腫瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺癌中的表達及意義

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腫瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺癌中的表達及意義

李俊軍，何艷，胡小波，歐陽立志

(湖南省腫瘤醫院暨中南大學湘雅醫學院附屬腫瘤醫院病理科，湖南長沙4100013)

【摘要】目的:分析人黑色素瘤相關抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常組織、乳腺良性瘤及乳腺癌組織中的表達趨勢，為乳腺癌臨床診斷和生物治療探尋新靶點。方法:選取本院接受并行手術治療的乳腺良性腫瘤和乳腺癌患者各33例，分別取病灶組織和病灶周邊正常組織制備石蠟病理切片，以免疫組織化學實驗檢測MAGE-A9和MAGE-A11的表達水平，并分析其與乳腺癌病理特征的相關性。結果: MAGE-A9在正常組織中無表達，在乳腺良性瘤和乳腺癌的陽性表達率分別為15.2％和54.5％，差異有統計學意義(P＜0.05); MAGE-A11在正常組織及良性瘤中均無表達，僅在乳腺癌中表達，陽性表達率達78.8％。MAGE-A9表達受組織學分級、ER、HER-2的影響，組織學Ⅲ級患者明顯高于Ⅰ、Ⅱ級，ER、HER-2陽性高于陰性; MAGE-A11表達僅受到ER、HER-2的影響，ER、HER-2陽性高于陰性，差異有統計學意義(P＜0.05)。線性回歸分析結果顯示MAGE-A9和MAGE-A11表達水平呈直線正相關性(y =0.798 1x + 1.278; R2=0.694 8)。結論: MAGE-A9和MAGEA11可能與乳腺癌的發生發展有密切關系。

【關鍵詞】MAGE-A9; MAGE-A11;乳腺癌

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，當前的臨床治療是以手術為主的綜合治療，根據患者的病理類型和臨床表現，選擇適當的包括手術、放療、化療以及內分泌療法等綜合治療措施。然而，外科手術適用范圍有限，僅針對早期病變可取得理想效果，對于已經發生復發、轉移或嚴重分化的患者，其臨床療效欠佳;放、化療缺乏特異性，醫源性傷害較大［1］。黑色素瘤抗原基因(melanoma associated antigen，MAGE)是癌睪丸抗原(CTA)家族成員，正常生理條件下僅表達于睪丸組織和胚胎組織。據報道，部分腫瘤組織中亦發現有MAGE表達，有學者指出MAGE有望成為腫瘤性疾病的靶抗原之一［2-3］。本研究對乳腺癌患者的MAGE-A9和MAGE-A11的表達情況進行初步研究，并分析其與乳腺癌病理特征的相關性。

1　資料和方法

1.1一般資料

選取本院2012年3月至2014年1月收治的33例乳腺癌患者和33例良性瘤患者為研究對象。乳腺癌:年齡33～68歲，平均(53.6±4.06)歲;病理類型:導管癌21例、小葉癌7例、髓樣癌3例、粘液癌2例;腫瘤體積1.6～6.4 cm3，平均(2.9±0.8)cm3; TNM分期:Ⅰ期9例、Ⅱ期19例、Ⅲ期5例;組織學分級:Ⅰ級7例、Ⅱ級20例、Ⅲ級6例;良性瘤:乳腺纖維瘤21例、腺瘤12例。

1.2主要儀器和試劑

微波爐(P702: iTP-6，格蘭仕);光學顯微鏡(XZJ-2030B，江西鳳凰);手動切片機(RM2235，德國萊卡); MAGE-A9一抗(SAB1411908，Sigma，來源于小鼠); MAGE-A11一抗(HPA045377，Sigma，來源于兔); MAGE-A9二抗(Ab150105，Abcam，驢抗小鼠); MAGE-A11二抗(Ab150077，Abcam，山羊抗兔);濃縮型DAB試劑盒(C0168，上海諾淵實業有限公司);蘇木精(DH156，上海鼎國生物技術有限公司);山羊血清(GO-505，上海博升生物技術有限公司)等。

