龍葵正丁醇提取物對Lewis肺癌移植瘤生長的影響

金 旺，高聚偉，潘 磊，陳培豐

（1.浙江中醫藥大學第一臨床醫學院，浙江杭州310053； 2.浙江省中山醫院，浙江杭州310005；3.浙江中醫藥大學附屬第一醫院，浙江杭州310006）

龍葵正丁醇提取物對Lewis肺癌移植瘤生長的影響

金 旺1，高聚偉2，潘 磊3，陳培豐3

（1.浙江中醫藥大學第一臨床醫學院，浙江杭州310053； 2.浙江省中山醫院，浙江杭州310005；3.浙江中醫藥大學附屬第一醫院，浙江杭州310006）

目的：觀察龍葵正丁醇提取物對Lewis肺癌移植瘤生長的抑制作用。方法：建立Lewis肺癌模型，將40只C57BL/ 6J荷瘤小鼠隨機分成荷瘤空白對照組、環磷酰胺組、龍葵正丁醇提取物高、中、低劑量組5組，每組8只。給藥15 d后處死小鼠，剝離腫瘤組織，稱重，計算腫瘤生長抑制率；解剖其胸腺、脾臟組織，稱重，計算胸腺和脾臟指數。結果：龍葵正丁醇提取物高、中、低劑量對Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率分別為32.14%、13.93%和15.36%。龍葵正丁醇提取物高劑量組胸腺指數增長率為134.31%，龍葵正丁醇提取物中劑量組脾指數增長率為128.73%。結論：龍葵正丁醇提取物對Lewis肺癌移植瘤生長具有一定程度的抑制作用，并能提高荷瘤小鼠胸腺和脾臟指數。

龍葵；正丁醇；抑瘤率；胸腺指數；脾臟指數

龍葵是茄科茄屬植物龍葵的全草，為一年至多年生草本植物。龍葵性寒、微甘，有小毒，有清熱解毒、活血利水、止咳祛痰等功效［1］。現代藥理學研究證明其具有抗腫瘤、解熱鎮痛、免疫調節等作用［2-3］。本實驗建立在Lewis肺癌移植瘤模型的基礎上，觀察龍葵正丁醇提取物對荷瘤小鼠的一般狀態、體重、腫瘤生長、胸腺和脾臟指數的影響，為其抗癌作用機制的研究提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物及瘤株 近交系C57BL/6J純系小鼠，上海斯萊克動物有限責任公司提供，許可證號：SCXK（滬）2013-0003，在浙江中醫藥大學實驗動物中心SPF級動物房適應性飼養7 d。Lewis肺癌細胞株，購自中國科學院上海細胞生物學研究所。

1.1.2 實驗藥物 龍葵購自浙江中醫藥大學附屬第一醫院中藥房，產地為浙江臨安，經該院徐錫山主任藥師鑒定為茄科茄屬植物龍葵（Solanum nigrum L.）的干燥全草。參考文獻［4-5］方法稱取干燥的龍葵飲片5 kg，用8倍量的正丁醇80℃提取2 h，提取液除菌，100℃水浴箱濃縮得浸膏，即為龍葵正丁醇提取物，置4℃冰箱保存備用。注射用環磷酰胺（CTX）：江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，產品批號：1033021。生理鹽水（NS）：杭州民生藥業有限公司，產品批號：312020910。

