不同工藝白金膠囊對慢性不可預知應激所致小鼠抑郁癥的影響

倪博然 林龍飛 張慧 倪健

摘要：目的 評價不同工藝制備的白金膠囊治療慢性不可預知應激所致小鼠抑郁癥的藥效。方法 采用慢性不可預知應激制備小鼠抑郁模型。實驗小鼠按體質量隨機分為模型組、陽性藥組、工藝品1（傳統工藝）大劑量組、工藝品1小劑量組、工藝品2（精制工藝）大劑量組、工藝品2小劑量組，各藥物組小鼠予相應劑量灌胃給藥。通過測定小鼠游泳不動時間、懸尾不動時間兩個行為學指標考察白金膠囊傳統工藝和精制工藝的抗抑郁作用；通過測定小鼠自主活動和體質量考察受試藥物是否具有中樞興奮性或改變動物機體的機能狀態的作用。結果 模型組和工藝品2大、小劑量組小鼠游泳不動時間分別為（138.27±40.70）s、（100.01±34.75）s、（88.15±30.62）s，差異有統計學意義（P<0.01）；模型組和工藝品2小劑量組小鼠自主活動次數分別為（668±19）次、（705±24）次，差異有統計學意義（P<0.01）；模型組和工藝品1大劑量組體質量分別為（28.14±1.25）g、（26.43±2.58）g，差異有統計學意義（P<0.05）；模型組和工藝品2大劑量組小鼠懸尾不動時間時間分別為（98.29±36.90）s、（87.54±30.05）s，工藝品2大劑量組小鼠懸尾不動時間有縮短趨勢，但差異無統計學意義。結論 精制工藝白金膠囊用于治療慢性不可預知應激所致小鼠抑郁癥的藥效優于傳統工藝。

關鍵詞：白金膠囊；傳統工藝；精制工藝；慢性不可預知應激；抑郁癥；小鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.015

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）01-0065-04

Effects of Different Processes of Baijin Capsule on Treatment of Mice with Chronic Unpredictable Stress-induced Depression NI Bo-ran， LIN Long-fei， ZHANG Hui， NI Jian （Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Abstract： Objective To evaluate the efficacy of different processes of Baijin Capsule to treatment of mice with chronic unpredictable stress-induced depression. Methods Chronic unpredictable stress was used to establish depression mice models. Experimental mice were divided into the following groups according to body mass： model group， positive medicine group， artware one （traditional process） high-dose and low-dose groups， and artware （refining process） two high-dose and low-dose groups. All medication groups were given relevant medicine for gavage. By detecting the two behavior indexes， immobility time of swimming and tail suspension of mice， the anti-depression effects of traditional process and refining process of Baijin Capsule were investigated. By detecting autonomic activities and body mass， tested medicine was examined for function state of central excitation and changing animal body. Results The times for automatic activities of Baijin Capsule in the model and artware （refining process） two high-dose and low-dose groups were （138.27±40.70）s， （100.01±34.75）s and （88.15±30.62）s， respectively， with statistical significance （P<0.01）； the mice swimming immobility times in the model and artware （refining process） two low-dose groups were 668±19 and 705±24， respectively， with statistical significance （P<0.01）； the mice tail suspension immobility times in model and artware （traditional process） one high-dose groups group were （28.14±1.25）g and （26.43±2.58）g， respectively， with statistical significance （P<0.05）； the mice tail suspension immobility times in model and artware （refining process） two high-dose groups were （98.29±36.90）s and （87.54±30.05）s. Mice tail suspension immobility time in artware （refining process） two high-dose group decreased，

without statistical significance. Conclusion Refining process of Baijin Capsule can effectively be used to treat mice with chronic unpredictable stress-induced depression， and the efficacy is superior to the traditional process.

Key words： Baijin Capsule； traditional process； refining process； chronic unpredictable stress； depression； mice

抑郁癥是一種常見的大腦功能紊亂性疾病，為慢性反復發作的腦疾病，曾被喻為“心理疾病中的感冒”。臨床上對抑郁癥的治療模式和方法分類有很多，藥物治療是目前臨床上治療抑郁癥的重要手段，但由于抑郁癥發病的確切機制仍未完全明確，目前藥物治療僅在一定程度上有效，并不能治愈抑郁癥，而且抗抑郁藥的安全性問題目前尚無法解決，WHO已將抗抑郁藥列為21世紀最需迫切開發的藥物之一。白金膠囊藥方來自臨床經驗方，在臨床上被用于治療肝氣郁結所致的抑郁癥，顯示出良好的療效[1]。但傳統工藝制劑攜帶、服用不便，臨床順應性較差，故將處方中各藥味分別精制，將其制成膠囊劑。本研究以ICR小鼠為實驗對象，采用慢性不可預知應激制備抑郁模型，以自主活動、體質量、懸尾不動和強迫游泳不動時間為指標，評價白金膠囊傳統工藝與精制工藝的抗抑郁藥效，為制備工藝變更提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 動物

