鐵皮石斛組培體藥用和營(yíng)養(yǎng)成分含量的比較

張本厚　胡燕花　金磊磊　陳集雙

摘要：為了探明鐵皮石斛組培體中藥用和營(yíng)養(yǎng)成分含量，比較研究3種鐵皮石斛組培體和人工栽培鐵皮石斛干物率、多糖含量、總生物堿含量和總蛋白質(zhì)含量。結(jié)果表明：三年生人工栽培鐵皮石斛莖段干物率為20.79%，顯著高于3種鐵皮石斛組培體，原球莖干物率為3.77%，顯著低于2種組培苗；三年生人工栽培鐵皮石斛莖段多糖和總生物堿含量分別為24.66%和0.027%，均顯著高于3種鐵皮石斛組培體，原球莖多糖和總生物堿含量分別為11.53%和0018%，均顯著高于2種組培苗；3種鐵皮石斛組培體總蛋白含量均顯著高于三年生人工栽培鐵皮石斛莖段（687%），原球莖總蛋白含量為22.19%，顯著高于2種組培苗。綜合而言，雖然鐵皮石斛原球莖水分含量較高，但其增殖速率遠(yuǎn)大于人工栽培鐵皮石斛和組培苗；在藥用和營(yíng)養(yǎng)成分方面，雖然鐵皮石斛原球莖的多糖和總生物堿含量低于人工栽培鐵皮石斛，但其多糖、總生物堿和總蛋白含量均高于2種組培苗。因此，鐵皮石斛原球莖具有很好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：鐵皮石斛；組培體；藥用成分；營(yíng)養(yǎng)成分；多糖；總生物堿；總蛋白

中圖分類號(hào)： S567.23+9.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）10-0324-04

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium）多年生草本植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材，被譽(yù)為“中華九大仙草之首”。《中國(guó)藥典》（2010年版）記載，鐵皮石斛具有益胃生津、滋陰清熱等功效。現(xiàn)代藥理研究表明，鐵皮石斛具有增強(qiáng)免疫力[1-3]、降血壓[4]、降血糖[5]、抗腫瘤[6-8]、抗氧化[9-11]等作用。由于鐵皮石斛種子極小、無(wú)胚乳、自然條件下須與真菌共生才能萌發(fā)，萌發(fā)率低，自然情況下多采用無(wú)性繁殖方式進(jìn)行增殖，增殖率較低，加之鐵皮石斛野生資源過(guò)度采挖以及所依賴環(huán)境的破壞，野生鐵皮石斛資源已經(jīng)瀕臨滅絕[12]，成為“瀕危珍稀植物”，被列入《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材物種名錄》和《中國(guó)植物紅皮書(shū)》[13-14]，已無(wú)法滿足市場(chǎng)需求。為保護(hù)和持續(xù)利用這一珍稀中藥品種，植物組織培養(yǎng)和人工栽培技術(shù)已廣泛用于鐵皮石斛生產(chǎn)。目前，鐵皮石斛藥源以人工栽培的鐵皮石斛為主，但供需缺口仍相當(dāng)懸殊，主要是由于鐵皮石斛人工栽培存在成活率低、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、成本高、植株生長(zhǎng)不一等問(wèn)題。近年來(lái)，不少研究表明，鐵皮石斛組培體與原藥材藥效相似[15-16]，其是否可以成為鐵皮石斛替代性藥源，從中提取有效成分，引起人們的廣泛關(guān)注。本研究以3種鐵皮石斛組培體與人工栽培鐵皮石斛為材料，比較其干物率、2種藥用成分（多糖和總生物堿含量）和1種營(yíng)養(yǎng)成分（總蛋白含量），為鐵皮石斛組培體的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為4種鐵皮石斛人工培養(yǎng)體：固體培養(yǎng)30 d的鐵皮石斛原球莖、固體繼代培養(yǎng)60 d的3 cm鐵皮石斛組培小苗、固體繼代培養(yǎng)120 d的7 cm鐵皮石斛組培大苗、三年生人工栽培鐵皮石斛莖段。本試驗(yàn)所有供試材料均來(lái)自同一株鐵皮石斛，其中原球莖和組培苗是將該植株成熟種子通過(guò)植物組織培養(yǎng)獲得的，三年生人工栽培鐵皮石斛莖段是將該植株置于自然環(huán)境中人工栽培3年獲得的。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 干物率的測(cè)定 稱取100 g左右的鐵皮石斛新鮮樣品（m1），104 ℃ 20 min殺青，80 ℃烘干至恒質(zhì)量，準(zhǔn)確稱取鐵皮石斛樣品干質(zhì)量（m2）。