1.2 實驗方法

將接種Lewis肺癌14 d的C57BL/6J荷瘤小鼠，脫頸椎處死，無菌冰浴條件下剝離瘤組織，選取生長良好的腫塊，去除壞死組織，按腫瘤（g）∶生理鹽水（mL）為1∶3比例用組織勻漿器制備瘤細胞懸液，200目網篩過濾，1 500 r/min，5 min，用PBS調節細胞濃度約4×106/mL，作為制備小鼠Lewis肺癌模型的細胞懸液。建模前小鼠禁食不禁水12 h，75%酒精消毒小鼠右腋下皮膚3次，用l mL無菌注射器取細胞懸液0.2 mL（含8×105個活細胞），無菌條件下接種于小鼠左腋窩皮下，拔出針頭，用酒精棉球輕壓針眼處片刻，防止細胞懸液流出。接種瘤細胞后，送同動物飼養室繼續飼養。接種24 h后，荷瘤小鼠用隨機化數字表法隨機分為荷瘤空白對照組、環磷酰胺組、龍葵正丁醇提取物高、中、低劑量組5組，每組8只。給藥劑量參照人鼠給藥劑量換算方法［6］計算。

其中dA、dB是A、B兩種動物的每kg體質量劑量（mg/kg）；RA、RB是動物體型系數，人為100，小鼠為59；WA、WB是動物的體質量（kg）值。

分組后開始給藥，每日1次，連續15 d。除環磷酰胺組外其余各組均按0.2 mL/10 g灌胃給藥，用藥劑量分別為：荷瘤空白對照組給予生理鹽水0.2 mL/ 10 g；龍葵正丁醇提取物高、中、低劑量組分別為160 mg/kg、80 mg/kg、40 mg/kg。環磷酰胺組予環磷酰胺注射液，按20 mg/kg劑量每次0.2 mL腹腔注射，接種第3天起給藥，每隔2 d給藥1次，共5次。停藥后24 h，稱體重，脫頸椎處死小鼠，放入超凈臺內，固定于蠟版上。然后剖開皮膚，完整剝離瘤塊，稱重。解剖其胸腺、脾臟組織，稱重。

1.3 指標觀察

1.3.1 荷瘤小鼠生活狀況 每天記錄各組小鼠體重，觀察小鼠存活情況、精神狀態、皮毛色澤，并記錄。

1.3.2 抑瘤率 按瘤重計算腫瘤抑制率。

其中，y代表腫瘤抑制率，a代表空白對照組平均瘤質量（g），代表給藥組平均瘤質量（g）。

1.3.3 胸（脾）腺指數 依據下列公式計算小鼠胸腺、

脾指數。

其中，y代表胸腺（脾）指數，a代表胸腺（脾）質量（mg），b代表小鼠體質量（g）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件分析，計量資料均以均數±標準差（x±s）描述，兩組間比較采用配對t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對荷瘤小鼠生活狀況的影響

接種后1 d～7 d，各組荷瘤小鼠身形勻稱，皮毛光滑，反應靈活，進食進水正常，組間差異不明顯。自第8天起，荷瘤空白對照組小鼠體形開始消瘦，皮毛蓬松枯槁，活動遲緩甚至蜷縮不動。環磷酰胺組小鼠皮毛失去光澤，稀疏脫落，反應遲鈍，行動遲緩。龍葵正丁醇提取物各劑量組小鼠的反應性也較遲鈍，體毛缺少光澤，少量脫落，但較荷瘤空白對照組和環磷酰胺組情況為好。在實驗第13天，在實驗條件均一，無人為操作失誤的情況下，荷瘤空白對照組有1只小鼠死亡，結合此小鼠腫瘤較大、形體消瘦、皮毛蓬松枯槁，考慮為腫瘤負荷過大致衰竭死亡，其余各組無死亡小鼠。

2.2 對荷瘤小鼠體質量的影響

實驗過程中，各組小鼠體質量均有增加。15 d時，荷瘤空白對照組體質量增加（1.36±0.3）g；龍葵正丁醇提取物中劑量組增加最多，為（2.75±0.39）g；環磷酰胺組增加不明顯，僅為（0.18±0.29）g。龍葵正丁醇提取物中劑量組、環磷酰胺組與荷瘤空白對照組體質量增加值比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。龍葵正丁醇提取物各治療組小鼠平均體重與環磷酰胺組比較，差異均有統計學差異（P＜0.01，P＜0.05）。結果見表1。

