載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死關系的研究

洪 雁 周碧燕 李 潔 梁 智 張 千

廣西南寧市第一人民醫院神經內科 南寧 530022

載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死關系的研究

洪 雁 周碧燕 李 潔 梁 智 張 千

廣西南寧市第一人民醫院神經內科 南寧 530022

目的 研究腦梗死患者的動脈粥樣硬化程度和載脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T兩位點的關系。方法 選取2011-12—2013-12間我院醫學影像科計算機體層掃描和磁共振確診的腦梗死患者156例，分析其頸總動脈（CCA）和頸內動脈（ICA）內膜厚度（IMT）與載脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T兩位點關系。結果 在-1131T/C位點基因型中，CC患者頸總動脈內膜為（1.12±0.27）mm，TT+TC患者為（1.07±0.12）mm，差異無統計學意義（P＞0.05）。CC患者頸內動脈內膜為（1.04±0.15）mm，TT+TC患者為（0.92±0.17）mm，差異有統計學意義（P＜0.05）；另外，在553G/T位點基因型中，GG患者頸總動脈內膜為（1.06±0.19）mm，TT+GT患者為（1.15±0.16）mm，差異有統計學意義（P＜0.05）；GG患者頸內動脈內膜為（0.94±0.15）mm，TT+GT患者為（0.97±0.21）mm，差異無統計學意義（P＞0.05）。對2組不同基因組的不同基因型患者進行相關血脂水平鑒定，發現-1131T/C位點基因型的兩種不同基因型的TG水平差異有統計學意義（P＜0.05），其余基因型相比差異均無統計學意義（P＞0.05）。對載脂蛋白A5（ApoA5）基因的常見單倍體配型不同的患者進行CCA IMT和ICA IMT的測量發現，4組基因型中ICA IMT差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 載脂蛋白A5（ApoA5）基因對動脈粥樣硬化腦梗死關系相對較大，值得進一步研究。

腦梗死又稱缺血性腦卒中，是指局部腦組織因血液循環障礙，缺血、缺氧而發生的軟化壞死［1］。腦梗死的危害極大，由于栓子堵塞腦血管，造成大腦局部壞死，從而導致患者的行動、語言、視力等障礙，甚至日常生活不能自理，造成極大危害。近年來，分子生物學不斷發展，科學家們發現部分腦梗死患者的頸內動脈和頸總動脈內膜都發生不同程度增厚，另外發現，載脂蛋白A5（ApoA5）與動脈粥樣硬化關系極大［23］。ApoA5是一種有力的甘油三酯調節子，而甘油三酯恰恰是升高動脈粥樣硬化的獨立危險因素，近年來國內和國外都已經開展此基因和動脈粥樣硬化相關臨床試驗，我院為了更好的明確腦梗死和ApoA5間的關系，特開展本試驗，并取得一定成果，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選取2011-12—2013-12我院醫學影像科計算機體層掃描和磁共振共確診的腦梗死患者156例，男92例，女64例。

1.2 研究方法

1.2.1 動脈粥樣硬化的評價：我院超聲科對患者的頸內動脈和頸總動脈進行內膜厚度評價，得到每位患者內膜厚度。1.2.2 基因組DNA提取：采集EDTA-K2抗凝靜脈血1 mL，提取基因組NA，并于-20°保存備用。

1.2.3 聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析（PCRRFLP）：按參考文獻設計下述2對引物，-1131T/C位點P1：5c-GATTGAT-TCAAGATGCATTTAGGA-3c，P2：5c-CCC CAG-GAACTGGAGCGAAATT-3c；553G/T位點P1：5c-CA GCAACTGAAGCCCTACACG-3c，P2：5c-ATGC-CGCTCA CCAGGCTCTCG-3c。PCR反應條件，-1131T/C位點：96e2 min，95e30s，56e30s，72e30s，循環30次，末次循環后72e延伸5min；553G/T位點：95e5min，95e30s，65e40s，72e50s，循環35次，末次循環后72e延伸7min。PCR擴增產物10 LL分別加入限制性內切酶MseI5U（-1131T/C位點）和MspI5U（553G/T位點），37e消化4h。酶切產物經含溴化乙錠的20g/L瓊脂糖電泳分離，經紫外凝膠成像系統分析結果。并隨機挑選部分PCR產物送上海生物工程公司測序。

1.3 統計學方法 所有資料均用SPSS 13.0軟件包進行分析。計量資料用±s表示，基因型分布經Hardy-Weinberg平衡檢驗，不符合正態分布的指標經對數轉換達到近似正態分布后進行數據分析，組間計量數據比較采用t檢驗或單因素方差分析；應用基于最大期望值算法的SNP Alyze V6.0軟件構建2多態性位點的個體單倍型。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較 由表1可看出，在-1131T/C位點基因型中，CC患者占10.26％，TT+TC患者占89.74％，其中CC患者頸總動脈內膜為（1.12±0.27）mm，TT+TC患者頸總動脈內膜為（1.07±0.12）mm，差異無統計學意義（P＞0.05）。CC患者頸內動脈內膜為（1.04±0.15）mm，TT+TC患者為（0.92±0.17）mm，差異有統計學意義（P＜0.05）；另外在553G/T位點基因型中，GG患者頸總動脈內膜為（1.06±0.19）mm，TT+GT患者為（1.15±0.16）mm，差異有統計學意義（P＜0.05）；GG患者為（0.94±0.15）mm，TT+GT患者為（0.97 ±0.21）mm，差異無統計學意義（P＞0.05）。以上結果表明，-1131CC基因型和-1131TT+TC基因型對ICA IMT有一定影響，-1131CC基因型能誘導頸內動脈內膜變厚，553GG基因型和553TT+GT基因型對人群的CCA IMT有一定影響，553TT+GT基因型能誘導患者頸總動脈內膜變厚。