干物率=m2/m1×100%。

1.2.2 多糖含量的測(cè)定

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確稱取10.00 mg經(jīng)80 ℃烘干至恒質(zhì)量的蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品，置于100 mL的容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，充分混勻。分別取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于試管中，加蒸餾水至2 mL，同時(shí)以2 mL蒸餾水為空白對(duì)照。依次加入0.5 mL蒽酮溶液（1.00 g蒽酮溶于50 mL乙酸乙酯）和5 mL濃硫酸，充分混勻，置于沸水浴中加熱10 min，取出冷卻至室溫，于620 nm處測(cè)得吸光度。

1.2.2.2 樣品多糖含量的測(cè)定 將鐵皮石斛新鮮樣品于104 ℃下殺青20 min，80 ℃烘干至恒質(zhì)量，研成粉末，精確稱取0.10 g鐵皮石斛樣品粉末置于三角瓶中，加入20 mL 80%乙醇，超聲提取2次，3 500 r/min離心5 min后棄上清（以去除單糖、低聚糖及苷類等干擾性成分），將殘?jiān)谜麴s水清洗2次，加入6 mL蒸餾水，沸水浴提取30 min，提取液經(jīng)2層濾紙過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)貜?fù)提取2次，合并2次濾液并加蒸餾水至200 mL。取1 mL置于試管中，加蒸餾水至3 mL，充分混勻，作為樣品液（稀釋3倍）。取2 mL樣品液，同時(shí)以2 mL蒸餾水作為空白對(duì)照，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法于620 nm處測(cè)吸光度。

1.2.3 總生物堿含量的測(cè)定 總生物堿含量的測(cè)定方法參照金蓉鸞等的方法[17-18]。（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。精確稱取1.00 mg 石斛堿標(biāo)準(zhǔn)品置于100 mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度線。分別取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于分液漏斗中，加三氯甲烷至10 mL，同時(shí)以10 mL三氯甲烷為空白對(duì)照，加入pH值為4.5的緩沖液5 mL和0.04%溴甲酚綠溶液2 mL，劇烈振搖3 min，靜置30 min。三氯甲烷層通過(guò)經(jīng)三氯甲烷浸泡處理并干燥后的藥棉濾過(guò)，取5 mL三氯甲烷續(xù)濾液，加001 mol/L NaOH-無(wú)水乙醇溶液l mL，充分混勻，于620 nm處測(cè)吸光度。（2）樣品總生物堿含量的測(cè)定。將鐵皮石斛新鮮樣品烘干，精確稱取0.50 g樣品粉末（過(guò)60目篩）置于 25 mL 三角瓶中，加入3～5 mL濃氨水充分潤(rùn)濕后，密閉放置30 min，加入10 mL三氯甲烷，稱質(zhì)量，置于水浴鍋中加熱回流提取2 h，冷卻后稱質(zhì)量，補(bǔ)充三氯甲烷至原質(zhì)量，過(guò)濾。取2 mL置于10 mL容量瓶中，加三氯甲烷稀釋至刻度，充分混勻，作為樣品液（稀釋5倍）。endprint

