調中補益膠囊水溶性成分提取工藝的研究

調中補益膠囊水溶性成分提取工藝的研究

李劍男，王化宇，于淼，張浩

(長春中醫藥大學 藥學院，藥物分析實驗室，長春 130117)

摘要采用單因素試驗法和正交試驗法，以總多糖含量為考核指標，優選調中補益膠囊復方藥材的最佳提取工藝.結果表明：藥材加10倍量水煎煮3次，每次1h為最佳水煎工藝，此工藝穩定可行，提取效果好，以分光光度法測定有效成分含量方便準確.

關鍵詞正交試驗；煎煮法；總多糖；分光光度法

收稿日期2014-10-29

作者簡介李劍男 (1987-), 男,博士,講師,研究方向：中藥活性物質分離與鑒定, E-mail:474306580@qq.com

基金項目吉林省科技廳資助項目(02070021)

中圖分類號R284.1文獻標識碼A

Study on the Optimal Extraction Condition of Water-Soluble

Component from Tiaozhongbuyi Capsule

LiJiannan,WangHuayu,YuMiao,ZhangHao

(Laboratory of Pharmaceutical Analysis,College of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

AbstractTo optimize the extraction condition of active components from Tiaozhongbuyi Capsule, the total polysaccharide content was used as evaluation parameter with single-factor test and orthogonal test. The results showed that the optimal extraction condition was as follows: the drug was to be decocted with 10 folds of water for 3 times, and 1h for each time. The process was highly reproducible and the active ingredient could be conveniently and accurately measured spectroscopically.

Keywordsorthogonal test; decocting method; total polysaccharides; spectrophotography

人們年老以后會出現體弱多病的現象，尤其以女性表現得更為明顯.女性更年期后，體質出現不同程度的下降，表現為烘熱汗出、口咽干燥、失眠、煩躁、健忘、腰酸、焦慮、乏力等，這是外界因素和自身因素綜合作用的結果，與脾胃失調，氣虛血虛有關[1，2].

調中補益方為臨床經驗復方，經多年臨床應用證明其療效確切，無毒副作用.處方共由9味中藥組成，原處方將各藥材粉碎成細粉，加入煉蜜制成水蜜丸服用.水蜜丸口感較好，但以藥材粉末入藥導致服藥量較大，部分成分吸收較差，因含糖量較高儲存過程中易霉變.為拓展其市場應用，本文將其制備成膠囊劑[3]，研究了其最佳提取工藝.

前期資料的總結中發現，調中補益處方中以人參、白術等4味藥材的脂溶性成分為主要有效成分，復方中所有藥材的水煎物均有補益效果，以糖類為主要有效成分.本文將人參等4味中藥經醇提后的干燥藥渣與益母草等5味藥材混合，用水煎法提取其有效成分，為膠囊劑的成型工藝試驗奠定實驗基礎.

1儀器與材料

BP211D電子分析天平(上海天平儀器廠)，DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏試驗設備有限公司)，旋轉蒸發器(RE-52AA型, 上海亞榮生化儀器廠)，調溫電熱套(KMD型, 山東甄城電熱儀器有限公司)，紫外可見分光光度計(UV-9200型, 北京瑞利分析儀器公司).

黃芪、甘草、益母草、香附、枸杞等藥材(購于上海匯仁中藥飲片有限公司)；無水葡萄糖(中國食品藥品檢定研究院，批號110833-201205)，工業乙醇(北京化工廠).

2方法與結果

2.1提取物中總多糖含量測定方法的建立

本試驗采用紫外-可見分光光度法對調中補益藥材水提物中總多糖的含量進行測定.

2.1.1對照品溶液的制備

參考文獻[4-6]，取已恒重的無水葡萄糖標準品適量，精密稱定，制備成每1ml含1mg葡萄糖的對照品溶液，即得.

