不同灸法對免疫抑制兔血細胞的影響

吳愛花，單增天，田岳鳳，李雷勇，王 軍

（1.山西中醫學院，山西太原030024； 2.山西醫科大學第二醫院，山西太原030006）

不同灸法對免疫抑制兔血細胞的影響

吳愛花1，單增天1，田岳鳳1，李雷勇2，王 軍1

（1.山西中醫學院，山西太原030024； 2.山西醫科大學第二醫院，山西太原030006）

目的：觀察不同灸法對環磷酰胺所致免疫抑制兔外周血細胞的影響。方法：大耳白兔50只隨機分為5組，分別為空白組、模型組、隔藥餅灸組、艾灸組、假藥餅灸組。除空白組外均腹腔注射環磷酰胺60 mg/kg，連續7 d，造成免疫抑制模型。3個治療組分別進行隔藥餅灸、艾灸、假藥餅灸治療，隔日灸，共灸10次。灸療結束次日靜脈取血，進行血細胞系列的檢測。結果：與空白組比較，模型組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，隔藥餅灸組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均升高，差異有統計學意義（P＜0.01）；艾灸組RBC明顯升高（P＜0.01）；假藥餅灸組9項指標差異均無統計學意義（P＞0.05）。結論：隔藥餅灸對因環磷酰胺所致的免疫功能低下狀態具有明顯的改善作用。

環磷酰胺；免疫抑制；隔藥餅灸；艾灸；血細胞

作為祖國醫學的一種傳統療法，艾灸能有效調節機體免疫抑制狀態已被大量實驗研究所證實。本文從藥物、艾灸、穴位三者協同作用的隔藥餅灸的角度，探討其對免疫抑制兔外周血細胞系列的影響，為臨床艾灸提高機體免疫力低下提供實驗依據，豐富艾灸防病治病的理論內涵。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 大耳白兔50只，體重（2.5±0.3）kg，雌雄不限，由北京昌揚西山養殖場提供［動物合格證號：SCXK（京）2011-0010］。飼養溫度20℃～25℃，相對濕度50%～70%。

1.1.2 藥物、試劑與儀器 注射用環磷酰胺（CTX），200 mg/瓶，山西普德藥業股份有限公司（批號：H14023686）。0.9%NaCl注射液500 mL（石家莊四藥有限公司）。血細胞檢測儀（美國雅培公司CELLDYN3700）。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模 50只大耳白兔隨機分為空白組、模型組、隔藥餅灸組、艾灸組及假藥餅灸組5組，每組10只。動物適應性飼養10 d后，模型組、隔藥餅灸組、艾灸組及假藥餅灸組均腹部皮下注射環磷酰胺60 mg/kg（環磷酰胺用生理鹽水稀釋），連續注射7 d，每天上午進行；空白組注射等量生理鹽水。

1.2.2 藥餅制作 將熟地黃、山萸肉、山藥、澤瀉、丹皮、茯苓（按組方劑量）打碎成粉末，過120目篩備用，臨用前以75%酒精調勻，用模具制成直徑1 cm、厚0.3 cm的藥餅；假藥餅制作方法與藥餅相同，其采用的原料是面粉。

1.2.3 穴位選擇 神闕、關元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）。穴位定位參照林文注主編《實驗針灸學》［1］常用動物穴位定位法及擬人比照法。

1.2.4 施灸方法 動物造模后穴位處剪毛，綁縛固定于兔臺。選用江蘇盱眙華佗中藥廠的艾絨，制成底徑0.8 cm、高0.5 cm相等大小的圓錐形艾柱，分別置于藥餅和假藥餅上，以線香點燃，燃盡更換，每穴連灸3壯，隔日灸，共灸10次；艾灸組選用盱眙華佗中藥廠的清艾條（批號：Z32020153），將自制艾灸架置于穴位上施灸，艾絨為3壯艾柱量，線香點燃，隔日灸，共灸10次。

