110例產婦乳汁HBV-DNA含量與血清HBsAg濃度的相關性分析

宋 麗，侯遠沛

(徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州221004)

110例產婦乳汁HBV-DNA含量與血清HBsAg濃度的相關性分析

宋 麗，侯遠沛

(徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州221004)

目的通過分析產婦乳汁中乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）含量與產婦血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）濃度含量的相關性，探討乙型肝炎產婦母乳喂養(yǎng)的安全性問題，正確指導母乳喂養(yǎng)。方法選擇徐州市傳染病醫(yī)院門診乙肝產婦110例，利用實時熒光PCR技術（FQ-PCR）測定產婦乳汁HBV-DNA含量，采用時間分辨免疫熒光法（IFMA）檢測HBsAg含量。結果110例產婦HBsAg感染濃度＞500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA陽性16例，平均濃度為8.86E+06IU/ml，陽性率66.7%，HBsAg感染濃度在300～500ng/ml范圍的66例，乳汁HBV-DNA陽性26例平均濃度為9.12E+04IU/ml，陽性率39. 4%，HBsAg感染濃度＜300ng/ml有20人，乳汁HBV-DNA陽性3例且平均濃度為3.54E+03IU/ml，陽性率15.0%。由此可見HBsAg感染濃度與乳汁HBV-DNA含量呈正相關。結論建議產婦哺乳前應做乳汁HBV-DNA和乙肝標志物檢測，乳汁HBV-DNA陽性率及病毒含量隨著HBsAg感染濃度的升高而升高。HBV產婦乳汁具有一定的傳染性，因此要正確選擇哺乳方式從而降低新生兒乙肝病毒的感染率。

乳汁；HBV-DNA，HBsAg；時間分辨免疫熒光法（IFMA）

近年來隨著人們醫(yī)療條件的不斷改進和醫(yī)學知識的廣泛普及，在嬰幼兒喂養(yǎng)方式上，越來越多的母親更傾向于母乳喂養(yǎng)，但同時也增加了母嬰傳播乙肝的概率。母嬰傳播產后感染的主要介質是母乳[1]。母乳中的HBV-DNA具有一定的傳染性，特別是血清HBsAg高濃度且乳汁HBV-DNA陽性的產婦母乳，大大提高了嬰幼兒感染乙肝的幾率。無免疫力的新生兒及免疫力差的兒童尤其是母親為乙肝病毒表面抗原陽性（HBsAg）的新生兒是HBV的高危人群[2]。筆者通過檢測產婦乳汁HBV-DNA和血清HBsAg濃度，并對其相關性進行分析比較，從而探討乙肝病毒攜帶者產婦母乳喂養(yǎng)安全問題。

1 資料與方法

1.1 一般材料選取2014年6月至2015年6月我院門診110例乙肝產婦，其平均年齡在22～30歲。所有產婦均無肝炎臨床癥狀并排除其它傳染性疾病，并經過患者知情同意。

1.2 標本采集抽取產婦血樣3ml于分離膠試管離心備用，定量檢測乙肝病毒表面抗原。乳汁HBV-DNA檢測標本前處理很重要，對產婦乳頭用無菌生理鹽水消毒后，用無菌試管留取乳汁，置冰箱4℃過夜，吸棄上層乳白色脂肪層，吸取中間乳層進行離心沉淀處理。乳清和沉淀的DNA檢測結果，發(fā)現沉淀的陽性率及DNA濃度均明顯高于乳清，對于乳汁的HBVDNA檢測還是應該取沉淀進行檢測，否則有可能出現假陰性結果[3]。

1.3 試劑和儀器儀器為廈門安普利生物有限公司GeneLight 9800熒光定量擴增儀量PCR，試劑盒由廈門安普利生物有限公司提供：乙肝病毒標志物試劑盒蘇州新波生物技術有限公司提供，儀器為蘇州新波生物技術有限公司EFFICUTA-969，SYM-810。

1.4 檢測方法采用實時熒光PCR技術（FQPCR），根據體外擴增原理，利用熒光共振能量轉移實時跟蹤熒光定量檢測方法對產婦乳汁HBVDNA進行特異性定量分析。陰性對照定量值應< 500IU/ml，臨界陽性對照值應符合定量范圍2.0× 103IU/ml～9.0×103IU/ml，強陽性對照定量值應符合定量范圍2.0×107IU/ml～9.0×107IU/ml，否則該次試驗視為無效。實驗嚴格按照試劑說明書和SOP文件操作。

采用雙抗體夾心時間分辨免疫熒光法（IFMA）定量檢測乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。實驗時應同時設有6個標準品，HBsAg濃度≥0.2ng/ml，結果判斷為陽性，反之陰性。特別注意的是血清HBsAg濃度如果≥150ng/ml，待測標本應稀釋后在計算濃度值，且稀釋后的濃度均應在線性范圍內。

1.5 統(tǒng)計學分析采用PEMS3.1軟件，率的檢驗采用χ2檢驗，均數的檢驗采用t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