取10 mL樣品液，同時(shí)取10 mL三氯甲烷作為空白對(duì)照，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法，于620 nm處測(cè)得吸光度。同時(shí)取石斛堿標(biāo)準(zhǔn)溶液（25 μg/mL）2 mL置于25 mL容量瓶中，加三氯甲烷稀釋至刻度，充分混勻，取10 mL（含20 μg石斛堿）置于分液漏斗中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法，于620 nm處測(cè)得吸光度，則

總生物堿含量=D樣品液×20 μg×n÷D標(biāo)準(zhǔn)品溶液÷m。

式中：D樣品液代表樣品液吸光度；D標(biāo)準(zhǔn)溶液代表石斛堿標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度；n代表稀釋倍數(shù)；m代表樣品質(zhì)量。

1.2.4 總蛋白含量的測(cè)定 將鐵皮石斛新鮮樣品烘干，精確稱取0.10 g置于研缽中，加入0.02 g石英砂和2 mL 30% NaOH溶液，研磨2 min后再加入10 mL 60%堿性乙醇，研磨5 min；然后用60%堿性乙醇將研磨好的樣品無(wú)損地洗入50 mL 容量瓶中，60%堿性乙醇定容至刻度，搖勻后靜置片刻，取部分浸提液3 500 r/min離心10 min。吸取上清液1 mL于50 mL容量瓶中，用60%堿性乙醇定容至刻度，作為樣品液。利用分光光度法，于280、260 nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸收度，則

總蛋白含量=（1.45×D280 nm-0.74×D260 nm）÷V÷1 000÷m×100%。

式中：D280 nm代表蛋白質(zhì)提取液在280 nm處測(cè)得的吸光度；D260 nm代表蛋白質(zhì)提取液在260 nm處測(cè)得的吸光度；V代表將所有樣品提取液稀釋成測(cè)量液濃度后的總體積，mL；m代表樣品質(zhì)量，g。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用SPSS 17.0中的單因素方差分析（One-way ANOVA）比較4種不同鐵皮石斛培養(yǎng)體之間的干物率、多糖含量、總蛋白質(zhì)含量和總生物堿含量的差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 干物率的比較

4種鐵皮石斛培養(yǎng)體鮮品和干品形態(tài)對(duì)比結(jié)果如圖1所示。4種鐵皮石斛培養(yǎng)體干物率比較結(jié)果如表1所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，干物率呈遞增趨勢(shì)，三年生人工栽培鐵皮石斛莖段干物率最高，為20.79%，顯著高于其他3種鐵皮石斛組培體。3種鐵皮石斛組培體中，原球莖干物率為3.77%，顯著低于2種組培苗。3 cm組培小苗和7 cm組培大苗干物率分別為6.21%和7.82%，且7 cm組培大苗干物率顯著高于3 cm 組培小苗。

2.2 多糖含量的比較

以蔗糖濃度（C1，μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（D1）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為D1=0.011 4C1-0.000 5，r2=0.999 3。

4種鐵皮石斛培養(yǎng)體多糖含量比較結(jié)果如圖2所示，三年生人工栽培鐵皮石斛莖段多糖含量最高，為24.66%，顯著高于其他3種鐵皮石斛組培體。3種鐵皮石斛組培體中，原球莖多糖含量為11.53%，顯著高于2種組培苗。3 cm組培小苗和7 cm組培大苗多糖含量分別為5.76%和6.71%，兩者之間沒(méi)有顯著差異。

2.3 總生物堿含量的比較

以石斛堿濃度（C2，μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（D2）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：D2=0.075 5C2+0.000 7，r2=0.999 0。

4種鐵皮石斛培養(yǎng)體總生物堿含量比較結(jié)果如圖3所示，三年生人工栽培鐵皮石斛莖段總生物堿含量最高，為0.027%，顯著高于其他3種鐵皮石斛組培體。3種鐵皮石斛組培體中，原球莖總生物堿含量為0.018%，顯著高于2種組培苗。3 cm組培小苗和7 cm組培大苗總生物堿含量分別為0.013%和0.012%，兩者之間沒(méi)有顯著差異。