1.3 樣品采集及指標觀察

實驗結束后第2天，動物麻醉，腹腔靜脈采血，采用血細胞檢測儀觀察外周血細胞系列的變化。包括白細胞系列：白細胞（WBC）、嗜中性粒細胞百分比［NEU（%）］、淋巴細胞百分比［LYM（%）］、單核細胞百分比［MONO（%）］、嗜酸性粒細胞百分比［EOS（%）］、嗜堿性粒細胞百分比［BASO（%）］；紅細胞系列：紅細胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）。

1.4 統計學方法

實驗數據均以均數±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析（one way-ANOVA）并進行組間比較，P＜0.05為差異有統計學意義。全部數據輸入計算機用SAS8.2統計軟件，由統計專業人員進行分析。

2 結果

與空白組比較，模型組白細胞系列中WBC、NEU，紅細胞系列中RBC、HGB、HCT均明顯降低，差異均具有統計學意義（P＜0.01），LYM、MONO、EOS、BASO 4項指標差異無統計學意義（P＞0.05）。

與模型組比較，隔藥餅灸組白細胞系列中WBC、NEU，紅細胞系列中RBC、HGB、HCT均明顯升高，差異均具有統計學意義（P＜0.01）；艾灸組RBC與模型組比較明顯升高，差異具有統計學意義（P＜0.01），其余8項指標與模型組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）；假藥餅灸組9項指標與模型組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。結果見表1。

3 討 論

已有大量實驗研究證明，環磷酰胺是烷化劑中最常用的一種免疫抑制劑，在實驗研究中利用其對動物機體的免疫功能和造血功能損害可制作免疫抑制模型［2-4］。采用CTX造模方法簡單易行，用量及時間均可靈活掌握，所以常用其來制造免疫功能低下實驗模型。血細胞是機體重要的免疫細胞，由白細胞、紅細胞及血小板組成，其中白細胞通常又被稱為免疫細胞，血液的免疫防御功能主要是靠白細胞實現，其數量及功能的變化反映免疫功能的強弱。此外，血液的運輸功能主要是靠紅細胞來完成，紅細胞數量減少或質量下降，會不同程度地影響血液運輸功能，從而出現一系列病理變化。

灸法作為中國傳統預防保健的常用療法，可升高外周血細胞系列的數量，正向調節免疫功能低下或受抑狀態［5-6］，從而達到扶正祛邪目的。神闕穴與關元穴均為任脈之穴，可補腎固本、調理臟腑；足三里為足陽明胃經主要穴位之一，常灸之可保健防病、延年益壽、增強體力等；脾俞、腎俞為脾腎兩臟氣血匯聚于腰背之背俞穴，灸其補益脾腎，兩穴通用可達滋陰補腎、健脾益氣之功。

有實驗研究表明，熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、丹皮六味藥有機結合對改善機體免疫功能具有一定的協同作用［7-8］。隔藥餅灸是將艾灸、藥物與穴位有機結合，通過艾灸的溫熱，促進皮膚對滋陰補腎藥物的吸收，經經絡傳輸從而發揮藥物歸經之效能，達到提高機體免疫防御功能的作用。課題

表1 隔藥餅灸對免疫抑制兔血細胞系列的影響 （x±s）

組前期試驗也表明，隔藥餅灸對不同年齡人群、艾灸對亞健康人群的外周血細胞系列均有明顯的調節作用［9-10］。

本實驗結果表明，造模后WBC、NEU、RBC、HGB、HCT明顯低于空白組（P＜0.01），表明腹腔注射環磷酰胺造模成功。隔藥餅灸神闕、關元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）后，可明顯回升免疫抑制兔血細胞系列WBC、NEU、RBC、HGB、HCT的含量，與空白組比較差異不明顯，表明隔藥餅灸通過回升血細胞系列的數量達到提高免疫抑制兔的免疫功能。艾灸后免疫抑制兔RBC明顯升高，但與空白組相比仍存在明顯差異，說明艾灸對RBC有明顯回升作用，但作用不及隔藥餅灸；假藥餅灸組與模型組比較各項指標無明顯差異，與空白組差異顯著，說明假藥餅灸治療效果不佳。艾灸組的作用不夠理想，可能與灸量或時間有關，本課題后期研究將進行探討。

［1］林文注，王佩.實驗針灸學［M］.上海：上海科學技術出版社，1994：283-287.