2.1.2供試品溶液的制備

參考文獻[4-8]，按處方稱取藥材，提取后過濾，濾液干燥至恒重，粉碎，取粉末0.05 g,加入10 mL蒸餾水，稱量，超聲處理30 min，放冷，用蒸餾水補足減失的重量，搖勻，濾過.加入用石油醚20 mL萃取，吸去石油醚層，重復操作2次；水層加無水乙醇40 mL，攪拌均勻，置離心機中離心15 min(轉速為3000 r/min)，去除上清液，沉淀加無水乙醇洗滌2次，再用水溶解，并稀釋至50 mL，搖勻，即得.

2.1.3測定方法

參考文獻[4-8]，精密吸取上述供試品溶液2.0 mL，依次加入1.0 mL濃度為 5%的苯酚溶液和5.0 mL濃硫酸，攪拌均勻，沸水浴中加熱15 min，置冰水中冷卻30 min，搖勻，依法測定.

2.1.4葡萄糖最大吸收波長的測定

取對照品溶液適量，按“2.1.3”項下方法處理，以相應試劑作為空白，置于紫外-可見分光光度計中，在190～700 nm波長范圍內掃描.

結果在對照品溶液在490 nm處有吸收峰最大，故將測定波長定為490 nm.

2.1.5葡萄糖標準曲線的繪制

參考文獻[4-8]，精密量取葡萄糖標準溶液0.8, 1.0, 1.2, 1.6, 2.0 mL，定容至50 mL. 精密吸取上述各種溶液2.0 mL，按“2.1.3”項下方法處理，在波長490 nm處測吸光度. 以總多糖的含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程，結果見表1.

表1　標準曲線的測定結果

由表1算得回歸方程為Y=57.229X+ 0.0114，r=0.9995，葡萄糖在0.00202～0.01009 mg范圍內線性關系良好.

2.1.6穩定性試驗

精密吸取濃度為256 mg/g的供試品溶液，按“2.1.3”項下方法操作，以相應試劑作為空白，分別在10, 30, 60 , 120 , 240, 360, 1440 min測定吸光度，結果見表2.

表2　穩定性試驗測定結果

表2結果顯示，RSD=1.42%，表明依法處理的供試品溶液至少在24 h內穩定.

2.1.7精密度試驗

精密吸取濃度為0.020194 mg/mL的對照品溶液2 mL，以“2.1.3”項下方法操作，相應試劑作為空白，測定吸光度，連續測定5次，結果見表3.

表3　精密度試驗測定結果

表3結果顯示，RSD=1.56%，表明儀器精密度良好.

2.1.8重復性試驗

取同一批樣品5份，以“2.1.3”項下方法處理，相應試劑作為空白，分別按含量測定方法測定含量，結果見表4.

表4　重復性試驗測定結果

表4結果顯示，RSD=1.97%，表明本試驗重復性良好.

2.1.9回收率試驗

取同一批提取物5份，每份約0.05 g，精密稱定，精密加入葡萄糖對照品0.04 mg，依法測定含量，結果見表5.

表5　回收率試驗測定結果

表5結果顯示，RSD=1.78%，表明此方法合理可行.

在冷凝式鍋爐中，大量水蒸氣冷凝，同時煙氣中的酸性氣體溶于水蒸氣中，使冷凝水具有酸性腐蝕的特性，會對換熱器產生腐蝕，因此在冷凝式換熱器中通常選材要求較一般換熱器高，需具有較強的防腐蝕能力，因此冷凝換熱器的制造成本較高。在冷凝式換熱器中，防腐材料多種多樣，包括鐵素體不銹鋼、奧氏體不銹鋼、奧氏體-鐵素體雙相不銹鋼和蒙乃爾合金等多種形式。

2.2調中補益膠囊總多糖提取工藝研究

2.2.1吸水量的考察

參考文獻[4-8]，吸水量是煎煮法中的一個重要考察因素，吸水量的大小直接影響加水量的確定.取醇提后藥渣，與處方中黃芪等5味藥材混合均勻，按處方量稱取100 g，共3份，分別加入10倍量水浸泡2h，至藥材全部浸透，濾過，測量濾液體積，計算吸水量.結果見表6.