表1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

表1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 -1131T/C 位點基因型 553G/T 位點基因型CC TT+TC t/χ2值 P值 GG TT+GT t/χ2值 P值n 16（10.26） 140（89.74）197.28 0.000 132（84.26） 24（15.74）140.53 0.000 CCA IMT（mm）1.12±0.27 1.07±0.12 1.336 0.183 1.06±0.19 1.15±0.16 2.1825 0.0306 ICA IMT（mm）1.04±0.15 0.92±0.17 2.074 0.007 0.94±0.15 0.97±0.21 0.843 0.4006

2.2 腦梗死不同基因型間血脂水平對比 對2組不同基因組的不同基因型患者進行相關血脂水平鑒定，發現-1131T/C位點基因型的兩種不同基因型的TG水平差異有統計學意義（P＜0.05），其余基因型相比差異均無統計學意義（P＞0.05），說明-1131T/C位點基因型的差異會導致人體內TG水平有差異，從而導致患者動脈粥樣硬化幾率的差異。見表2、3。

2.3 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較 對載脂蛋白A5（ApoA5）基因的常見單倍體配型不同的患者進行CCA IMT和ICA IMT的測量發現，4組基因型中ICA IMT差異有統計學意義（P＜0.05），說明不同的基因型對頸內動脈內膜厚度影響較大。見表4。

表2 553G/T位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

表2 553G/T位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C GG 132 4.18±0.12 1.68±0.26 1.12±0.04 2.46±0.16 TT+GT 24 4.19±0.18 1.57±0.59 1.13±0.11 2.40±0.14 t值-0.3447 1.498 0.801 1.720 P值-0.7308 0.1362 0.425 0.087

表3 -1131T/C位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

表3 -1131T/C位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C CC 16 4.17±0.14 2.18±0.15 1.04±0.12 2.26±0.13 TT+TC 140 4.18±0.16 1.72±0.27 1.05±0.13 2.27±0.14 t值-0.2395 6.684 0.2936 0.2725 P值-0.811 0.000 0.7695 0.786

表4 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

表4 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 單倍型配對 F值P值TG-TG TG-CG TG-CT CG-CG n 73 59 11 13 - -CCA IMT（mm）1.04±0.19 1.02±0.05 1.05±0.11 1.09±0.09 1.192 0.089 ICA IMT（mm）0.98±0.12 0.99±0.19 1.07±0.11 1.12±0.05 3.147 0.016

3 討論

2001年2個不同的研究小組先后在載脂蛋白A1/C3/A4基因簇鑒定出一個新的載脂蛋白基因apoA5基因，人類ApoA5同小鼠ApoA5基因同源性達71％，而與人類載脂蛋白4基因同源性達27％［4］。在動物實驗和人類的觀察研究中均發現，其與血脂尤其是TG的代謝密切相關，因而迅速受到廣泛關注。有研究表明，人ApoA5是由343個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，其相對分子質量約為39 000，等電點為5.9，其結構具有多個雙性A-螺旋結構，也有B折疊和B轉角。與其他載脂蛋白家庭成員相似，作為ApoA5活性中心的幾個A-螺旋結構由22或11個氨基酸組成的重復短串連接，他們在疏水性和長度上都存在相當大的差異［5］。OcBrien等用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測健康人血漿中ApoA5，其含量為24～406Lg/L［6］。對脂蛋白微粒進行檢測，發現ApoA5存在于極低密度脂蛋白（VLDL）、高密度脂蛋白（HDL）和乳糜微粒（CM）中。有人認為，ApoA5作為調節富含TG脂蛋白代謝過程中的一個關鍵的激活劑，可能存在一個循環再利用的機制來彌補其外周循環含量的不足［7］。

經過研究表明，1131CC基因型和-1131TT+TC基因型對ICA IMT有一定影響，-1131CC基因型能誘導頸內動脈內膜變厚，553GG基因型和553TT+GT基因型對人群的CCA IMT有一定影響，553TT+GT基因型能誘導患者頸總動脈內膜變厚，這一結論也符合曹巖巖等人的報道［8］。這可能與患者基因表達蛋白質有所不同，-1131CC基因型表達出的蛋白質能促進血脂在頸內動脈內膜沉積，553TT+GT基因型所表達的蛋白能促進血脂在頸總動脈沉積［9］。如果在彩超的診斷下發現頸總動脈和頸內動脈增厚，可進行基因診斷，從而做到對腦梗死的高度重視和預防［10］。另外，我們發現-1131T/C位點基因型的差異會導致人體內TG水平有差異，與陳玉蘭等［11］報道一致，在診斷和預防方面也有重大意義，最后試驗研究了不同單倍體間，頸總動脈內膜和頸內動脈內膜的差異，4組基因型中ICA IMT具有差異［12］，也為分子生物學的研究和疾病的分子診斷提供了重要意義。

綜上所述，研究載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關系意義重大，值得進一步研究。

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（2014-07-21）

R743.33

A

1673-5110（2015）10-0044-03

廣西南寧市科學研究與技術開發計劃項目（20123131）

【關鍵詞】腦梗死；動脈粥樣硬化；基因多態性；載脂蛋白A5