HBsAg酶免篩查反應性獻血者確證與追蹤分析

楊濤 李玲 牛麗彬 賈慧琴

HBsAg酶免篩查反應性獻血者確證與追蹤分析

楊濤1李玲2牛麗彬1賈慧琴1

目的 通過對HBsAg酶免篩查反應性獻血者進行確證和追蹤，為制定獻血者歸隊策略提供理論依據。方法 用NAT檢測、HBsAg酶免、抗-HBc酶免、中和試驗進行檢測后，每隔3個月追蹤1次。結果 48 例HBsAg酶免篩查反應性者，確證陰性19例（39.6%）。結論 制定和實施可行的血液酶免篩查反應性獻血者確證指南和歸隊策略，可以最大限度地減少血源（獻血者）流失。

酶免篩查；反應性；獻血者；確證

為保證血液安全，我國現行“血液篩查策略”是采用高敏感的兩次檢測篩查試驗[1]，并且建立灰區緩沖帶等措施，因此不可避免地產生了假陽性問題。現行法規要求陽性的獻血者不能獻血，同時也永久屏蔽了初篩假陽性的獻血者，直接流失掉一部分健康血源，這不僅影響血液供應，甚至會造成這些獻血者精神上的傷害[2]。為探討酶免篩查反應性獻血者的歸隊策略，對48例HBsAg酶免反應性獻血者進行了確證與追蹤，具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

按以下標準選擇研究對象：（1）既往HBsAg酶免篩查反應性。（2）年齡≤50歲。（3）經本站醫學倫理委員會批準并告知獻血者相關權利和義務，獻血者同意參與課題研究并簽署知情同意書。（4）實驗實施后參與統計分析的資料符合實驗設計要求。符合標準的研究對象48例。

1.2 標本采集

采集靜脈血樣，EDTA-K 2真空采血管和EDTA-K 2真空分離膠采血管各2管用于確證實驗。

1.3 確證方法

所有標本進行HBsAg酶免試驗和NAT試驗。（1）若HBsAg酶免與NAT均反應性，加做中和試驗，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個月追蹤1次。（2）若HBsAg酶免反應性、NAT非反應，加做中和試驗，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個月追蹤1次。（3）若HBsAg酶免非反應、NAT反應性，加做抗-HBc酶免，陽性者直接屏蔽；陰性者每隔3個月追蹤1次。（4）若HBsAg酶免與NAT均非反應，加做抗-HBc酶免，陽性者每隔3個月追蹤1次；陰性者3個月后追蹤1次，若HBsAg酶免、NAT、抗-HBc酶免均非反應，則判定該獻血者確證結果陰性，否則繼續追蹤。

表1 HBsAg酶免篩查反應性標本確證結果

1.4 試劑與儀器

試劑選用HBsAg酶免為伯樂（批號：3H0170，效期：2014年11月29日）、抗-HBc酶免為萬泰（批號：K20140403，效期：2015年3月）、HBsAg中和為珠海麗珠（批號：2013120348，效期：2014年12月9日）。NAT試驗為羅氏第二代試劑（批號：124229，效期：2014年6月）。儀器使用Roche全自動核酸分離純化儀、Roche全自動醫用PCR分析系統、英國伯瑞全自動免疫印跡檢測儀、TIANSHI自動化酶免分析儀、LANSHI全自動酶標洗板機。

1.5 統計學方法

所得數據使用SPSS19.0軟件進行處理，計數資料用例數、百分比（n，%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.01，差異具有統計學意義。

2 結果

HBsAg酶免篩查反應性標本確證結果顯示，首次獻血與獻血＞3次比較：χ2=10.441，P＜0.01，差異具有統計學意義。灰區與反應性比較：χ2=1.536，P＞0.05，差異不具有統計學意義。單試劑與雙試劑比較：χ2=33.443，P＜0.01，差異具有統計學意義。見表1。

3 討論

血站實施血液檢測主要有兩個目的，一是為了血液安全，二是為了獻血者服務和管理[3]。本著高度關愛的態度來教育、招募、服務、保留獻血者，使獻血者確信采供血機構始終關注他們的健康、權利和利益。本次實驗結果表明，現有檢測方法假陽性率較高，相當一部分獻血者被不適宜的屏蔽了，造成了獻血者不必要的流失，打擊了獻血者的獻血熱情且會造成一定的社會影響，在一定程度上制約了無償獻血的發展。由于ELISA實驗引起假陽性因素比較多，如標本采集、處理不當，造成標本污染、血清中存有纖維蛋白或溶血、脂血；實驗過程中洗板不充分，標本量過大、進板優化不合理導致加樣完成后的微板在室溫放置時間過長；試劑的保存不當；某些疾病或生理狀態均可導致假陽性[4]。并且將高靈敏度的ELISA檢測試劑應用于低危健康獻血者人群經血傳播疾病病原體標志物的篩查，假陽性檢測結果難免發生。為避免假陽性出現，一是要做好血液采集前的征詢工作，避免因飲食不當、某些疾病或生理狀態下獻血；二是要做好采集過程、標本處理過程、實驗過程的監控，嚴格按照《血站質量管理規范》、《血站實驗室管理規范》、《血站技術操作規程》和血站質量體系文件進行操作，避免由于操作原因引起假陽性。三是嚴格按照規定標準選擇質量可靠的檢測試劑，及時采用方法學更先進的檢測方法。