表6　藥材吸水量的考察結果

表6結果表顯示：藥材平均吸水量約為120 mL，為生藥量的1.2倍.

2.2.2加水量的確定

加水量是煎煮法中另一重要考察因素，加水量太少，提取出的成分有限，且易于糊化；加水量太多，不利于后期的干燥.根據吸水量的測定結果，將正交試驗中的加水量分別定為6倍、8倍和10倍.

2.2.3煎煮時間的考察

取處方量藥材，共5份，分別加8倍量水浸泡至無白芯，煎煮至規定時間，濾過，濾液濃縮并干燥至恒重，粉碎，依法測定提取物中總多糖的含量，結果見表7.

表7　煎煮時間的考察結果

表7結果表明：其他條件相同，煎煮時間超過120 min時，提取物中總多糖含量升高不明顯，故將提取時間定為60, 90 ,120 min.

2.2.4煎煮次數的確定

2.2.5正交試驗

參考文獻采用水煎煮法，以提取物中總多糖的含量為指標，優選提取工藝參數.[4-8]，結合預試驗的結果，對于水煎煮試驗具有較大影響的因素主要為提取次數、加水量、提取時間，采用4因素3水平的正交設計，取75%醇提后干燥藥渣，混合均勻，平分為9份，按表8中的因素水平設計條件，進行水煎煮提取，濾過，濃縮，干燥至恒重，依法測定提取物中總多糖的含量.結果見表9、10.

表8　水煎工藝的因素水平表

表9　正交實驗結果

表10　方差分析表

F0.05(2，2)= 19.00F0.01(2，2)= 99.00

表9、10結果表明：以總多糖的含量為評價指標，影響提取工藝的因素作用順序為：C>A>B，其中提取次數的影響具有極顯著性差異(p<0.01)，加水量有顯著性差異(p<0.05)，從經濟角度考慮，最佳工藝為A3B1C3，即藥材加10倍量水煎煮3次，每次1 h.

2.2.6驗證試驗

按處方取10倍量的藥材，按最佳工藝進行煎煮，重復操作3次，過濾，濃縮，減壓干燥至恒重，測定提取物中總多糖的含量，結果見表11.

表11　驗證試驗結果

由表11可見：驗證結果合理，本工藝穩定可行.

3討論

西藥具有起效快、針對性強、治病相對容易的特點，但人體虛弱是由多方面因素所致，以西藥單純針對某一病癥進行治療無法獲得滿意結果，且西藥多伴有毒副作用，故對身體虛弱患者不建議以西藥進行調理.而中藥具有毒副作用較低，無成癮性等特點，單方和復方制劑所含成分豐富，通過調節脾胃、促進血液循環、提高免疫力等多方面調節人體機能，是體質虛弱人群的首選.

近年來，因受“回歸自然”思想的影響，中成藥、天然藥物開始倍受關注，為中藥新機型和新型給藥系統的研究開發帶來了機遇.中藥材本身具有的藥理作用固然重要，但劑型對藥效的影響同樣不可忽視，有時甚至起到了決定租用，它決定制劑的安全性、有效性、適用性和精密性等，劑型是藥物應用于臨床的橋梁[9].水蜜丸與湯劑、散劑、膏藥等均為中醫藥領域的傳統制劑，具有豐富的應用文化.但傳統劑型普遍存在用藥量較大、起效慢、不易保存等缺點，限制了其市場發展.隨著科技的發展，生產制備技術的提高，中藥新劑型和新型給藥系統的相關研究迅速發展，拓寬了中成藥的臨床應用領域，受到了越來越多醫藥專家及患者的青睞[10].

本實驗通過科學的分析和設計，利用現代化設備和技術提取原處方中的有效成分，旨在保留中藥原有優點的情況下，盡量減少服藥量，提高藥物穩定性和生物利用度.結果證明：調中補益方中藥材的最佳水提工藝為藥材加10倍量水煎煮3次，每次1 h，經驗證該方法提取出的提取物中總多糖含量最高，重復性好，適合工業生產，并為將來成型工藝和質量檢查等奠定了實驗基礎.

參考文獻

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