胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C蛋白表達及其臨床意義

·短篇論著·

胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C蛋白表達及其臨床意義

周琎潘超楊士勇殷少華黃冠戴樹龍楊坤興

胰腺癌惡性程度高、侵襲力強、進展快、預后極差。診斷后的中位生存期只有5 ～6個月，發病后5 年生存率僅為5%～10%，死亡率在各腫瘤中位居第4位[1]。目前手術是唯一根治的方法，但有機會接受手術治療的患者不到30%[2]，并且術后5年的存活率也低于20%[3-4]。探討胰腺癌的發生發展機制，闡明胰腺癌侵襲、轉移有關的分子機制，尋找胰腺癌調控通路上的靶點對于胰腺癌的診斷、治療至關重要。本研究檢測胰腺癌組織熱休克蛋白90α(heat shock proteins 90α，HSP90α)、血管內皮生長因子 C(VEGF-C)的表達，探討它們與腫瘤臨床病理參數間的相關性。

一、資料與方法

1．資料：選擇2006年1月至2012年2月南京醫科大學附屬南京第一醫院收治的臨床資料完整的胰腺癌患者40例。其中男性26例，女性14例，年齡52～74歲。所有患者均未接受放化療，均行外科手術且術后病理證實為胰腺癌。

2．免疫組化染色：所有手術標本均經10%甲醛固定，石蠟包埋、連續切片，采用二步法免疫組化染色法檢測HSP90α、VEGF-C蛋白表達。兔抗人HSP90α單抗、兔抗人VEGF-C多抗均購自美國EPITOMIC公司，按說明書操作。以已知的乳腺癌HSP90陽性組織、已知的結腸癌VEGF陽性組織作為陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。細胞質和(或)細胞核中出現明顯的棕黃色顆粒為HSP90α陽性染色，細胞質內出現棕黃色顆粒為VEGF-C陽性染色。每張切片隨機選取5個400倍視野，觀察染色強度及計算陽性細胞百分比。陽性細胞5%以下為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；細胞無著色為0分，棕黃色為1分，棕色、粗顆粒狀為2分，棕褐色、小塊狀為3分。兩分相乘， 0分為-，1～4分為+，5～8分為++，≥9分為+++。

3．統計學處理：采用SPSS18.0統計軟件包進行統計學分析。計數資料以百分率表示，采用χ2檢驗，胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C表達的相關性采用Wilcoxon秩和檢驗。P<0.05為差異具有統計學意義。

二、結果

1．胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C表達：胰腺癌組織HSP90α陰性表達11例，+、++、+++表達分別為4、20、5例；VEGF-C陰性表達4例，+、++、+++表達分別為6、20、10例(圖1)。癌旁正常胰腺組織HSP90α陰性表達33例，+、++表達分別為6、1例；VEGF-C陰性表達30例，+、++分別為6、4例。胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C陽性表達率分別為72.5%(29/40)、90%(36/40)；癌旁正常胰腺組織的陽性表達率分別為17.5%(7/40)、25%(10/40)。胰腺癌組織的陽性表達率均顯著高于癌旁正常胰腺組織，差異有統計學意義(P值均<0.05)。

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.018

作者單位：210006南京，南京醫科大學附屬南京醫院(南京第一醫院)普外科

通信作者：楊坤興，Email: plt308@163.com

圖1　胰腺癌組織HSP90α(1A)、VEGF-C(1B)表達(免疫組化　×400)

2．胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C表達與臨床病理參數間的關系：HSP90α、VEGF-C表達水平與患者性別、年齡及腫瘤大小均無關(P值均>0.05)，而與腫瘤組織分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關(P值均<0.05)。腫瘤組織分化程度低，有淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者的HSP90α、VEGF陽性表達率高(表1)。

3．胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C表達的相關性：HSP90α、VEGF-C表達均陽性29例，均陰性4例，單純VEGF-C陽性7例，無單純HSP90α陽性例。胰腺癌組織HSP90與VEGF-C表達呈正相關(r=0.541，P<0.05)。

討論熱休克蛋白(HS)是一種高度保守的細胞應激蛋白，根據分子量的大小分為4個家族：HSP90家族、HSP70家族、 HSP60家族及小分子HSP家族。HSP90是一種十分活躍的分子伴侶蛋白，有4種亞型，胞質內有HSP90α和HSP90β兩型。多種蛋白信號轉導都有賴于HSP90的參與。HSP90通過分子伴侶作用與其客戶蛋白結合，穩定客戶蛋白構象，保持客戶蛋白活性，防止其被泛素化途徑降解。腫瘤細胞通過HSP90的幫助維持細胞增殖、抑制細胞的凋亡。HSP的客戶蛋白包括IGF-1R、EGFR、HIF-1a、AKT1、RAF-等[5]，多達100多種。HSP90在乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、白血病等高表達，且與腫瘤的惡性程度密切相關[6]。本研究結果表明，HSP90α在胰腺癌組織中高表達,胰腺癌HSP90α陽性表達與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結轉移相關，提示HSP90α參與胰腺癌的侵襲及轉移。