2.4 總蛋白含量的比較

4種鐵皮石斛培養(yǎng)體總蛋白含量比較結(jié)果如圖4所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，總蛋白含量呈遞減趨勢(shì)，三年生人工栽培鐵皮石斛莖段總蛋白含量為6.87%，顯著低于其他3種鐵皮石斛組培體。3種鐵皮石斛組培體中，原球莖總蛋白含量為22.19%，顯著高于2種組培苗。3 cm組培小苗和 7 cm 組培大苗總蛋白含量分別為18.82%和16.14%，且3 cm組培小苗總蛋白含量顯著高于7cm組培大苗。

3 結(jié)論與討論

鐵皮石斛組織培養(yǎng)物是否可以作為鐵皮石斛替代性藥源，并從中提取有效成分，主要取決于其有效成分的含量和藥理作用。目前，已有眾多研究表明鐵皮石斛組培體與原藥材具有相似的藥理作用[6，15-16，19-24]。多糖為鐵皮石斛最主要的有效成分，因此鐵皮石斛組培體中多糖含量成為評(píng)定組培體質(zhì)量的重要因素。許多研究結(jié)果顯示，鐵皮石斛組培體多糖含量低于鐵皮石斛楓斗、人工栽培或野生鐵皮石斛[19，25-28]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，但也有研究報(bào)道鐵皮石斛組培體多糖含量與人工栽培或野生鐵皮石斛相當(dāng)甚至更高[16，29-30]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，3種鐵皮石斛組培體中原球莖多糖含量顯著高于2種組培苗，與大多數(shù)前人的研究結(jié)論[19，27，29，31]一致，也有少數(shù)研究結(jié)果顯示鐵皮石斛組培苗多糖含量高于原球莖或擬原球莖[25，32]。

生物堿是鐵皮石斛重要的有效成分之一，鐵皮石斛組培體中生物堿含量也會(huì)影響組培體的品質(zhì)。辛甜等的研究結(jié)果顯示，鐵皮石斛組培體的生物堿含量低于鐵皮石斛楓斗、栽培植株和野生植株[19，33]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致；但是孫丹的研究結(jié)果顯示，鐵皮石斛原球莖生物堿含量高于一年生栽培植株[29]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，3種鐵皮石斛組培體中原球莖總生物堿含量顯著高于2種組培苗，與大多數(shù)前人的研究結(jié)論[19，29]一致，但是李瑩的研究結(jié)果顯示鐵皮石斛原球莖的生物堿含量略低于組培苗[32]。

鐵皮石斛作為一種藥食同源的中藥材，除了藥用價(jià)值外，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也不容忽視。蛋白質(zhì)是一種重要的營(yíng)養(yǎng)成分，可以滿足人們對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸的需求。目前鐵皮石斛組培體雖不可直接入藥或食用，但在有效成分提取過(guò)程中，蛋白質(zhì)可以作為營(yíng)養(yǎng)保健品加以提取利用，因此鐵皮石斛組培體的蛋白質(zhì)含量和氨基酸組成對(duì)其蛋白質(zhì)的利用具有重要的意義。目前，已有不少學(xué)者對(duì)鐵皮石斛組培體與鐵皮石斛楓斗、栽培植株或野生植株的蛋白質(zhì)或總氨基酸含量進(jìn)行研究，結(jié)果顯示隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，蛋白質(zhì)或總氨基酸的含量呈遞減趨勢(shì)[25，28，30，34]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，這可能與隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，鐵皮石斛組培體或栽培植株的纖維化程度逐漸加深、生長(zhǎng)活躍程度逐漸降低有關(guān)。關(guān)于鐵皮石斛蛋白質(zhì)氨基酸的組成本試驗(yàn)未著重分析研究，有待后續(xù)試驗(yàn)進(jìn)一步研究。目前已有不少研究對(duì)鐵皮石斛組培體蛋白質(zhì)的氨基酸組成進(jìn)行分析，大部分研究結(jié)果顯示組培體蛋白質(zhì)的氨基酸組成與鐵皮石斛楓斗的栽培植株或野生植株一致[19，28，34]。endprint

