多元回歸光度法同時測定復方對乙酰氨基酚片中對乙酰氨基酚和乙酰水楊酸

多元回歸光度法同時測定復方對乙酰氨基酚片中對乙酰氨基酚和乙酰水楊酸

常春，屈清慧，郭琦*

(西安交通大學藥學院，西安710061)

摘要：目的 建立多元回歸分光光度法同時測定復方對乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚。方法樣品用0.2 mol·L-1氫氧化鈉水解乙酰水楊酸后，以pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液為溶劑，采用多元回歸分光光度法，測定波長為236，272和283 nm。結果乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的平均回收率分別為98.9%和99.0%，RSD分別為2.4%和3.0%。結論樣品測定結果與部頒標準法比較，其準確度和精密度無顯著性差異，該法可同時準確測定復方對乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的含量。

關鍵詞：復方對乙酰氨基酚片；乙酰水楊酸；對乙酰氨基酚；多元回歸分光光度法；含量測定

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.014

中圖分類號：R927.2文獻標志碼：A

作者簡介：常春，女，實驗師

收稿日期：(2015-03-20)

Simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets by multiple regression spectrophotometry

CHANG Chun，QU Qinghui，GUO Qi*(School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China)

Abstract:ObjectiveTo estabish a method of multiple regression spectrophotometry for simultaneous determination of acetylsalicylic acid and acetaminophen in Compound Paracetamol Tablets.MethodsThe samples were hydrolyzed by the solution of 0.2 mol·L-1 NaOH.The components were determined in potassium dihydrogen phosphate buffer(pH 6.5) solution.The multiple linear regression spectrophotometry was used at wavelength of 236，272 and 283 nm. ResultsThe average recoveries of acetylsalicylic acid and acetaminophen were 98.9% and 99.0%，with RSD 2.4% and 3.0%，respectively. ConclusionAccuracy and precision of the method was compared with the official quantitative analysis and no significant difference was found. This method is accurate for the simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets.

Key words: Compound Acetaminophen Tablets；acetylsalicylic acid；paracetamol；multiple regression spectrophotometry;determination

*通信作者：郭琦，女，副教授

復方對乙酰氨基酚片為常用的解熱鎮痛藥，用于普通感冒或流行性感冒引起的發熱，也用于緩解輕中度疼痛如頭痛、關節痛等。它是由乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因3種成分組成的復方制劑。中國衛生部藥品標準化學藥品及制劑第一冊[1]均為容量法，需對樣品回流提取，操作較繁瑣。本文采用多元線性回歸分光光度法[2]進行了乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的同時測定，結果滿意，樣品無需預處理，操作快速簡便，所用儀器普及，易于推廣。

1儀器與試藥

1.1儀器SP-2102UV紫外分光光度計(上海光譜儀器有限公司)；S-25數字式pH計(上海日島科學儀器有限公司)；AUY220分析天平(SHIMADZU)；GZX-903MBE電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)；KQ3200DBB型數控超聲波清洗器(昆山禾創超聲儀器有限公司)。

1.2試藥乙酰水楊酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100113-200603)；對乙酰氨基酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100018-200408)；水楊酸(西安化學試劑廠)；復方對乙酰氨基酚片2批(產地：西安，批號20131105，20131011)均為市售，規格為每片含乙酰水楊酸230 mg、對乙酰氨基酚126 mg、咖啡因30 mg。

1.3試劑濃度為0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液；2 mol·L-1的鹽酸溶液；pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液；0.5 g·L-1酒石酸的無水乙醇溶液；所用試劑均為分析純。

1.4乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因標準儲備液的配制分別精密稱取乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品適量，分別精密加入0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL，靜置15 min，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液配制成一定質量濃度的標準儲備液，搖勻，備用。

1.5乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品溶液的配制精密吸取乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因標準儲備液一定量，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋成適當質量濃度的相應對照品溶液。

2方法與結果

2.1吸收光譜分別精密量取乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因標準儲備液，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液配制成適宜質量濃度，同時按處方比精密稱取乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品一定量，用同樣方法配制成標準混合溶液，以空白試劑為參比，在200～400 nm范圍內進行紫外吸收光譜掃描。結果表明，對乙酰氨基酚、咖啡因和乙酰水楊酸分別在240，275和300 nm處有最大吸收峰，吸收光譜上的較大差異為多元線性回歸法提供了可能性。

2.2吸光度加和性考察及測定波長選擇用乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品分別配制單一質量濃度的標準溶液及三組分標準混合溶液。以試劑空白為參比，在220～300 nm范圍內每隔1 nm測量其各波長處的吸光度值，由標準混合溶液在各波長處測得的吸光度值(Ai)與單一質量濃度乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因標準溶液在各波長處測得的吸光度值之和(ΣA0)比較，計算不同波長下的相對誤差|Ai-ΣA0| /ΣA0。在220～300 nm范圍內，選擇相對誤差較小處的波長作為測定波長，結果選擇最佳的3個波長為236，272和283 nm，所選擇的各測定波長，滿足加和性。

2.3回歸方程的建立精密移取乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品溶液適量，按正交設計表L9(34) 配制9組標準混合溶液，各組分質量濃度見表1，分別在236，272和283 nm波長測定吸光度，然后用多元線性回歸法求得乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的回歸方程及復相關系數(RR)，回歸平方和(U)，殘差平方和(Q)，F檢驗值。

