T－SPOT.TB法在肺結核分枝桿菌檢測中的應用

T-SPOT.TB法在肺結核分枝桿菌檢測中的應用

白國峰

(沈陽市第十人民醫院，沈陽110044)

摘要：目的探討結核感染T細胞檢測(T-SPOT.TB)法在肺結核分枝桿菌檢測中的應用價值。方法回顧性分析臨床確診的75例肺結核患者的臨床資料。入院時取患者靜脈血，采用T-SPOT.TB法檢測結核分枝桿菌，并行結核菌素皮膚試驗(TST)。比較T-SPOT.TB法、TST法檢測結核分枝桿菌的敏感性、特異性，比較兩種方法檢測結核分枝桿菌的陽性率。結果T-SPOT.TB法檢測肺結核患者結核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為84.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法檢測肺結核患者結核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。采用T-SPOT.TB法、TST法檢測結核分枝桿菌的陽性率分別為93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法檢測的陽性率高于TST法(P<0.01)。結論 T-SPOT.TB法檢測肺結核分枝桿菌的敏感性、特異性均較高，檢出率高，是一種較可靠的肺結核分枝桿菌檢測方法。

關鍵詞：T-SPOT.TB法；結核，肺；結核分枝桿菌；酶聯免疫斑點檢測

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.030

中圖分類號：R521文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-04-27)

結核病是由結核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，快速準確地診斷結核分枝桿菌感染對于治療結核病具有重要作用[1]。結核菌素皮膚試驗(TST)是目前診斷結核分枝桿菌感染常用的方法，它是以機體對結核菌素純化蛋白衍生物(PPD)遲發型超敏反應為基礎進行皮試。PPD本身是一種蛋白混合物，因其同時可以與非致病性結核分枝桿菌及卡介苗結合，因此無法特異性檢測致病性結核分枝桿菌[2,3]。臨床上認為，TST對結核分枝桿菌的檢測結論可靠性尚欠佳。結核感染T細胞檢測(T-SPOT.TB)法是近年發明的一種新型診斷方法，以結核分枝桿菌基因RD1區域中編碼的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和培養濾液蛋白(CFP-10)的肽段庫作為特異性抗原，采用酶聯免疫斑點法(ELISPOT)檢查進行檢查，大大提高了檢測敏感性[4～6]。2015年3月，我們回顧性分析了75例行T-SPOT.TB法檢測結核分枝桿菌的肺結核患者臨床資料，探討T-SPOT.TB法在結核分枝桿菌檢測中的臨床應用價值。

1資料與方法

1.1臨床資料回顧性分析2014年3月～2015年3月臨床確診的75例肺結核患者的臨床資料，根據臨床表現、痰抗酸桿菌涂片檢查、結核分枝桿菌培養、胸部X線檢查、抗結核治療等確診，其中男43例、女32例，年齡(33.4±11.9)歲，病程0.5～2.0年。本研究經過本院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2T-SPOT.TB檢測方法按照T-SPOT.TB試劑盒操作規范進行。入院時，取患者的靜脈血4 mL，采用Ficoll分離法分離外周血單個核細胞，用細胞培養基AIM-V重懸細胞，調整至2.5×106/mL。在已包被抗IFN-γ抗體的96孔板中，加入細胞培養基作為空白對照，以50 μL植物血凝素作為陽性對照，分別以結核分枝桿菌特異性ESAT-6和CFP-10肽段庫(終濃度10 μg/mL)作為刺激原。孵化后用PBS洗滌4次，ELISPOT計數儀進行斑點閱讀與統計。以ESAT-6或CFP-10任一檢測孔達到以下標準判定為陽性：如果空白對照孔斑點數<5個，以檢測孔斑點數減去空白對照孔斑點數≥6為陽性；如果空白對照孔斑點數≥6個，以檢測孔斑點數>2倍的空白對照孔斑點數為陽性。

1.3TST檢測方法入院時，于患者前臂皮內注射PPD 0.1 mL，72 h后由2位醫生共同查驗結果及卡痕。以硬結直徑<5 mm為陰性，硬結直徑≥10 mm為陽性。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1檢測效能 T-SPOT.TB法對檢測肺結核患者結核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為85.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法檢測肺結核患者結核分枝桿菌的敏感性、特異性分別為79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。T-SPOT.TB檢測結核分枝桿菌的敏感性高于TST法(P<0.01)。

2.2陽性率75例肺結核患者采用T-SPOT.TB法、TST法檢測結核分枝桿菌的陽性率分別為93.3%(70/75)、86.7%(65/75)，T-SPOT.TB法檢測的陽性率高于TST法(P<0.01)。

3討論

結核分枝桿菌可侵及全身各個器官，最常見的致病部位為肺臟，占所有器官結核病的90%[7]。TST是目前診斷結核分枝桿菌感染的常用方法，但由于PPD是一種蛋白混合物，同時可以與非致病性結核分枝桿菌及卡介苗結合，因此無法特異性地檢測致病性結核分枝桿菌[8]，使得TST檢測結核分枝桿菌的結論可靠性欠佳。目前常用的結核分枝桿菌檢測方法還有抗酸性染色法及分支桿菌培養法[9]，但抗酸性染色法的敏感性僅有50%～60%，而分枝桿菌培養法則需要2周以上才能得到培養結果。尋找檢測速度快、敏感性及特異性高的結核分枝桿菌檢測方法是影響結核病診斷與治療的重要方面。

研究發現，卡介苗與結核分枝桿菌基因存在16個丟失區，分別為RD1～RD16，其中RD1中的9個基因編碼區(Rv3871-Rv3879c)僅存在于致病性的結核分枝桿菌中，而卡介苗中該編碼區出現缺失。該特異性編碼區即被作為特異性檢測致病性結核分枝桿菌的靶點[10～12]。此外，在人體初次感染結核分枝桿菌后，外周血中的T細胞會發生致敏轉化，形成記憶性T淋巴細胞，當再次接觸結核分枝桿菌時，記憶性T淋巴細胞能夠迅速活化增殖，從而引起γ干擾素的釋放。T-SPOT.TB法即是基于以上原理，以ESAT-6(Rv3875)和CFP-10 (Rv3874)肽段庫作為刺激原，通過特異性與結核分枝桿菌結合，檢測外周血中具有促進γ干擾素釋放的T淋巴細胞，從而特異性地檢測結核分枝桿菌[13～15]。T-SPOT.TB法采用ELISPOT檢測，可在細胞分泌的細胞因子擴散前，捕獲到細胞周圍分泌的細胞因子，使檢測更加靈敏，其靈敏性超過傳統的ELISA實驗。T-SPOT.TB檢測適用于所有具有結核潛伏感染風險或懷疑結核病的人群，且不受年齡、性別、種族、治療藥物、免疫狀況等的影響。本研究發現，T-SPOT.TB法對肺結核患者結核分枝桿菌檢測的敏感性、特異性分別為85.3%、81.2%，高于TST法的檢測效能，對結核分枝桿菌也具有更高的檢測陽性率，提示T-SPOT.TB法檢測肺結核分枝桿菌的敏感性和特異性均較高，檢出率高，是一種較可靠的肺結核分枝桿菌檢測方法。

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