表1 龍葵正丁醇提取物對荷瘤小鼠體質量的影響（x±s）

2.3 對荷瘤小鼠腫瘤質量及抑瘤率的影響

與荷瘤空白對照組比較，龍葵正丁醇提取物各組小鼠的平均瘤重均有不同程度的降低（P＜0.05，P＜0.01）。結果見表2。

2.4 對荷瘤小鼠胸腺和脾指數的影響

與荷瘤空白對照組比較，龍葵正丁醇提取物高、低劑量組胸腺指數均有提高，其中高劑量組與荷瘤空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），胸腺指數增長率為134.31%。龍葵正丁醇提取物各劑量組脾指數均有提高，其中葵正丁醇提取物中劑量組與荷瘤空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），脾指數增長率為128.73%。結果見表3。

表2 龍葵正丁醇提取物對荷瘤小鼠腫瘤質量的影響 （x±s）

表3 龍葵正丁醇提取物對荷瘤小鼠胸腺指數及脾指數的影響 （x±s）

3 討論

龍葵是臨床常用抗腫瘤中藥之一。呂苑忠等［7］用龍葵補腎合劑治療中晚期肝癌，顯示該合劑具有提高中、晚期肝癌患者生活質量，減少并發癥和毒副作用的優勢。黃東彬等［8］用龍葵合劑治療中晚期非小細胞肺癌，認為龍葵合劑在扶正基礎上抑制腫瘤生長，達到最小副作用基礎上的抗癌治療，符合“帶瘤生存”的理念。吳鋸凌等［9］用龍葵葶藶湯聯合DDP胸腔內灌注治療肺癌，可顯著提高肺癌大量惡性胸腔積液的臨床療效，降低化療不良反應發生率，提高患者機體的細胞免疫功能。

在探討龍葵抗癌機理方面，常樂等［10］研究表明龍葵多糖能顯著抑制人胃癌MGC-803細胞的增殖，并具有時間及濃度依賴性，認為龍葵多糖能阻止人胃癌細胞由G1期進入S期，阻止細胞周期進程。李志雄等［11］研究發現龍葵堿可以通過線粒體途徑誘導前列腺癌Du145及LNCaP細胞凋亡的發生，能將兩種細胞的細胞周期阻滯在S期，產生抑制細胞增殖的作用。陳培豐等［12］觀察到龍葵正丁醇萃取物對荷H22肝癌小鼠具有一定的腫瘤抑制作用，其機理可能與改善荷瘤機體細胞因子異常，調節機體免疫功能有關。曲中原等［13］認為龍葵堿抗腫瘤機制可能與其影響腫瘤細胞膜流動性和封閉性以及膜蛋白、影響紅細胞免疫功能、抑制腫瘤新生血管生成、誘導腫瘤細胞的凋亡等有關。

在本實驗中，我們采用系統溶劑法對中藥龍葵進行初步提取分離，觀察龍葵正丁醇提取物對lewis肺癌移植瘤生長的抑制作用。結果顯示龍葵正丁醇提取物灌胃治療后，荷瘤小鼠的生活狀況有不同程度的改善，體重質量增加程度高于荷瘤空白對照組（P＜0.05）。并對荷瘤小鼠移植瘤的生長有一定抑制作用，龍葵正丁醇提取物低、中、高劑量組抑瘤率分別為15.36%、13.93%、32.14%。

研究表明，T淋巴細胞在宿主對腫瘤組織的免疫反應中起著關鍵的作用。胸腺和脾臟是T淋巴細胞成熟、增殖和分化的主要部位，其臟器指數是衡量機體免疫功能的初步指標［14］。本實驗發現龍葵正丁醇提取物具有一定的提高荷瘤小鼠胸腺和脾臟指數的作用，其作用存在一定劑量效應關系，提示對這兩個免疫器官的保護作用也可能是其抗腫瘤的作用機制之一。

由此可知，龍葵正丁醇提取物有改善荷瘤小鼠一般狀況、增加體質量、改善生存質量的作用，并可在一定程度上抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長和保護胸腺和脾臟，其作用機制值得進一步研究。

［1］趙國平，戴慎，陳仁壽.中藥大辭典［M］.2版.上海：上海科學技術出版社，2006：873.