［2］羅月蘋，王嫣，汪偉，等.環磷酰胺致新西蘭大白兔白細胞減少癥模型的建立［J］.激光雜志，2013，34（2）：77-78.

［3］壽旗揚，應華忠，周衛民，等.兩種方法注射環磷酰胺致小鼠白細胞減少癥模型的比較［J］.實驗動物與比較醫學，2008，28（4）：266-268.

［4］應軍，肖百全，楊威，等.雞血藤與阿膠升白細胞作用的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：175-177.

［5］張敏，李旭廷，曾富強，等.當歸補血湯對環磷酰胺所致家兔血細胞減少的影響［J］.四川畜牧獸醫，2012，39（12）：19-23.

［6］鄭雪峰，聶焱，王志強，等.艾灸關元穴對化療后低白細胞模型大鼠外周血象影響的實驗研究［J］.湖北中醫雜志，2009，31（5）：5-6.

［7］曹建恒.六味地黃丸對2型糖尿病患者紅細胞免疫功能調節作用的影響［J］.新中醫，2005，37（3）：45-46.

［8］宋宇，宋穎，段冷昕，等.六味地黃丸及其不同工藝提取物對小鼠免疫功能的影響［J］.北京中醫藥大學學報，2008，31（6）：385-388.

［9］董成林，田岳鳳，李雷勇，等.隔藥餅灸對不同年齡人群機體血細胞系列影響的比較［J］.世界中西醫結合雜志，2014，9（1）：58-60.

［10］陳猛，李雷勇，田岳鳳，等.艾灸對中青年亞健康狀態人群血細胞系列的干預作用［J］.山西中醫學院學報，2014，15（1）：39-42.

（編輯：翟春濤）

Influence of different moxibustion on blood cells series in immunosuppressive rabbits

Wu Aihua1，Shan Zengtian1，Tian Yuefeng1，Li Leiyong2，Wang Jun1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi 030006）

Objective：To observe the influence of blood cells series in immunosuppressive rabbits treated with herbal cake-separated moxibustion，moxibustion and sham cake-separated moxibustion.Methods：50 rabbits were randomly divided into blank group，model group，herbal cake-separated moxibustion group，moxibustion group and sham cake-separated moxibustion group.Except the blank group，other groups were given intraperitoneal injection of cyclophosphamide（Cy）60 mg/kg in 7 consecutive days so as to set up the immunosuppressive model.Three treatment groups were treated every other day by herbal cake-separated moxibustion，moxibustion，sham cake-separated moxibustion respectively，a total of 10 times.Then abdominal vein blood was collected and blood cell series was detected after treatment.Results：Compared with the blank group，the WBC、NEU、RBC、HGB、HCT of model group were significantly decreased（P＜0.01）.Compared with model group，the WBC，RBC，HGB，HCT，NEU of herbal cake-separated moxibustion group were extremely significant increased（P＜0.01）.The RBC of moxibustion group was significantly higher than that of model gronp（P＜0.01）. Conclusion：Herbal cake-separated moxibustion has obvious effect on improving immunosuppressive state of rabbits induced by cyclophosphamide.

cyclophosphamide；immunosuppressive；herb cake-separated moxibustion；moxibustion；blood cells series

R332

A

1671-0258（2015）01-0019-03

國家自然科學基金面上項目（81373742）

吳愛花，在讀碩士，E-mail：170225989@qq.com

田岳鳳，教授，博士研究生導師，E-mail：tyfsx@163.com