當歸芍藥散對肝硬化腹水大鼠血管緊張素Ⅱ、內皮素－1的影響

岳曉莉，王成業，姚 瑤，蔡 衡，潘永福，王運來，許 釩

（安徽中醫藥大學藥學院，安徽 合肥 230012）

肝硬化腹水是肝硬化失代償期的重要臨床標志，以肝功能損害及門靜脈高壓為主要臨床表現，并常出現嚴重并發癥，屬于中醫學“臌脹”范疇。其主要病機特點是由多種原因使肝脾腎受損，三臟功能失調，導致氣滯、血瘀、水飲互結為病，屬本虛標實之證。當歸芍藥散出自《金匱要略》，最初用于治療婦科疾病。全方由當歸、芍藥、川芎、澤瀉、茯苓、白術6味藥組成?，F代研究［1］表明，當歸芍藥散方中諸藥均有保肝或利尿的藥理作用：當歸有保護肝細胞和促進肝功能恢復的作用；白芍具有顯著抗肝損傷作用；川芎具有改善門靜脈循環障礙，促進肝臟纖維組織溶解的作用；白術有保肝作用，且利尿作用顯著；澤瀉有保肝、抗脂肪肝、利尿作用；茯苓具有增強免疫、保肝的作用。因此，當歸芍藥散抗肝硬化腹水具有良好的實驗基礎。近年來研究發現，多種血管活性物質與門靜脈高壓癥的形成有關，如血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）、內皮素－1（endothelin－1，ET－1），這些活性物質以不同的方式和途徑影響肝臟和門靜脈的血流動力學［2－4］。本研究通過觀察當歸芍藥散對肝硬化腹水大鼠血漿AngⅡ、ET－1水平的影響，探討AngⅡ、ET－1與肝硬化腹水形成的關系。

1 材料

1．1 藥物及試劑 當歸、芍藥、川芎、白術、茯苓、澤瀉的飲片，均購自安徽協和成藥業飲片有限公司，并經安徽中醫藥大學藥學院金傳山教授鑒定，均符合《中華人民共和國藥典》（2010年版）項下標準。按原方比例（當歸3g，芍藥16g，川芎、澤瀉各8g、白術、茯苓各4g）稱量藥材，加10倍量50%乙醇浸泡60min，水浴回流1．5h，冷卻后收集濾液；再加8倍量50%乙醇水浴回流1．5h，冷卻后收集濾液。合并兩次濾液，過濾，水浴濃縮至所需濃度藥液。分別制備生藥濃度為0．43、0．86、1．72g／mL的當歸芍藥散低、中、高劑量全方藥液［5］。甘利欣：江蘇正大天晴藥業股份有限公司，批號100702；CCl4：分析純，江蘇強盛化工有限公司，批號2008121；福臨門一級菜子油：中糧東海糧油工業有限公司，批號20111010；甲醛：分析純，上海中試化工總公司，批號20101010；苯巴比妥片：上海信誼藥廠有限公司，國藥準字H31022038；無水乙醚：分析純，上海中試化工總公司，批號20101010。

1．2 儀器 MP6001電子天平：上海恒平科學儀器有限公司；TGL－16B高速臺式離心機：上海安亭科學儀器廠；島津全自動生化分析儀；Eppendorf移液器；Labsystem Multiskan－MK2酶標儀；CA－7000全自動血液凝固分析儀：希森美康醫用電子上海有限公司。

1．3 動物 SD大鼠，60只，雄性，SPF級，體質量（220±20）g，由江蘇南京青龍山動物繁殖場提供，生產許可證號為SCXK（蘇）2009－0001。

2 方法

2．1 模型復制、分組及給藥 將雄性SD大鼠隨機分為正常組，模型組，甘利欣組，當歸芍藥散低、中、高劑量組，每組10只。適應性飼養1周后，除正常組外，其余動物給予35%苯巴比妥溶液作為飲用水［6］，1周后恢復正常飲水。參考文獻［7］的方法，給予以下濃度CCl4腹腔注射復制模型：第2～3周為12%CCl4油溶液，第4～5周為14%CCl4油溶液，第6～14周為16%CCl4油溶液，每周2次，給藥劑量為1mL／kg。正常組給予等容積生理鹽水。當歸芍藥散低、中、高劑量組在復制模型同時分別灌胃給予當歸芍藥散低劑量（4．3g／kg）、中劑量（8．6 g／kg）、高劑量（17．2g／kg）藥液，給藥容積均為10 mL／kg。甘利欣組給予甘利欣藥液（相當于甘草酸二銨0．005 25g／kg），每日1次。連續給藥13周，末次給藥12h后，所有大鼠禁食不禁水，于次日乙醚麻醉，取材。