本研究結(jié)果表明，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，鐵皮石斛組培體或栽培植株的干物率逐漸增加，其水分含量逐漸降低，這可能與其纖維化程度逐漸加深有關(guān)。

綜上所述，3種鐵皮石斛組培體中，原球莖的多糖、總生物堿和總蛋白含量均最高，雖然其多糖和總生物堿含量低于三年生人工栽培鐵皮石斛莖段，水分含量較高，但是其增殖速率快、生長(zhǎng)周期短、產(chǎn)量高；生產(chǎn)條件可控、產(chǎn)品質(zhì)量均一，便于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)；生產(chǎn)方式簡(jiǎn)便、生產(chǎn)成本低等優(yōu)勢(shì)，將鐵皮石斛原球莖作為鐵皮石斛替代性藥源，從中提取藥用和營(yíng)養(yǎng)成分，用于醫(yī)藥、保健品、護(hù)膚品等行業(yè)，具有很好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景，同時(shí)也緩解了鐵皮石斛野生資源枯竭、藥源緊缺等問(wèn)題，對(duì)于保護(hù)鐵皮石斛野生資源、實(shí)現(xiàn)其可持續(xù)利用具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]Liu X F，Zhu J，Ge S Y，et al. Orally administered Dendrobium officinale and its polysaccharides enhance immune functions in BALB/c mice[J]. Natural Product Communications，2011，6（6）：867-870.

[2]宋美芳，李 光，陳 曦，等. 兩種石斛多糖提高小鼠免疫活性的初步研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2013，48（6）：428-431.

[3]蔡海蘭，黃曉君，聶少平，等. 鐵皮石斛多糖對(duì)RAW2647細(xì)胞分泌TNF-α的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（11）：1553-1556.

[4]吳人照，楊兵勛，李亞平，等. 鐵皮石斛多糖對(duì)SHR-sp大鼠抗高血壓中風(fēng)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18（3）：204-205，210.

[5]吳昊姝，徐建華，陳立鉆，等. 鐵皮石斛降血糖作用及其機(jī)制的研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2004，29（2）：160-163.

[6]郭洪波. 鐵皮石斛（Dendrobium candidum）組培快繁及其抗癌作用的研究[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[7]羅慧玲，蔡體育，陳巧倫，等. 石斛多糖增強(qiáng)臍帶血和腫瘤病人外周血LAK細(xì)胞體外殺傷作用的研究[J]. 癌癥，2000，19（12）：1124-1126.

[8]張紅玉，戴關(guān)海，馬 翠，等. 鐵皮石斛多糖對(duì)S180肉瘤小鼠免疫功能的影響[J]. 浙江中醫(yī)雜志，2009，44（5）：380-381.

[9]黎 英，趙亞平，陳蓓怡，等. 5種石斛水提物對(duì)活性氧的清除作用[J]. 中草藥，2004，35（11）：1240-1242.

[10]查學(xué)強(qiáng)，王軍輝，潘利華，等. 石斛多糖體外抗氧化活性的研究[J]. 食品科學(xué)，2007，28（10）：90-93.

[11]鮑素華，查學(xué)強(qiáng)，郝 杰，等. 不同分子量鐵皮石斛多糖體外抗氧化活性研究[J]. 食品科學(xué)，2009，30（21）：123-127.

[12]白 音，包英華，金家興，等. 我國(guó)藥用石斛資源調(diào)查研究[J]. 中草藥，2006，37（9）：附4-附6.