本次實驗數據顯示，首次獻血與獻血＞3次獻血者對HBsAg確證結果有統計學差異，固定獻血者相對較安全。雖然尚不能認為初篩灰區與反應性樣本結果差異對HBsAg確證結果有統計學差異，但在酶免篩查灰區者中仍有一部分（40%）需要繼續追蹤，因此在血液酶免篩查中設置灰區能有效檢出反應不確定性標本，對于保證血液質量安全是非常必要的。單試劑與雙試劑對HBsAg確證結果的影響有統計學差異，單試劑反應性獻血者中有相當比例（48.6%）的確證結果為反應不確定性仍需繼續追蹤，國內已有學者提出酶免篩查單試劑反應性獻血者半年后2次酶免復查合格后歸隊獻血的策略[5]，但未做相關確證實驗直接采用此策略存在一定風險。

對于國內大多數采供血機構而言，自行開展血液酶免篩查反應性獻血者確證試驗困難極大。一是確證實驗室設置缺乏統一規劃，運行經費難以保障。建議衛生行政部門根據轄區實際需要，統一規劃設置確證實驗室，可掛靠血液中心、CDC、科研機構或高校等負責轄區內確證工作；制定出臺確證實驗室管理規范；同時將確證實驗室建設和日常運行必需的經費納入同級財政預算。二是尚未建立全國統一標準的血液酶免篩查反應性獻血者確證方案及建立可行的歸隊策略。目前，國內僅有安徽、江蘇等地區頒布實施了有關獻血者歸隊的指導性文件。由于沒有明確的技術標準和管理法規文件，采供血機構在開展獻血者確證與歸隊工作時，難免出現不規范、不標準的現象；一旦出現糾紛，將面臨沒有相應法律法規支持的危險局面。本次實驗48例HBsAg酶免篩查反應性者，確證陰性19例（39.6%），說明規范的確證與追蹤不僅可以使那些HBsAg酶免篩查假陽性的獻血者及時歸隊獻血，而且還能夠最大程度降低因假陽性對獻血者造成的精神傷害。本次實驗樣本量較小，可能不能全面反映客觀結果，還需進一步增大研究樣本量。同時，追蹤間隔期也有待進一步研究。另外，獻血者追蹤過程中的流失也對實驗結果造成一定影響。

綜上所述，制定和實施可行的血液酶免篩查反應性獻血者確證指南和歸隊策略勢在必行，有利于采供血機構服務、保留、關愛獻血者，最大限度地減少血源（獻血者）流失，從而進一步推動我國無償獻血事業的健康發展。

[1]劉穎，馬麗媛.無償獻血者HBsAg酶免篩查結果分析[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34（6）：725-727.

[2]謝云崢，祝宏，朱紹文.HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV酶聯免疫吸附法篩查反應性獻血者屏蔽與歸隊程序建議[J].臨床輸血與檢驗，2013，15（4）：398-402.

[3]林洪鏗，江偉梅，周曉真，等.獻血者ELISA抗－HCV篩查反應性強度與RIBA確證陽性的相關性研究[J].中國輸血雜志，2010，23（8）：617-619.

[4]錢榕.ELISA 4項初檢陽性結果分析[J].中國輸血雜志，2010，23（9）：729-730.

[5]孟毓，盧濤，張艷梅，等.單試劑有反應性獻血者延期并歸隊獻血的可行性探討[J].中國輸血雜志，2013，26（1）：70-71.

Analysis Trace and Confirmation of HBsAg Emzyme Immune Screening in Reactivity Blood Donors

YANG Tao1LI Ling2NIU Libin1JIA Huiqin11 Changzhi City The Centre Blood Station，Changzhi 046011，China.2 Chinese Academy of Medical Sciences Beijing Xiehe Medical College Transfusion Institute，Chengdu 610052 China

Objective To confirm and track the reactivity blood donors in HBsAg ELISA screening，to provide theoretical evidence for blood donors to return to the ranks.Methods NAT tests，HBsAg ELISA，anti-HBc ELISA and HBsAg Confirmatory test were employed,then track the blood donors every 3 months.Results 19（39.6%）cases were diagnosed as HBV negative from 48 cases with HBsAg-reactivity.Conclusion To formulate and implement workable confirmation guide and decycle strategy among reactivity blood donors in ELISA screening can utmost reduce the blood loss.

ELISA screening，Reactivity，Blood donors，Confirmation

R446

B

1674-9308（2015）29-0041-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.29.028

1046011長治市中心血站；2610052成都，中國醫學科學院北京協和醫學院輸血研究所