1.3研究方法

所有患者均于手術過程中留取病灶組織和病灶周邊健康組織，制備石蠟病理切片。所得病理切片按一下流程進行免疫細胞化學(ICC)實驗: (1)脫蠟至水:60℃恒溫箱，烘烤30 min。然后按照“二甲苯10 min×2→100％酒精5 min→95％酒精5 min→75％酒精5 min→70％酒精5 min”的流程浸泡。(2)抗體孵育: PBS清洗3次，每次5 min，滴加適量一抗，4℃過夜;抗體以5％的脫脂牛奶稀釋，SAB1411908、HPA045377的最佳工作濃度分1∶2 000、1∶3 000;37℃復溫45 min，PBS清洗，滴加適量二抗，28℃孵育90～120 min; Ab150105、Ab150077的最佳工作濃度均為1∶2 500。(3)顯色和鏡檢: PBS清洗，DAB顯色5 min; PBS清洗，蘇木精復染2 min;鹽酸酒精分化后，再行常規脫水、透明流程，并采用中性樹膠封片鏡檢。

1.4觀察指標

1.4.1陽性表達率顯微鏡下可見MAGE-A9和MAGE-A11蛋白在胞質和胞核中均有表達，觀察著色程度和著色比例。著色程度:無色0分;淡黃色1 分;棕黃色2分;褐色3分。著色比例:著色細胞數不足5.0％ 0分; 5.0～10％ 1分; 11～20％ 2分; 21～50％ 3分;＞50％ 4分。著色程度+著色比例＞2者為陽性表達病例，計入陽性表達率［4］。

1.4.2陽性表達量拍照，采用圖像分析軟件Image-pro plus，測量各樣品組織光密度值，作為其陽性表達量。

1.5統計學分析

采用統計學軟件SPSS16.0統計數據，陽性表達量用均數標準差(±s)表示，組間比較行兩獨立分組的t檢驗;陽性表達率以百分比表示，采用四格表確切概率法分析;相關性分析采用簡單線性回歸; P＜0.05表示差異有統計學意義，P＜0.001表示差異極有統計學意義。

2　結果

2.1MAGE-A9和MAGE-A11的表達

MAGE-A9在正常組織中無表達，在乳腺良性瘤和乳腺癌的陽性表達率分別為15.2％和54.5％，差異有統計學意義(P＜0.05)，平均表達水平分別為0.086±0.014、1.865±0.204，差異亦有統計學意義(P＜0.001); MAGE-A11在正常組織及良性瘤中均無表達，僅在乳腺癌中表達，陽性表達率達78.8％，見表1和圖1。

表1　兩組患者MAGE-A9和MAGE-A11的表達情況

圖1　各組患者MAGE-A9和MAGE-A11的免疫組化染色圖像（400×）

2.2MAGE-A9和MAGE-A11表達乳腺癌病理特征的關系

MAGE-A9和MAGE-A11表達與乳腺癌患者的年齡、腫瘤體積、病理類型、臨床分期、腫瘤大小、淋巴轉移及PR均無相關性(P＞0.05)。MAGE-A9表達受到組織學分級、ER、HER-2的影響，組織學分級為Ⅲ級患者明顯高于Ⅰ級和Ⅱ級，ER、HER-2陽性患者明顯高于陰性，差異有統計學意義(P＜0.05)。MAGE-A11表達僅受到ER、HER-2的影響，ER、HER-2陽性患者明顯高于陰性，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.3MAGE-A9和MAGE-A11表達的相關性分析

經簡單線性回歸分析，MAGE-A9和MAGE-A11表達水平呈直線正相關性(y = 0.798 1x + 1.278; R2=0.694 8)，見圖2。

圖2　MAGE-A9和MAGE-A11表達的相關直線

3　結論

根據表達特異性和基因結構的差異，MAGE家族可分為MAGE-Ⅰ和MAGE-Ⅱ兩類。前者定位于特定的X染色體，多表達于睪丸、胎盤及部分腫瘤組織，與多種腫瘤性疾病的發病機制密切相關;后者在X染色體則沒有明確的定位，多表達于神經組織，與腫瘤沒有明確關聯［5］。MAGE-A基因亞家族屬于MAGE-Ⅰ，現已發12名成員(MAGE-A1～MAGE-A12)，是當前腫瘤免疫療法的研究重點。研究表明［6］，除睪丸、胎盤等“免疫豁免”器官外，MAGE-A在正常人體組織中幾乎不表達，且多數腫瘤組織至少表達一種MAGE-A亞型。然而，不同的MAGE-A基因亞型在不同腫瘤具有不同的表達特點，如MAGE-A1高表達于神經膠質瘤而低表達于卵巢癌［7］。MAGE-A9和MAGE-A11對乳腺癌臨床診治是否有研究價值，目前尚無明確報道。