表1混合溶液中各組分質量濃度

Tab.1 Concentration of components in mixed solution

編號乙酰水楊酸/μg·mL-1對乙酰氨基酚/μg·mL-1咖啡因/μg·mL-1111.506.3001.505211.5012.603.010311.5025.206.020422.996.3003.010522.9912.606.020622.9925.201.505745.986.3006.020845.9812.601.505945.9825.203.010

乙酰水楊酸CA=0.387 421+1.817 705A236-106.045A272+149.276 6A283

(RR=0.999 756，U=1 849.438，Q=0.451 989，F=6 819.63)

對乙酰氨基酚CP=1.648 09+20.945 49A236+45.856 9A272-78.572A283

(RR=0.997 219，U=554.114 9，Q=1.545 104，F=597.710 5)

式中,CA為乙酰水楊酸的質量濃度，CP為對乙酰氨基酚的質量濃度，A236,A272和A283分別為236，272和283 nm處的吸光度。乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚回歸方程的質量濃度范圍分別為11.50～45.98和6.30～25.20 μg·mL-1。

2.4樣品測定精密稱取復方對乙酰氨基酚片細粉適量，置于100 mL量瓶中，精密加入10 mL 氫氧化鈉溶液(0.2 mol·L-1)，充分振搖，使溶解，靜置15 min，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻，干濾紙濾過，精密吸取續濾液1 mL，置于100 mL量瓶中，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋至刻度，以空白試劑為參比，在236，272和283 nm處測定吸光度。分別按乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚各自的回歸方程計算其含量，結果見表2。

表2樣品含量(標示量)測定結果

Tab.2 The content (labeled amount) of the sample

( n=3)

注：a：RSD(%)；b：F0.05=19.00，t0.05=2.776

2.5回收率實驗精密稱取等量已知含量的同批(批號071105)復方對乙酰氨基酚片細粉各6份，分別精密加入一定量(低、中、高)的乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚對照品，按照樣品測定方法制備測定，計算乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的回收率，結果見表3。

表3乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚回收率實驗結果

Tab.3 The recovery of acetylsalicylic acid and paracetamol

樣品乙酰水楊酸原含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%對乙酰氨基酚原含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%125.4715.1440.4098.6114.008.29022.0697.23225.4715.1440.90102.6014.008.29021.8995.17325.4720.1944.7795.5914.0011.0625.0299.64425.4720.1945.2898.1214.0011.0624.9398.83525.4725.2450.3898.6914.0013.8228.35103.80625.4725.2450.6899.8814.0013.8227.6999.06X(%)98.91?98.96RSD(%)2.40?3.00

2.6重復性實驗精密稱取同一批號的復方對乙酰氨基酚片細粉5份，按樣品測定項下方法測定2組分含量，重復性實驗結果表明，乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚標示量含量測定值分別在103.1～104.8和98.5～102.3之間，RSD值分別為0.7%和1.9%(n=5)。

2.7穩定性實驗取重復性實驗項下任一溶液，分別于0，2，4，6和8 h在選定波長處測定吸光度，結果其RSD值分別為1.2%，1.7%和1.1%(n=5)，表明樣品溶液在8 h內測定較為穩定。

將重復性實驗項下任一溶液放置不同時間(0，2，4，6和8 h)后測量其吸光度，結果表明，溶液至少在8 h內穩定。

2.8輔料干擾實驗精密稱取復方對乙酰氨基酚片細粉一定量，按樣品測定項下操作制備樣品溶液；同時與該片粉量按處方比精密稱取適量的乙酰水楊酸、對乙酰氨基酚和咖啡因對照品，共置于小燒杯中混合，同樣按樣品測定項下進行操作，制備模擬樣品溶液。將樣品溶液和模擬樣品溶液分別在200～400 nm范圍內進行紫外吸收光譜掃描，結果樣品與模擬樣品的紫外吸收光譜圖完全重合，表明輔料對含量測定無干擾。

3討論

①溶劑選擇實驗發現,選用不同的溶劑對咖啡因、乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的溶解度和穩定性有顯著的影響。本文曾實驗過以pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液、0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液或0.5 g·L-1酒石酸的無水乙醇液來溶解樣品進行測定，結果發現pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液不僅無毒、價廉、對藥物有良好的溶解度，而且藥物在該溶劑中的穩定性最好，完全滿足實驗要求。

實驗發現選用不同的溶劑對咖啡因、乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚的溶解度和穩定性有顯著的影響。本文曾實驗過用單一溶劑(如pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液、0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液或0.5 g·L-1酒石酸的無水乙醇液)溶解樣品進行測定，效果不理想。由于乙酰水楊酸易水解生成水楊酸，為了使混合物測定時干擾組分數減少，因此本文選用了先將乙酰水楊酸用0.2 mol·L-1氫氧化鈉水解成水楊酸，然后再在pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液中測定，完全滿足實驗要求。按本文的實驗條件對咖啡因和對乙酰氨基酚的紫外吸收進行了考察，結果表明，2種組分的紫外吸收光譜特征在水解前后無任何改變。同時對水楊酸與相當量的乙酰水楊酸水解產物的紫外吸收進行了實驗，實驗亦表明，兩者吸收曲線完全重合。

②實驗中還采用中國衛生部藥品標準方法[1]對樣品中的乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚含量進行了測定，并對采用本方法的測定結果與標準方法的測定結果進行了顯著性檢驗。F和t計算值與理論值(α=0.05)之間無顯著性差異，說明2種方法在測定復方對乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚時有相似的精密度和準確度。

③本文建立的同時測定復方對乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對乙酰氨基酚方法，所需儀器設備簡單、普及，操作簡便，具有較好的精密度和準確度，取得了滿意的結果。

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