測(cè)定試劑盒(北京福瑞生物工程公司);AST、ALT 考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2 方法 雄性清潔級(jí)Wistar 大鼠28 只(SCXK 吉-20110-0004)，體重(200±10)g。隨機(jī)抽取8 只作為對(duì)照組，用生理鹽水灌胃每日1 次，35 d 后腹腔靜脈抽血行血脂四項(xiàng)及肝功能檢測(cè)、肝重測(cè)定以及肝臟病理檢查。其余20 只大鼠作為高脂乳劑組行脂肪肝模型復(fù)制，用高脂乳劑灌胃每日1 次，飼養(yǎng)后的第14、28d 各取5 只大鼠處死，第35d 另取10 只大鼠和對(duì)照組8 只大鼠一同處死，腹腔靜脈抽血行血脂四項(xiàng)及生化檢測(cè)、肝重測(cè)定以及肝臟病理檢查，觀察肝臟脂肪變性程度。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12h，用10%的水合氯醛以0.35ml/l00g［2］體重經(jīng)腹腔內(nèi)注射麻醉后開腹，腹下腔靜脈采血，取3ml 全血室溫靜置15min，3000r/min 離心30min 分離血清，備測(cè)血脂四項(xiàng)、肝功。各組大鼠于肝右葉取300mg 肝組織標(biāo)本，冰水中制成10%的勻漿，4℃4000r/min 離心10min，提取上清液，用酶法測(cè)定TG、TC 含量。
1.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法
1.3.1 檢測(cè)指標(biāo) AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL 含量;肝勻漿TG、TC 的含量;檢測(cè)肝組織病理。
1.3.2 檢測(cè)方法 ①肝功能及血脂四項(xiàng)指標(biāo)AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL 采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。②肝勻漿TG 和TC 用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。③組織病理觀察:病理診斷是判斷脂肪肝程度的金標(biāo)準(zhǔn)。取材后經(jīng)10%福爾馬林固定3h 后，梯度酒精逐級(jí)脫水，石蠟包埋，冷凍，切片厚5μm，HE 染色觀察肝臟細(xì)胞脂肪變程度和范圍。依據(jù)脂肪肝評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。
1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)療效評(píng)估參照Brunt 等［3］制訂的脂肪變分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，即0 級(jí):肝細(xì)胞脂變細(xì)胞占0～5%;I級(jí):肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞占5%～33%;II 級(jí):肝細(xì)胞肪變細(xì)胞占33%～66%;III 級(jí):肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞占66%以上。采用生化指標(biāo)AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL，肝勻漿TG 和TC，來(lái)判定肝功能和血脂的療效。
1.5 統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用t 檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況 高脂乳劑灌胃飼養(yǎng)10d 后大鼠皮毛蓬亂而無(wú)光澤，精神萎靡，食欲不振，體重減輕。生理鹽水組大鼠體重呈增加趨勢(shì)。
2.2 大鼠體重、肝重、肝指數(shù) 與生理鹽水組相比，高脂乳劑組肝指數(shù)(肝濕重/體重×100%)在第4 周末明顯升高(P＜0.05)，第5 周末這種差異性仍然存在。高脂乳劑組大鼠體重明顯小于生理鹽水組，肝重相對(duì)于高脂乳劑組呈上升趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1.
表1 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)的比較(±s)
表1 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.3 血脂水平情況 高脂乳劑組血清中TC、TG、LDL-C含量從第2 周末就有明顯上升(P＜0.05)，而HDL-C 則明顯降低(P＜0.05)。且該趨勢(shì)在第4、5 周末仍然存在差異性。見表2、表3.