表1　胰腺癌組織HSP90α、VEGF-C表達與腫瘤臨床病理參數的關系

VEGF是目前研究較多的一類因子，它是一種較強的促進血管生成的細胞因子，屬于血小板源性生長因子超家族成員之一。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、PIGF。VEGF通過與細胞膜上的受體結合，介導細胞內酪氨酸激酶磷酸化而發揮一系列的生理功能，通過與其特異性的受體結合而發揮多中心生物學效應[7]。VEGF的高表達與腫瘤細胞的侵襲和轉移也密切相關。腫瘤細胞通過分泌VEGF來促進血管內皮細胞的分裂和生長，誘導新生血管的生成，而阻斷VEGF信號轉導可以抑制其表達，抑制腫瘤血管及淋巴管的生成，達到抑制腫瘤生長的目的。亓憲銀等[8]報道，非小細胞肺癌組織VEGF-C的表達與肺癌的淋巴結轉移、分化程度及腫瘤TNM分期顯著相關。張勝輝等[9]報道，VEGF高表達患者發生淋巴結轉移的可能性明顯增加。本研究結果也顯示，胰腺癌組織VEGF-C高表達，并且與腫瘤淋巴結轉移、分化程度及TNM分期相關。

HSP90的一些客戶蛋白在促存活信號通路中發揮作用，信號通路被激活時上調表達促增殖轉錄因子，下調表達促凋亡因子，腫瘤細胞凋亡受到抑制[10]。VEGF也是HSP90的一種重要客戶蛋白存在于信號通路中。當HSP90活性被抑制時，VEGF、IGF-1R、Bcl-2等依賴于HSP90的客戶蛋白會降解，促增殖信號通路被抑制，腫瘤細胞發生凋亡。腫瘤細胞啟動新生血管生成依賴于VEGF途徑。Sun等[11]報道，VEGF在血管生成過程中需要HSP90的支持以達到血管內皮細胞的穩定生成。而HSP90抑制劑可以通過兩種途徑阻斷VEGF通路。第一種途徑是HSP90抑制劑通過抑制低氧誘導因子(hypoxia-inducible factor，HIF)的活性顯著減少VEGF的生成[12]。HIF是依賴于HSP90的轉錄因子，當HSP90被抑制時，作為分子伴侶的HSP90就不能穩定HIF的功能、狀態，HIF也就難以上調下游基因VEGF的表達。其次，HSP90也參與維持VEGF受體蛋白穩定。HSP90抑制劑能誘導它們的降解，阻止內皮細胞增殖和分化，進而抑制腫瘤新生血管生成[10,12]。本研究結果顯示，胰腺癌組織HSP90α及VEGF-C表達呈正相關關系，這也為HSP90、VEGF之間的聯系添加了新的實驗證據。

參考文獻

[1]李鳳茹, 江華. 胰腺癌發病的高危因素分析[J].國際消化病雜志,2013, 33(5): 331-334.

[2]Pannala R, LeirnessJB, Bamlet WR, et al. Prevalence and clinical profile of pancreatic cancer-associated diabetes mellitus[J]．Gastroenterology，2008，134(4)：981-987.

[3]Richter A, Niedergethmann M, Sturm JW, et al. Long-term results of partial pancreaticoduodenectomy for ductal adenocarcinoma of the the pancreatic head：25-year experience[J].World J Surg, 2003, 27(3): 324-329.

[4]中華醫學會外科學分會胰腺外科學組.胰腺癌診治指南(2014版)[J].中華消化外科雜志,2014,13(11):831-837.

[5]Sun J, Liu L, Jiang X, et al. Therapeutic effects of radiolabeled 17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin on human H460 nonsmall-cell lung carcinoma xenografts in mice [J].Cancer Biother Radiopharm, 2010,25(2):155-164.

[6]Barrott JJ, Haystead TA. Hsp90, an unlikely ally in the war on cancer[J]. FEBS J, 2013, 280(6):1381-1396.

[7]Xu Y, Zhong Z, Yuan J, et al. Collaborative overexpression of matrix metalloproteinase-1 and vascular endothelial growth factor-C predicts adverse prognosis in patients with gliomas [J].Cancer Epidemiol, 2013, 37(5): 697-702.

[8]亓憲銀, 李大宏, 徐林浩. 非小細胞肺癌中VEGF-C、VEGF-3mRNA表達對淋巴結轉移和預后的研究[J]. 重慶醫學, 2011, 40(15): 1478-1480．

[9]張勝輝, 王軼靈, 王明松,等.血管內皮生長因子表達與肺癌預后的關系[J].重慶醫學,2010,39(16):2157-2158.

[10]Xu W, Neckers L.Targeting the molecular chaperone heat shock protein 90 provides a multifaceted effect on diverse cell signaling pathways of cancer cells[J]. Clin Cancer Res, 2007, 13(6):1625-1629.

[11]Sun J, Liao JK. Induction of angiogenesis by heat shock protein 90 mediated by protein kinase Akt and endothelial nitric oxide synthase[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2004, 24(12): 2238-2244.

[12]Tsutsumi S, Neckers L. Extracellular heat shock protein 90：a role for a molecular chaperone in cell motility and cancer metastasis[J].Cancer Sci, 2007,98(10): 1536-1539.

收稿日期：(2014-11-17)

(本文編輯：呂芳萍)