[13]李 玲，鄧曉蘭，趙興兵，等. 鐵皮石斛化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 腫瘤藥學(xué)，2011，1（2）：90-94.

[14]高正華，楊兵勛，陳立鉆. 鐵皮石斛的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2008，25（S2）：692-695.

[15]高建平，金若敏，吳耀平，等. 鐵皮石解原球莖與原藥材免疫調(diào)節(jié)作用的比較研究[J]. 中藥材，2002，25（7）：487-489.

[16]黃民權(quán)，盧應(yīng)京. 石斛愈傷組織培養(yǎng)物的藥用前景探討[J]. 中藥材，1998，21（11）：543-545.

[17]金蓉鸞，孫繼軍，張遠(yuǎn)名. 11種石解的總生物堿的測(cè)定[J]. 南京藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1981（1）：9-13.

[18]王令儀. 石斛多糖和生物堿測(cè)定及多糖抗衰老實(shí)驗(yàn)研究[D]. 遵義：遵義醫(yī)學(xué)院，2009.

[19]辛 甜. 組培鐵皮石斛的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[D]. 沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[20]徐 紅，劉 峻，王崢濤，等. 5種石斛及其組織培養(yǎng)物對(duì)活性氧的清除作用[J]. 植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2001，10（2）：35-37.

[21]何鐵光，楊麗濤，李楊瑞，等. 鐵皮石斛原球莖多糖DCPP1a-1的理化性質(zhì)及抗腫瘤活性[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2007，19（4）：578-583.

[22]何鐵光，楊麗濤，李楊瑞，等. 鐵皮石斛原球莖多糖DCPP1a-1對(duì)氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化的影響[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2007，19（3）：410-414.

[23]何鐵光，楊麗濤，李楊瑞，等. 鐵皮石斛原球莖多糖粗品與純品的體外抗氧活性研究[J]. 中成藥，2007，29（9）：1265-1269.

[24]辛 甜，儲(chǔ)智勇，欒 潔，等. 鐵皮石斛胚狀體對(duì)大鼠抗疲勞能力的影響[J]. 藥學(xué)實(shí)踐雜志，2011，29（1）：21-23.

[25]郭孟璧，封良燕，田茂軍，等. 人工培養(yǎng)鐵皮石斛營(yíng)養(yǎng)成分分析研究[J]. 云南化工，2006，33（2）：15-16，43.

[26]尚喜雨. 多糖在不同來(lái)源不同部位鐵皮石斛中的分布規(guī)律研究[J]. 中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，4（13）：104-105.

[27]張冬青，廖俊杰. 鐵皮石斛試管培養(yǎng)物多糖含量測(cè)定[J]. 中藥材，2005，28（6）：450-451.

[28]黎萬(wàn)奎，胡之璧，周吉燕，等. 人工栽培鐵皮石斛與其他來(lái)源鐵皮石斛中氨基酸與多糖及微量元素的比較分析[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，22（4）：80-83.

[29]孫 丹. 鐵皮石斛圓球莖生物反應(yīng)器培養(yǎng)及有效成分含量的分析[D]. 延吉：延邊大學(xué)，2010.

[30]何鐵光，蘇 江，王燦琴，等. 鐵皮石斛不同來(lái)源材料多糖和氨基酸含量的比較[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，38（1）：32-34.

[31]王麗瓊. 鐵皮石斛快繁體系和細(xì)胞培養(yǎng)研究[D]. 武漢：華中科技大學(xué)，2013.

[32]李 瑩. 鐵皮石斛組培及次生代謝物積累規(guī)律的研究[D]. 南京：南京林業(yè)大學(xué)，2012.

[33]尚喜雨. 不同來(lái)源鐵皮石斛不同部位生物堿的分布規(guī)律研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（23）：12441-12442.

[34]謝哲臻. 鐵皮石斛試管苗再生體系及抗腫瘤活性研究[D]. 西安：陜西師范大學(xué)，2012.endprint