［2］徐東花，于春月，韓成花.龍葵的化學成分及藥理作用研究［J］.黑龍江中醫藥，2007，36（2）：46-47.

［3］李紅念，梅全喜，張志群，等.龍葵的化學成分與藥理作用研究進展［J］.今日藥學，2011，21（11）：713-715.

［4］盧艷花.中藥有效成分提取分離技術［M］.2版.北京：化學工業出版社，2008：2-7.

［5］劉建文.藥理實驗方法學［M］.北京：化學工業出版社，2003：22-23.

［6］孫敬方.動物實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2001：357.

［7］呂苑忠，孔慶志，熊振芳.龍葵補腎合劑治療中晚期肝癌臨床療效觀察［J］.湖北中醫雜志，2009，31（11）：7-8.

［8］黃東彬，管靜.龍葵合劑治療晚期非小細胞肺癌54例臨床觀察［J］.內蒙古中醫藥，2013，32（16）：21-22.

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［10］常樂，劉藝.龍葵多糖對人胃癌MGC-803細胞增殖的影響［J］.牡丹江醫學院學報，2012，33（4）：24-26.

［11］李志雄，梁蔚波，唐暉，等.龍葵堿對前列腺癌LNCaP及Du145細胞系的作用及機制［J］.廣東醫學，2013，34（8）：1 153-1 156.

［12］陳培豐，潘磊，高聚偉，等.龍葵正丁醇萃取物對肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其免疫功能的影響［J］.中國中醫藥科技，2013，20（2）：141-142.

［13］曲中原，鄒翔，鄒曉祺，等.龍葵堿藥理作用研究進展［J］.黑龍江醫藥，2014，27（4）：795-797.

［14］Lopez D M，Charyulu V，Adkins B.Influence of breast cancer on thymic function in mice［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2002，2（7）：191-199.

（編輯：翟春濤）

Effects of n-butanol extract from Solanum Nigrum L.on metastatic tumor growth

Jin Wang1，Gao Juwei2，Pan Lei3，Chen Peifeng3
（1.First Clinical Medical College to Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053；2.Zhongshan Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou Zhejiang 310005；3.First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310006）

Objective：To observe the inhibiting effects of n-butanol extract from Solanum Nigrum L.on metastatic tumor growth in mice with lewis lung cancer.Methods：40 C57BL/6J mice set up Lewis Lung tumor model were randomly divided into tumor-burdened blank control group，cyclophosphamide group，n-butanol extract high，medium and low dosage group with 8 mice in each group.The mice were given drug respectively in 15 days and subsequently were killed.Tumor tissue were striped and weighed so as to calculate the tumor growth inhibition rate.Mice′s thymus and spleen were dissected and weighed so as to calculate index of thymus and spleen.Results：The inhibition rate of n-butanol extract high，medium and low dosage group were 32.14%，13.93%and 15.36%.The thymus index growth rate of n-butanol extract high dosage group was 134.31%；the spleen index growth of n-butanol extract medium dosage was 128.73%.Conclusion：The n-butanol extract from Solanum nigrum L.has certain inhibition effect on lewis lung cancer growth and the extract can increase mice′s thymus and spleen index.

Solanum nigrum L.；n-butanol；inhibition rate；thymus index；spleen index

R285.5

A

1671-0258（2015）01-0024-03

浙江省中醫藥科技計劃項目（2009CA015）

金旺，在讀碩士，E-mail：592694497@qq.com

陳培豐，主任醫師，教授，E-mail：CPF12345@163.com