表2　乳腺癌患者MAGE-A9和MAGE-A11表達與病理特征的關系(±s)

表2　乳腺癌患者MAGE-A9和MAGE-A11表達與病理特征的關系(±s)

病理特征MAGE-A9(n =18)表達水平　F或t，P值MAGE-A11(n =26))表達水平　F或t，P值年齡＜40歲　1.825±0.173 40～50歲　1.866±0.185 ＞50歲　1.876±0.196 1.084，0.137 1.979±0.154 2.012±0.185 2.008±0.163 1.126，0.114病理類型導管癌　1.816±0.201小葉癌　1.873±0.183髓樣癌　1.853±0.174粘液癌　1.863±0.155 1.132，0.097 2.026±0.169 2.035±0.178 1.983±0.156 2.044±0.173 1.227，0.086腫瘤體積＜3 cm3　1.825±0.214 3～5 cm3　1.866±0.193 ＞5 cm3　1.886±0.203 1.007，0.152 2.005±0.157 2.007±0.187 1.998±0.146 0.931，0.207 TNM分期Ⅰ期　1.837±0.173Ⅱ期　1.863±0.185Ⅲ期　1.886±0.196 1.228，0.086 1.983±0.168 2.003±0.174 2.006±0.175 0.954，0.195組織學分級Ⅰ級　1.802±0.171Ⅱ級　1.851±0.173Ⅲ級　1.985±0.203 1.986，0.021 1.986±0.155 1.994±0.163 2.011±0.166 1.337，0.095分化程度高分化　1.903±0.186中分化　1.866±0.175低分化　1.853±0.183 1.427，0.077 2.016±0.175 2.007±0.163 2.001±0.166 1.406，0.080 ER陽性　2.135±0.221陰性　1.625±0.161 6.214，0.000 2.133±0.183 1.856±0.167 4.317，0.000 HER-2陽性　1.936±0.193陰性　1.753±0.187 3.102，0.001 2.203±0.195 1.922±0.188 3.428，0.000 PR陽性　1.853±0.175陰性　1.872±0.186 1.382，0.083 2.012±0.153 1.997±0.168 1.503，0.071

本研究對MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常組織、乳腺良性瘤及乳腺癌組織中的表達趨勢進行初步測定，并分析其表達水平與乳腺癌病理特征的相關性，以初步探索兩指標在乳腺癌發生發展過程中的臨床意義。研究結果顯示，MAGE-A9在正常組織中無表達，在乳腺癌組織的陽性表達率和表達水平明顯高于良性瘤組織，分別為54.5％和15.2％; MAGE-A11在正常組織及良性瘤組織中均無表達，乳腺癌中的陽性表達率達78.8％。受研究方法和評價標準的影響，該結果與其他研究有些許出入，如侯淑蕓等［4］以PCR手段測得乳腺癌患者MAGE-A9 和MAGE-A11陽性表達率分別為45％和66.7％，連易水等［8］以免疫組織化學方法測得乳腺癌患者的MAGE-A11陽性表達率為51.7％。但各研究結果均顯示癌旁正常組織MAGE-A9和MAGE-A11表達陰性，與本研究結果具有高度一致性，同時也證明兩者與乳腺腫瘤性疾病的關系極為密切。