雄性ICR小鼠120只，10周齡，體質量18～22 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號SCXK（京）2012-0001。置于室溫（23±1）℃，24 h晝夜循環光照條件下飼養，自由飲水取食。

1.2 藥物和試劑

郁金（批號20130601）、合歡花（批號20130901）、蜘蛛香（批號20130901），亳州市遠光中藥飲片廠；白芍（批號201002298），北京同仁堂飲片有限責任公司；姜黃素對照品（批號110823-201004）、槲皮苷對照品（批號111538-200504）、芍藥苷對照品（批號110736- 201136）、苯甲酸對照品（批號100419-201302），中國食品藥品檢定研究院；11-ethoxyviburtinal對照品，北京中醫藥大學高增平教授實驗室提供，供含量測定用；白金膠囊工藝品1及2均為固體粉末（本實驗室自制）配制成適宜濃度混懸液使用；陽性藥物為鹽酸氯米帕明片，天津藥物研究院藥業有限責任公司，批號110703，25 mg/片。乙腈、甲醇均為色譜純（Fisher公司），蒸餾水。

1.3 儀器

安捷倫1206高效液相色譜儀，Aglient Extend- C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），TU-1810紫外可見分光光度儀（北京普析通用儀器有限責任公司），DZ-2BC型真空干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），METTLER-AE240型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司），KQ3200DE型數控超聲波清洗儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司），BT125D型電子天平（賽多利斯），小鼠自主活動儀（MV1ZDMACHI.KIKAI.EEO.ZTD，TOKYO），小動物行為分析系統（Ethovision XT 9）。

2 方法與結果

2.1 白金膠囊傳統工藝制備方法

按處方比例，將郁金、合歡花、白芍、蜘蛛香以10倍量水提取3次，每次1.5 h，合并提取液，濃縮，蒸干，得白金膠囊傳統工藝制品（工藝品1）。采用高效液相色譜法（HPLC），以乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動相，檢測波長為230 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，測定白金膠囊工藝品1中芍藥苷的含量為1.96%。

2.2 白金膠囊精制工藝制備方法

對處方中的各藥材分別單獨提取，繼而采用大孔樹脂技術進行純化，并測定各提取物中指標性成分的含量。將純化后的各藥材提取物，按處方比例混勻即得白金膠囊精制工藝制品（工藝品2）。

2.2.1 郁金提取精制工藝優選及姜黃素含量測定 通 過正交試驗篩選出郁金提取精制工藝為：稱取郁金，加入6倍量70%乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5 h，濾過，合并提取液，減壓濃縮至0.5 g原藥材/mL，過S-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量為0.6 g原藥材/mL樹脂，5 BV水洗棄去，減壓回收80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，備用。按照2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）姜黃項下含量測定方法[2]，測定提取精制樣品中姜黃素的含量為3.63%。

2.2.2 合歡花提取精制工藝優選及槲皮苷和總黃酮含量測定 正交試驗篩選合歡花提取精制工藝為：稱取合歡花，加入12倍量70%乙醇溶液，回流提取2次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至0.2 g原藥材/mL，過AB-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量為0.4 g原藥材/mL樹脂，徑高比為1∶8，4 BV水洗棄去，4 BV 10%乙醇洗棄去，減壓回收50%乙醇洗脫液，濃縮干燥，備用[3-4]。采用HPLC，以乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）為流動相，檢測波長為256 nm，流速1.0 mL/min，柱

溫30 ℃，進樣量10 μL，測定提取精制的樣品中槲皮苷含量為16.59%。采用AlCl3直接顯色法，以槲皮苷為對照品，檢測波長為425 nm，測定提取精制樣品中總黃酮的含量為30.62%。

2.2.3 白芍提取精制工藝優選及白芍總苷和芍藥苷含量測定 正交試驗篩選白芍提取精制工藝為：稱取白芍，加入14倍量70%乙醇溶液，回流提取3次，每次1.5 h，濾過，合并提取液，減壓濃縮至0.2 g原藥材/mL，過AB-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量為0.75 g原藥材/mL樹脂，徑高比為1∶8，5 BV水洗棄去，減壓回收50%乙醇洗脫液，濃縮干燥，備用。采用HPLC，以乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動相，檢測波長為230 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，測定提取精制樣品中芍藥苷的含量為36.38%。采用NaOH水解法水解，采用HPLC，以甲醇-0.05 mol/L磷酸氫二鉀-異丙醇-冰乙酸（87∶13∶4∶4）為流動相，檢測波長為230 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，測定提取精制樣品中苯甲酸的含量，根據公式白芍總苷含量（%）=苯甲酸含量%×480.27÷122.12，計算提取精制樣品中白芍總苷的含量為53.11%。