表2 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠TG、TC 的比較(±s)
表2 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠TG、TC 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
表3 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠HDL-C、LDL-C 的比較(±s)
表3 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠HDL-C、LDL-C 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.4 大鼠肝功能的變化 與生理鹽水組相比，高脂乳劑組血清中ALT、AST 從第2 周末就明顯上升(P＜0.05)，且該趨勢(shì)在第4、第5 周末仍然存在差異性。其中以ALT 變化更為顯著。
表4 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠ALT、AST 的比較(±s)
表4 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠ALT、AST 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.5 肝內(nèi)脂質(zhì)變化 高脂乳劑組肝勻漿TG、肝勻漿TC 從第2 周末就有明顯上升(P＜0.05)，且該趨勢(shì)在第4、第5 周末仍然存在差異性。其中以肝勻漿TC 變化更為顯著。見表5。
表5 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠肝勻漿TG、TC 的比較(±s)
表5 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠肝勻漿TG、TC 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.6 肝臟組織學(xué)改變 高脂乳劑組大體見肝表面有油膩感，鋨酸染色光鏡下第14d 肝細(xì)胞內(nèi)有少量脂滴，第28d約1/ 3 肝細(xì)胞含有細(xì)顆粒狀脂滴，第35d 約2/ 3 以上肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴，肝竇被擠壓變窄，肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。生理鹽水組肝臟則未見以上改變。見圖1。
3 討論
脂肪肝是多種病因引起的肝臟脂肪變性，流行病學(xué)調(diào)查顯示，酒精和肥胖是引起慢性脂肪肝的主要原因。20世紀(jì)80年代末期日美學(xué)者利用B 超檢查發(fā)現(xiàn)，正常人群脂肪肝發(fā)病率約為的10%，而肥胖患者的發(fā)病率為50%，嗜酒者的發(fā)病率為57.7%。脂肪肝的發(fā)病機(jī)理至今尚未明確，但通常認(rèn)為脂肪肝的形成與脂肪代謝障礙有關(guān)，是肝細(xì)胞脂肪合成增加和氧化減少所致，肝細(xì)胞中的甘油三酯、極低密度脂蛋白合成和排出不平衡是形成脂肪肝的原因。目前，高脂血癥動(dòng)物造模方法各異，但主要有先天性、轉(zhuǎn)基因和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的三種實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型［4］。前兩種由于來(lái)源困難和代價(jià)昂貴，且與人類脂肪肝的形成特點(diǎn)不符合，限制了其應(yīng)用，導(dǎo)致高脂飼料喂養(yǎng)或灌胃形成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型在國(guó)內(nèi)應(yīng)用最為廣泛。但高脂血癥動(dòng)物模型與其他疾病動(dòng)物造模比較，存在周期過(guò)長(zhǎng)、費(fèi)用過(guò)高或模型組血脂水平參差不齊等缺點(diǎn)。張東等［5］通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在豬油和膽固醇的基礎(chǔ)上加入丙基硫氧嘧啶，在10d、20d、30d時(shí)CHO 和LDL 均升高、且HDL 顯著降低，但TG 未見變化;在豬油和膽固醇的基礎(chǔ)上同時(shí)加入膽鹽和丙基硫氧嘧啶，各項(xiàng)指標(biāo)在不同時(shí)期差異均有顯著性，說(shuō)明本配方可以造成理想的高脂血癥模型，且造模所需時(shí)間最短，10d 即可，穩(wěn)定性較高，隨時(shí)間延長(zhǎng)，血脂水平也不斷升高。倪鴻昌等［6］又在以上配方基礎(chǔ)上提出用高脂飼料改良方誘導(dǎo)的脂肪肝動(dòng)物模型，因其病理特征與人類相似，4 周成為穩(wěn)定脂肪肝模型，且價(jià)格低廉，方法簡(jiǎn)單而被廣泛使用。本實(shí)驗(yàn)在倪鴻昌等高脂配方基礎(chǔ)上又加以改動(dòng)，用高脂飼料乳劑每日灌胃誘導(dǎo)大鼠脂肪肝，鋨酸染色顯示，第14d出現(xiàn)較多的脂滴積累;第28d 超過(guò)2/3 以上的細(xì)胞內(nèi)均出現(xiàn)脂滴，并隨時(shí)間延長(zhǎng)小泡狀脂滴有相互融合的趨勢(shì);第35d 由于肝細(xì)胞內(nèi)充滿脂肪空泡，將核推向一邊，肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，肝竇變窄，不規(guī)則。體重小于正常大鼠，肝重大于正常大鼠，可能由于高脂飼料膽固醇高，妨礙鼠的生長(zhǎng)發(fā)育，致呈現(xiàn)皮毛蓬亂而無(wú)光澤，精神萎靡，食欲不振。
［1］倪鴻昌，李俊，金涌，等.大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004，20 (6):703-706.