2．2 檢測指標

2．2．1 凝血酶原時間檢測 于第14周末，大鼠乙醚麻醉后，腹主動脈取血，加入枸櫞酸鈉抗凝管，室溫放置30min，3 500r／min，離心10min，分離血漿，全自動血液凝固分析儀檢測血漿凝血酶原時間。

2．2．2 血漿AngⅡ、ET－1檢測 大鼠乙醚麻醉，腹主動脈取血，肝素鈉抗凝，室溫放置30min，3 500 r／min，離心10min，分離血漿。酶聯免疫吸附試驗法檢測血漿AngⅡ、ET－1水平。

2．3 統計學方法 采用SPSS 11．0軟件進行統計學分析。連續型變量采用“均數±標準差（±s）”進行統計學描述。多組間均數比較，采用單因素方差分析；組間均數多重比較，采用LSD法。P＜0．05為差異具有統計學意義。

3 結果

與正常組比較，模型組大鼠凝血酶原時間顯著延長（P＜0．05），血漿 AngⅡ、ET－1水平顯著升高（P＜0．05）。與模型組比較，甘利欣組、當歸芍藥散各劑量組凝血酶原時間均顯著縮短（P＜0．05），血漿AngⅡ、ET－1水平顯著降低（P＜0．05）。當歸芍藥散各劑量組及甘利欣組之間凝血酶原時間和血漿AngⅡ、ET－1水平相比較，差異均無統計學意義（P＞0．05）。見表1。

4 討論

肝硬化腹水因肝、脾、腎三臟功能失調，氣滯血瘀，血行不利，水液積于腹中而成，水停為標，血虛為本。當歸芍藥散重用白芍以柔肝血，緩急止痛，佐以川芎疏肝理氣，與當歸配合又可以行血活血；白術、茯苓崇土健脾，運化水濕，澤瀉淡滲利水。課題組前期研究［7］發現，當歸芍藥散可以明顯減少肝硬化腹水模型大鼠腹水生成以及延緩肝臟病理改變過程，改善肝硬化腹水大鼠肝功能，具有保肝護肝之效。

表1 各組凝血酶原時間、血漿AngⅡ和ET－1水平比較（±s，n＝10）

表1 各組凝血酶原時間、血漿AngⅡ和ET－1水平比較（±s，n＝10）

注：同列含有相同右上標符號的組別相比較，P＞0．05；同列不含相同右上標符號的組別相比較，P＜0．05。

組 別 凝血酶原時間／s AngⅡ／（ng／L）ET－1／（ng／L）正 常 10．95±0．78＊ 31．49±2．84＊ 19．60±2．16＊模 型 12．44±1．29＃ 37．58±6．16＃ 24．49±4．26＃甘利欣 10．96±0．99＊ 34．44±4．77＊＃ 21．43±2．88＊當歸芍藥散低劑量 11．02±0．89＊ 32．54±5．66＊ 19．16±3．17＊當歸芍藥散中劑量 10．93±1．20＊ 31．72±5．83＊ 19．07±2．78＊當歸芍藥散高劑量 10．81±0．62＊ 30．67±3．56＊ 18．76±3．55＊

凝血酶原時間主要由肝臟合成的凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平決定，與肝細胞受損程度呈正相關。肝硬化代償期凝血酶原時間正常，失代償期則有不同程度延長。實驗結果表明，當歸芍藥散高、中、低劑量組凝血酶原時間明顯縮短，表明當歸芍藥散可以改善肝功能受損程度。

