MEK—6318K稀釋液配制ABO反定型試劑紅細胞

摘要：目的 用MEK-6318K稀釋液配制ABO反定型試劑紅細胞。方法 利用MEK-6318K稀釋液配制5%的試劑紅細胞，4±2℃冰箱保存。每2d對紅細胞形態(tài)和數(shù)量、溶血和游離血紅蛋白量、細菌生長情況、紅細胞抗原性和特異性與震搖試驗等進行觀察，觀察其有效期。結(jié)果 用MEK-6318K稀釋液配制的試劑紅細胞有效期達10d。結(jié)論 用MEK-6318K稀釋液配制ABO反定型試劑紅細胞的有效期可達10d，因此完全可以來制備簡便ABO反定型試劑紅細胞來進行ABO反定型的檢測。

關(guān)鍵詞：MEK-6318K稀釋液；ABO；試劑紅細胞；反定型；有效期

很多醫(yī)院在做ABO反定型試驗時，常因ABO反定型試劑紅細胞懸液有效期短，不能購買太多，從而導(dǎo)致試劑暫時短缺；另外紅細胞懸液在保存或使用不當(dāng)時也很容易失效，給臨床工作帶來諸多不便。如果能用血細胞分析儀使用的稀釋液來配成紅細胞懸液來進行ABO反定型的檢測，會給臨床帶來很大的便利。現(xiàn)就其可行性進行研究。

1 資料與方法

1.1主要試劑與儀器 標準抗-A，抗-B血清，由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；MEK-6318K稀釋液（日本光電）、MEK-6318K血細胞分析儀（日本光電）、奧林巴斯醫(yī)學(xué)顯微鏡（日本）。血液混勻器（江蘇康建）

1.2反定型試劑紅細胞的制備 ①分別取5人份健康同型新鮮Rh陽性的A、B、O型紅細胞各0.5ml混合；②用無菌等滲生理鹽水洗滌紅細胞，3000r/min離心3min，共3次；③再用MEK-6318K稀釋液洗滌2次，以充分置換紅細胞中的生理鹽水；④用三種稀釋液配成4ml/dl的A、B、O三種血型試劑紅細胞；⑤將三種試劑紅細胞懸液混合分裝在八只壓滅菌的試管中，加上膠塞，置4±2℃保存。每隔2d取一只樣品進行檢測。

1.3檢測項目

1.3.1細胞形態(tài)觀察并計數(shù) 在顯微鏡下觀察紅細胞的形態(tài)并用MEK-6318K血細胞分析儀測定紅細胞的數(shù)量。

1.3.2溶血情況觀察和上清液游離Hb（血紅蛋白）測定 肉眼觀察A、B、O三種血型試劑上清液的顏色，初步判斷試劑的溶血情況。然后用MEK-6318K血細胞分析儀測定游離Hb含量。

1.3.3細菌生長情況觀察 將A、B、O三種血型試劑紅細胞搖勻，取一接種環(huán)接種于血瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察是否有細菌生長。

1.3.4試劑的抗原性和特異性檢測 分別向含有100ulA、B、O三種血型試劑紅細胞的試管中加入同一批號的標準抗-A，抗-B血清各100ul，混合均勻，1000r/min離心1min，輕輕搖動試管，使沉于管底的紅細胞浮起，觀察凝集強度的變化。

1.3.5震搖試驗觀察 將檢測合格的試劑紅細胞分別置于血液混勻器上，100rpm2min，觀察溶血情況。

2 結(jié)果

2.1細胞形態(tài)觀察和計數(shù) 三種血型試劑紅細胞8d后開始有少量的紅細胞發(fā)生皺縮，10d后皺縮紅細胞開始增多，12d后有近一半的紅細胞發(fā)生皺縮。其數(shù)量在12d內(nèi)沒有太大的變化。

2.2溶血情況和上清液游離Hb（血紅蛋白）含量 在14d以后溶血開始加劇，上清液中游離Hb含量也隨之增加。

2.3細菌生長 14d后開始有細菌生長。

2.4紅細胞抗原性和特異性 16d后抗原性開始下降。

2.5振搖試驗 上清液澄清，未發(fā)生溶血及其他不易分辨的現(xiàn)象。

3 討論

由于商品化的試劑紅細胞常因各種原因，如：有效期短；運送過程中的震蕩，溫度變化；試劑的反復(fù)混勻等因素造成檢驗結(jié)果的不準確。血型鑒定的原理是抗原-抗體反應(yīng)產(chǎn)生細胞凝集，通過正定型（細胞定型試驗）和反定型（血清定型試驗），來判定A、B、O血型。僅進行ABO正定型試驗，容易出現(xiàn)假陽性和假陰性反應(yīng)，必須進行ABO反定型試驗進行驗證。因此能夠快速配制反定型試劑紅細胞是非常必要的。

血細胞分析儀的配套稀釋液是臨床實驗室常用試劑，主要由磷酸鹽緩沖液、氯化鈉、防腐劑（苯甲酸鈉）、抗凝劑（EDTA鹽）等成分構(gòu)成，為等滲電解質(zhì)溶液。其成分在一定時間內(nèi)不僅能較好的維持細胞形態(tài)，以保證其不發(fā)生溶血，維持其抗原性和特異性；還能起到抑菌作用，使試劑在一定時間內(nèi)無細菌生長。另外，振搖試驗也模擬了試驗中反復(fù)混勻?qū)毎斐傻膿p壞，結(jié)果發(fā)生溶血及其他不易分辨的現(xiàn)象。因此，利用它作為試劑紅細胞的保存液，不僅可以隨時配制，而且還可以有效的保存紅細胞，至少10d之內(nèi)使用是安全可靠的。

試劑紅細胞在制備過程中，要注意室溫的變化，以免造成紅細胞破碎。再取紅細胞時，要盡量取中間的，可盡量去除白細胞。因為白細胞在保存期間會破損并釋放出的化學(xué)物質(zhì)如過氧化氫、白細胞酶、唾液酸苷酶，以及磷脂酰絲氨酸會直接影響紅細胞膜的功能，去除白細胞可以改善保存紅細胞的質(zhì)量[1]。在洗滌和添加保存液的過程中，要盡量減少機械損傷對紅細胞的破壞[2]，以免配制出不合格的試劑。另外，紅細胞洗滌還可去除存在于血漿中的抗體和可溶性抗原[3]，以免發(fā)生交叉反應(yīng)。這些也是保證所配試劑安全可靠的重要因素。

參考文獻：

[1]Bratosin D，Leszczynski S，Sartiaux C，etal.Improved storage of erythrocytes by prior leukodepletion；How cytometric evaluation of stored erythrocytes[J].Gycometry，2001，46（6）：35.

[2]周華友，陳少彬，于艷濤，等.用血細胞分析儀稀釋液配制ABO反定型試劑紅細胞[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，3（24）：113-115.

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].東南大學(xué)出版社，2006：90.

編輯/哈濤