［2］曾民德.脂肪肝［J］.中華消化雜志，1999，19 (2):120-122.
［3］Brunt EM，JarmeyC G，Di Bisceglie AM，et al.Nonalcoholics teatohepatitis:a Proposal for grading and staging the histological lesions ［J］.Am J Gastroenterol，1999;94:2467-2474.
［4］.Matteoni CA，Younossi ZM，Gramlieh T，et al.Nonalcoholic fattyliverdisease:aspectrum of clinical andpathological sevedty ［J］.Gastroenterology，1999，116:1413-1419.
［5］張東，武海軍，陳士萍，等.人鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥五種造模方法的比較［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2007，23 (9):1254-1256.
［6］.劉嵩，盧笑叢，葛建，等.高脂所致脂肪肝動(dòng)物模型建立的動(dòng)態(tài)研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22 (11):1399-403.
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隨著人們膳食結(jié)構(gòu)的改變，加上缺乏運(yùn)動(dòng)等原因，脂肪肝的發(fā)病率逐漸增高。目前，西方發(fā)達(dá)國(guó)家中的脂肪肝發(fā)病率為10%～24%，而我國(guó)脂肪肝發(fā)病率也成為病毒性肝炎之后的第二大肝病，上海和廣州兩地，脂肪肝的發(fā)病率就高達(dá)20%。如果不及時(shí)治療，將會(huì)進(jìn)一步惡化，導(dǎo)致肝纖維化甚至肝硬化，嚴(yán)重影響人們的身體健康，給家庭和社會(huì)帶來(lái)很大的負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討脂肪肝模型的復(fù)制方法，為進(jìn)一步研究脂肪肝發(fā)病機(jī)理提供一種較好的動(dòng)物模型。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 高脂飼料配方 膽固醇(批號(hào):F20030410)、脫氧膽酸鈉(批號(hào):F20030410)、吐溫80 (批號(hào):F20030410)、1-2 丙二醇(批號(hào):F20030410)均為分析純，夠自西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易有限公司;丙賽優(yōu)(批號(hào):030505，上海朝暉藥業(yè)有限公司);豬油自制。
1.1.2 脂肪乳的配制［1］按12.5%吐溫80、10%1-2 丙二醇、0.5%丙基硫氧嘧啶、15%豬油、1% 脫氧膽酸鈉、5%膽固醇的比例配制。先將豬油30g 放在200ml 的燒杯中，放在磁力攪拌器上加熱至40℃水浴中融化，加入10g膽固醇、1g 研細(xì)的丙基硫氧嘧啶，充分?jǐn)噭颍尤脒m量吐溫不斷攪拌直至乳化現(xiàn)象產(chǎn)生，制成油相。另一燒瓶中加入30ml 蒸餾水和1-2 丙二醇20ml，加熱至60℃，然后加入膽鹽2g 溶解，制成水相。將兩個(gè)燒杯液體充分混勻即可成為穩(wěn)定的脂肪乳劑，使用時(shí)37℃水浴融。
1.1.3 普通飼料 玉米面35.45%，白面29.55%，麩皮12.5%，豆粉12%，魚粉8%，酵母粉2%。
1.1.4 試劑盒 TG、TC 測(cè)定試劑盒(北京福瑞生物工程公司);AST、ALT 考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2 方法 雄性清潔級(jí)Wistar 大鼠28 只(SCXK 吉-20110-0004)，體重(200±10)g。隨機(jī)抽取8 只作為對(duì)照組，用生理鹽水灌胃每日1 次，35 d 后腹腔靜脈抽血行血脂四項(xiàng)及肝功能檢測(cè)、肝重測(cè)定以及肝臟病理檢查。其余20 只大鼠作為高脂乳劑組行脂肪肝模型復(fù)制，用高脂乳劑灌胃每日1 次，飼養(yǎng)后的第14、28d 各取5 只大鼠處死，第35d 另取10 只大鼠和對(duì)照組8 只大鼠一同處死，腹腔靜脈抽血行血脂四項(xiàng)及生化檢測(cè)、肝重測(cè)定以及肝臟病理檢查，觀察肝臟脂肪變性程度。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12h，用10%的水合氯醛以0.35ml/l00g［2］體重經(jīng)腹腔內(nèi)注射麻醉后開腹，腹下腔靜脈采血，取3ml 全血室溫靜置15min，3000r/min 離心30min 分離血清，備測(cè)血脂四項(xiàng)、肝功。各組大鼠于肝右葉取300mg 肝組織標(biāo)本，冰水中制成10%的勻漿，4℃4000r/min 離心10min，提取上清液，用酶法測(cè)定TG、TC 含量。
1.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法