110例產婦乳汁HBV-DNA含量與血清HB-sAg濃度的相關性分析見表1。

表1 不同濃度乙肝病毒表面抗原(HBsAg)與乳汁HBV-DNA檢測結果比較

3 討論

由以上表1結果顯示A組的產婦HBsAg感染濃度>500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA陽性16例且平均濃度為8.86E+06IU/ml，陽性率66.7%與B組的產婦HBsAg感染濃度在300~500ng/ml范圍的66例，乳汁HBV-DNA陽性26例平均濃度為9.12E+04IU/ml，陽性率39.4%相比較，兩者相差有統(tǒng)計學差義（χ2=5.26，P＝0.02）。B組與C組的產婦HBsAg感染濃度<300ng/ml，乳汁HBV-DNA陽性3例且平均濃度為3.54E+03IU/ml，陽性率15.0%與相比較，兩者相差有統(tǒng)計學差義（χ2=4.09，P＝0.04）。A組的產婦和C組的產婦相比較，均有統(tǒng)計學差義（χ2=11.87，P＝0.0006）。

眾所周知，近年來世界衛(wèi)生組織（WHO）大力提倡母乳喂養(yǎng)，母乳喂養(yǎng)雖然有很多優(yōu)點，其成分既是嬰幼兒成長發(fā)育的最佳營養(yǎng)品又可增強其免疫力。但是，據文獻報道HBV攜帶者母親，其子女約有38%～58%HBsAg呈陽性[4]。母乳喂養(yǎng)能增加嬰兒感染HBV的危險．為了避免母乳喂養(yǎng)傳染嬰兒，應采取退乳及人工喂養(yǎng)[5]。嬰幼兒的口腔粘膜以及胃腸消化道的潰瘍和水腫、產婦乳頭的干裂和破潰，均可誘發(fā)嬰幼兒乙肝感染的可能性。所以，嬰幼兒喂養(yǎng)方式的選擇要本著科學謹慎的態(tài)度，不要一味的只看到母乳喂養(yǎng)的優(yōu)點而忽視了其潛在的傳染性。

肝炎在圍生(產)期和嬰幼兒時期感染HBV者中，分別有90%和25%～30%將發(fā)展成慢性感染[6]。目前較多的研究結論都反映出血清中HBsAg與HBV DNA之間存在正相關性[7]。本研究顯示乳汁HBV-DNA陽性率及病毒含量隨著HBsAg感染濃度的升高而升高。此結果與梁淑蘭等人研究結果-血清中表面抗含量與乙肝產婦乳汁中HBV-DNA含量呈正相關相同[8]。考慮到基層醫(yī)療單位基因診斷實驗室尚不能普及，如果以血清乙肝標志物進行血清安全性評價，應盡可能采用雙抗體夾心時間分辨免疫熒光法（IFMA）定量檢測HBsAg以提高陽性檢出率。通常HBsAg和HBeAg陽性被認為是具有傳染性的間接標志，HBsAg、HBeAg和HB-cAb是HBV復制活躍的標志[9]。也有文獻結果表明，血清HBeAg陽性與乳汁中HBV-DNA的檢出并不完全一致，部分HBeAg陰性產婦乳汁中仍能檢出HBV-DNA[10]。因此，產婦HBsAg濃度和乳汁HBV-DNA含量聯(lián)合檢測更具有積極的臨床意義。如果產婦HBsAg檢出陽性，無論濃度高低，建議到有資質的醫(yī)院進行乳汁HBV-DNA檢測。對乳汁HBV-DNA陽性的產婦，為了安全起見，應考慮對嬰兒采取人工喂養(yǎng)方式；對乳汁HBV-DNA陰性且HBsAg感染濃度高的產婦，應定期進行乳汁HBV-DNA復查，以確保哺乳期的安全，從而降低嬰幼兒感染乙肝的可能性。

[1]黃蓮芬.乙肝病毒感染或攜帶產婦檢測乳汁乙肝病毒DNA結果分析[J].中國醫(yī)學報，2011，8(22)：90-93.

[2]付曉萍.關于不同年齡段幼兒HBsAg和HBsAb檢測結果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2014，32(5)：583-583，587.

[3]劉曉，許琳婧，孫麗萍.標本的處理對乳汁HBV DNA檢測結果的影響[J].中國保健營養(yǎng)，2014，24(2)：760.

[4]林紅，陳林俊.1495例孕產婦傳染病標志物檢測結果分析[J].江西醫(yī)學檢驗雜志，2006，24（4）：374-375.

[5]趙登賢，楊文東.HBV-DNA陽性孕婦產后臍帶血及乳汁中HBV -DNA載量的檢測分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2013，31(1)：64-66.

[6]中華醫(yī)學會肝病學分會，中華醫(yī)學會感染病學分會．慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版[J].中華實驗和臨床感染病雜志(電子版)，201l，5(1)：79-100.

[7]李敏，談國蕾.慢性乙型肝炎患者血清HBsAg濃度與HBV DNA定量及HBeAg滴度的關系分析[J].中西醫(yī)結合肝病雜志，2015，25(1)：50-52.

[8]梁淑蘭，鄧偉航，李德華，李婉蘭.產婦血清表面抗原定量與乳汁中乙肝病毒載量的相關性分析[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報，2015，21 (3)：397-399.

[9]Pichoud C，Berby F，StuyverL，et al.Persistence of viral replication after anti-HBe seroconversion during antiviral therapy for chronic hepratitis B[J].J Hepatol，2000，32(2)：307-316.

[10]李小毛，劉穗玲，李霞，等.孕婦血、臍血、乳汁的乙型肝炎病毒DNA水平及其相關性[J].中山醫(yī)科大學學報，2000，18(3)：233-235.

R446.19，R512.6+2

A

1674-1129(2015)06-0771-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.030

2015-08-06；

2015-10-14)