此外，本研究進一步分析MAGE-A9和MAGEA11表達水平與乳腺癌患者病理特征的關系，結果顯示MAGE-A9表達受組織學分級、ER、HER-2的影響，組織學Ⅲ級患者明顯高于Ⅰ、Ⅱ級，ER、HER-2陽性高于陰性; MAGE-A11表達僅受到ER、HER-2的影響，ER、HER-2陽性高于陰性。實質上，既往學者對乳腺癌患者的組織學分級、ER、HER-2表達特點及其重要意義均做過研究。組織學分級主要反映癌組織的惡性程度，是預測乳腺癌預后的重要指標，長期實踐證明，乳腺癌的組織學分級越高，惡性程度越高、細胞增殖能力越強，預后越差［9］。激素受體表達情況也是乳腺癌患者臨床診治和預后評估的重要指標，研究表明［10］，ER和PR均參與了乳腺癌的發生和發展，可作為乳腺癌臨床內分泌治療方案的參考依據，亦可作為典型預后標志物。同時，Xia等指出［11］，HER-2高表達是乳腺癌預后不良的一個獨立的預后因素。國內學者王寧等［12］針對ER陽性乳腺癌患者的HER-2表達情況與組織病理學分級做了相關性考察，結果證實HER-2陽性表達患者的組織學分級明顯高于陰性。本研究結果中MAGEA9、MAGE-A11表達水平與PR表達情況均未表現出相關性，而與ER、HER-2表達情況相關，故而筆者推測MAGE-A9和MAGE-A11可能重點參與ER依賴性乳腺癌的細胞增殖，而受PR影響不大;然而，本實驗病例數較少，該結論尚需進一步驗證。

總而言之，MAGE-A9和MAGE-A11與乳腺癌患者病理特征的關系說明兩者均可為乳腺癌提供新的治療方案，并有望成為其臨床診斷和預后評估的輔助指標。

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(學術編輯:何朗)

Expression and significance of the tumor antigen MAGE-A9 and MAGEA11 in breast cancer

LI Jun-jun，HE Yan，HU Xiao-bo，OUYANG Li-zhi

(Department of Pathology，Hunan Cancer Hospital，Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine，Central South University，Changsha 4100013，Hunan，China)

【Abstract】Objective: To analyze the expression difference of melanoma associated antigen subtypes MAGE-A9 and MAGEA11 in breast normal tissue，breast benign tumor and breast cancer，so as to search new targets for the clinical diagnosis and treatment of breast cancer.Methods:33 patients with breast normal tissue and 33 patients with breast cancer accepted in our hospital and treated with surgery were selected，and both the pathological tissue and the healthy tissue around were prepared paraffin slice.The MAGE-A9 and MAGE-A11 expression level were detected by immunohistochemical experiment，which relationship to pathological features were analyzed.Results: The MAGE-A9 had no expression in healthy tissue，and its expression rate in breast benign tumor and breast cancer accounted for 15.2％ and 54.5％，which has statistical differences (P＜0.05).The MAGE-A11 had no expression in both healthy tissue and breast benign tumor，and its expression rate in breast cancer accounted for 78.8％.The MAGE-A9 expression was affected by histological grade and ER/HER-2，and those in GradeⅢand ER/HER-2 positive were higher that the others (P＜0.05).The MAGE-A11 expression was affected by ER/HER-2 only，and those in ER/HER-2 positive were higher than negative，the difference was statistically significant (P＜0.05).MAGE-A9 and MAGE-A11 is expected to become the new targets for clinical diagnosis of breast cancer and tumor immunotherapy.Linear regression analysis results showed that the MAGE-A9 and MAGE-A11 expression level had positive linear correlation (y =0.798 1x +1.278; R2= 0.694 8).Conclusion: MAGE-A9 and MAGE-A11 is expected to become the new targets forbook=382,ebook=115clinical diagnosis and tumor immunotherapy of breast cancer.

【Key words】MAGE-A9; MAGE-A11; Breast cancer

作者簡介:李俊軍(1973-)，男，湖南嘉禾人，副主任醫師，主要從事乳腺腫瘤方面的研究。E-mail:494427973@qq.com

收稿日期:2015-01-26

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.03.27

【文章編號】1005-3697(2015)03-0381-05

【中圖分類號】R737.9; R36

【文獻標志碼】A

網絡出版時間: 2015-6-19 17∶39網絡出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150619.1739.025.html