1.3.1 檢測(cè)指標(biāo) AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL 含量;肝勻漿TG、TC 的含量;檢測(cè)肝組織病理。
1.3.2 檢測(cè)方法 ①肝功能及血脂四項(xiàng)指標(biāo)AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL 采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。②肝勻漿TG 和TC 用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。③組織病理觀察:病理診斷是判斷脂肪肝程度的金標(biāo)準(zhǔn)。取材后經(jīng)10%福爾馬林固定3h 后，梯度酒精逐級(jí)脫水，石蠟包埋，冷凍，切片厚5μm，HE 染色觀察肝臟細(xì)胞脂肪變程度和范圍。依據(jù)脂肪肝評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。
1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)療效評(píng)估參照Brunt 等［3］制訂的脂肪變分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，即0 級(jí):肝細(xì)胞脂變細(xì)胞占0～5%;I級(jí):肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞占5%～33%;II 級(jí):肝細(xì)胞肪變細(xì)胞占33%～66%;III 級(jí):肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞占66%以上。采用生化指標(biāo)AST、ALT、TC、TG、LDL、HDL，肝勻漿TG 和TC，來(lái)判定肝功能和血脂的療效。
1.5 統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用t 檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況 高脂乳劑灌胃飼養(yǎng)10d 后大鼠皮毛蓬亂而無(wú)光澤，精神萎靡，食欲不振，體重減輕。生理鹽水組大鼠體重呈增加趨勢(shì)。
2.2 大鼠體重、肝重、肝指數(shù) 與生理鹽水組相比，高脂乳劑組肝指數(shù)(肝濕重/體重×100%)在第4 周末明顯升高(P＜0.05)，第5 周末這種差異性仍然存在。高脂乳劑組大鼠體重明顯小于生理鹽水組，肝重相對(duì)于高脂乳劑組呈上升趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1.
表1 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)的比較(±s)
表1 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.3 血脂水平情況 高脂乳劑組血清中TC、TG、LDL-C含量從第2 周末就有明顯上升(P＜0.05)，而HDL-C 則明顯降低(P＜0.05)。且該趨勢(shì)在第4、5 周末仍然存在差異性。見表2、表3.
表2 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠TG、TC 的比較(±s)
表2 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠TG、TC 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
表3 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠HDL-C、LDL-C 的比較(±s)
表3 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠HDL-C、LDL-C 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.4 大鼠肝功能的變化 與生理鹽水組相比，高脂乳劑組血清中ALT、AST 從第2 周末就明顯上升(P＜0.05)，且該趨勢(shì)在第4、第5 周末仍然存在差異性。其中以ALT 變化更為顯著。
表4 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠ALT、AST 的比較(±s)
表4 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠ALT、AST 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.5 肝內(nèi)脂質(zhì)變化 高脂乳劑組肝勻漿TG、肝勻漿TC 從第2 周末就有明顯上升(P＜0.05)，且該趨勢(shì)在第4、第5 周末仍然存在差異性。其中以肝勻漿TC 變化更為顯著。見表5。
表5 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠肝勻漿TG、TC 的比較(±s)
表5 生理鹽水組和高脂乳劑組大鼠肝勻漿TG、TC 的比較(±s)
注:與生理鹽水組比較，* P ﹤0.05。