AngⅡ廣泛分布于下丘腦、正中隆起、腦干等中樞神經系統，是腎素－血管緊張素－醛固酮系統中最有生物活性的物質，是一種強收縮血管活性因子，其生理作用主要是促進腎上腺皮質球狀帶釋放醛固酮，促進腎小管對鈉和水的重吸收，造成機體鈉水潴留。本實驗中，當歸芍藥散各藥物組AngⅡ均顯著性降低，表明當歸芍藥散可能通過影響腎素－血管緊張素－醛固酮系統而使血漿AngⅡ降低。AngⅡ的減少，可以減少腎臟對水的重吸收，減輕水鈉潴留，從而達到消除腹水的目的。

ET是由21個氨基酸組成的多肽，是目前已知的體內最強的縮血管物質。ET有3種異構體：ET－1、ET－2和 ET－3，其中 ET－1縮血管作用最強。ET－1的主要合成部位是已激活的肝臟星形細胞，與肝臟疾病及其并發癥有重要關系，且與肝臟門靜脈系統有重要的生物學效應［8－9］。ET－1在門脈高壓血管病變過程中起關鍵作用［10－12］：其參與門脈高壓血流動力學的形成，參與腹水的形成，肝硬化患者出現腹水時，血漿ET－1明顯升高，但其機制尚不明確。本實驗中，模型組大鼠血漿ET－1較正常組大鼠明顯升高，可能是因為肝硬化腹水模型大鼠的肝臟受損，肝功能減退，降低了ET－1的清除能力；當歸芍藥散各劑量組ET－1水平明顯降低，且呈現劑量依賴性，表明當歸芍藥散可能通過改善肝硬化腹水大鼠肝功能水平，增強ET－1的清除能力，從而調節門脈高壓系統，減少腹水生成。

本實驗中當歸芍藥散各給藥組均可以降低肝硬化腹水模型大鼠血漿AngⅡ、ET－1水平，表明當歸芍藥散對肝硬化腹水的治療作用可能是通過降低AngⅡ、ET－1而實現的。

［1］劉青云．中藥藥理學［M］．2版．北京：人民衛生出版社，2002：127．

［2］呂小平，詹靈凌，姜海行．一氧化氮、內皮素和抗利尿激素水平變化對肝硬化門脈高壓的影響［J］．臨床薈萃，2000，15（11）：483－484．

［3］韓繼武，張億倬，莊麗維，等．血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑治療肝硬化門脈高壓的研究［J］．中國現代醫學雜志，2005，15（24）：3784－3786．

［4］顧杰，洪嘉禾，徐列明．內皮素在門脈高壓癥中的作用研究進展［J］．臨床肝膽病雜志，2006，22（4）：306－308．

［5］劉俊，宋欣，王滿媛，等．不同提取方法測定當歸芍藥散中芍藥苷和阿魏酸含量的比較研究［J］．亞太傳統醫藥，2010，6（3）：20－22．

［6］葉春華，劉潯陽．四氯化碳綜合法制備大鼠肝硬化模型［J］．醫學臨床研究，2005，22（5）：619－622．

［7］王成業，許釩，王滿媛，等．當歸芍藥散對肝硬化腹水大鼠的干預作用研究［J］．中國中藥雜志，2013，38（6）：871－874．

［8］趙海峰，聞勤生，黃裕新，等．肝硬化患者血漿內皮素和胰高血糖素水平的變化及其臨床意義［J］．臨床內科雜志，2003，20（6）：309－311．

［9］徐心，黎一鳴，周娟．肝動脈血流及一氧化氮、內皮素濃度與肝硬化門脈高壓癥發病機制的實驗研究［J］．陜西醫學雜志，2005，34（9）：1050－1052．

［10］邊姝．肝硬化門脈高壓血管活性物質與不同臨床特征的相關性研究［D］．濟南：山東大學，2009：18．

［11］Bakr AM，Abdalla AF，EI－Marsafawy H，et al．Plasma endothelin－1concentrations in children with cirrhosis and their relationship to renal function and the severity of portal hypertension［J］．J Pediatr Gastroenterol Nutr，2002，35（2）：149－153．

［12］Alam I，Bass NM，Bacchetti P，et al．Hepatic tissue endothelin－1levels in chronic liver disease correlate with disease severity and ascites［J］．Am J Gastroenterol，2000，95（l）：199－203．