2.6 肝臟組織學(xué)改變 高脂乳劑組大體見肝表面有油膩感，鋨酸染色光鏡下第14d 肝細(xì)胞內(nèi)有少量脂滴，第28d約1/ 3 肝細(xì)胞含有細(xì)顆粒狀脂滴，第35d 約2/ 3 以上肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴，肝竇被擠壓變窄，肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。生理鹽水組肝臟則未見以上改變。見圖1。
3 討論
脂肪肝是多種病因引起的肝臟脂肪變性，流行病學(xué)調(diào)查顯示，酒精和肥胖是引起慢性脂肪肝的主要原因。20世紀(jì)80年代末期日美學(xué)者利用B 超檢查發(fā)現(xiàn)，正常人群脂肪肝發(fā)病率約為的10%，而肥胖患者的發(fā)病率為50%，嗜酒者的發(fā)病率為57.7%。脂肪肝的發(fā)病機(jī)理至今尚未明確，但通常認(rèn)為脂肪肝的形成與脂肪代謝障礙有關(guān)，是肝細(xì)胞脂肪合成增加和氧化減少所致，肝細(xì)胞中的甘油三酯、極低密度脂蛋白合成和排出不平衡是形成脂肪肝的原因。目前，高脂血癥動(dòng)物造模方法各異，但主要有先天性、轉(zhuǎn)基因和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的三種實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型［4］。前兩種由于來(lái)源困難和代價(jià)昂貴，且與人類脂肪肝的形成特點(diǎn)不符合，限制了其應(yīng)用，導(dǎo)致高脂飼料喂養(yǎng)或灌胃形成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型在國(guó)內(nèi)應(yīng)用最為廣泛。但高脂血癥動(dòng)物模型與其他疾病動(dòng)物造模比較，存在周期過(guò)長(zhǎng)、費(fèi)用過(guò)高或模型組血脂水平參差不齊等缺點(diǎn)。張東等［5］通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在豬油和膽固醇的基礎(chǔ)上加入丙基硫氧嘧啶，在10d、20d、30d時(shí)CHO 和LDL 均升高、且HDL 顯著降低，但TG 未見變化;在豬油和膽固醇的基礎(chǔ)上同時(shí)加入膽鹽和丙基硫氧嘧啶，各項(xiàng)指標(biāo)在不同時(shí)期差異均有顯著性，說(shuō)明本配方可以造成理想的高脂血癥模型，且造模所需時(shí)間最短，10d 即可，穩(wěn)定性較高，隨時(shí)間延長(zhǎng)，血脂水平也不斷升高。倪鴻昌等［6］又在以上配方基礎(chǔ)上提出用高脂飼料改良方誘導(dǎo)的脂肪肝動(dòng)物模型，因其病理特征與人類相似，4 周成為穩(wěn)定脂肪肝模型，且價(jià)格低廉，方法簡(jiǎn)單而被廣泛使用。本實(shí)驗(yàn)在倪鴻昌等高脂配方基礎(chǔ)上又加以改動(dòng)，用高脂飼料乳劑每日灌胃誘導(dǎo)大鼠脂肪肝，鋨酸染色顯示，第14d出現(xiàn)較多的脂滴積累;第28d 超過(guò)2/3 以上的細(xì)胞內(nèi)均出現(xiàn)脂滴，并隨時(shí)間延長(zhǎng)小泡狀脂滴有相互融合的趨勢(shì);第35d 由于肝細(xì)胞內(nèi)充滿脂肪空泡，將核推向一邊，肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，肝竇變窄，不規(guī)則。體重小于正常大鼠，肝重大于正常大鼠，可能由于高脂飼料膽固醇高，妨礙鼠的生長(zhǎng)發(fā)育，致呈現(xiàn)皮毛蓬亂而無(wú)光澤，精神萎靡，食欲不振。
［1］倪鴻昌，李俊，金涌，等.大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004，20 (6):703-706.
［2］曾民德.脂肪肝［J］.中華消化雜志，1999，19 (2):120-122.
［3］Brunt EM，JarmeyC G，Di Bisceglie AM，et al.Nonalcoholics teatohepatitis:a Proposal for grading and staging the histological lesions ［J］.Am J Gastroenterol，1999;94:2467-2474.
［4］.Matteoni CA，Younossi ZM，Gramlieh T，et al.Nonalcoholic fattyliverdisease:aspectrum of clinical andpathological sevedty ［J］.Gastroenterology，1999，116:1413-1419.
［5］張東，武海軍，陳士萍，等.人鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥五種造模方法的比較［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2007，23 (9):1254-1256.
［6］.劉嵩，盧笑叢，葛建，等.高脂所致脂肪肝動(dòng)物模型建立的動(dòng)態(tài)研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22 (11):1399-403.
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