祛風清熱定痛方對偏頭痛大鼠鎮痛效應及內皮素1及5-羥色胺含量的影響 ※

祛風清熱定痛方對偏頭痛大鼠鎮痛效應及內皮素1及5-羥色胺含量的影響※

李瑞杰冀緒白杏強1張曉雙2司寧寧3

(河北省新樂市中醫院中風病科，河北新樂050700)

【摘要】目的觀察祛風清熱定痛方對偏頭痛大鼠的鎮痛效應及可能機制。方法將72只SD大鼠隨機分為6組，即空白組、模型組、正天丸組和祛風清熱定痛方大、中、小劑量組，每組各12只，分別予相應藥液灌胃給藥，連續7 d。除空白組外，其余5組大鼠通過熱板法測定痛閾值，然后以硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型，放免法檢測各組大鼠血漿中內皮素1(ET-1)、5-羥色胺(5-HT)含量。結果與模型組同期比較，祛風清熱定痛方大、中劑量組60、120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)，祛風清熱定痛方小劑量組、正天丸組120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)。與模型組比較，祛風清熱定痛方大、中、小劑量組及正天丸組ET-1含量均明顯降低，5-HT含量均明顯增加，比較差異有統計學意義(P<0.05)。與正天丸組比較，祛風清熱定痛方大、中劑量組ET-1含量明顯降低，5-HT含量明顯增加,差異有統計學意義(P<0.05)，小劑量組ET-1和5-HT含量無統計學意義(P>0.05)。與祛風清熱定痛方大劑量組相比，祛風清熱定痛方中劑量組ET-1和5-HT含量比較差異有統計學意義(P<0.05)，小劑量組無統計學意義(P>0.05)。結論祛風清熱定痛方具有明顯的鎮痛作用，其調節偏頭痛模型大鼠血漿5-HT、ET-1含量可能是治療偏頭痛的機制之一。

【關鍵詞】偏頭痛；祛風；清熱；鎮痛；中醫藥療法；止痛劑(中藥)；放射免疫測定； 內皮縮血管肽類 ；血清素；疾病模型, 動物

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2015.08.022

【中圖分類號】R-332; R287;R747.205.31 ；R349.21

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-2619(2015)08-1183-04

作者簡介：李瑞杰(1979—)，男，主治中醫師，碩士。研究方向：腦血管病的臨床及實驗研究、重癥醫學工作。

Abstract【】ObjectiveTo observe the therapeutic effects of Qufeng-qingre-dingtong decoction in migraine rats and its possible mechanism.Methods72 SD rats were randomly divided into six groups, that the blank group, model group, Zhengtian pill group, and high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group.Twelve SD rats in each groups, and all rats received corresponding drug for 7 d by gavage.Besides blank group, rats in other five groups were constructed in migraine model by nitroglycerin after the pain-threshold measured by hot plate test.The contents of serum endothelin-1 (ET-1) and 5-hydroxytryptamine (5-HT) were detected by radioimmunoassay.ResultsCompared with model group over the same period, the pain-threshold in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group were obviously increased at 60, 120, 180 min (P<0.05), the pain-threshold in low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group were obviously increased at 120, 180 min (P<0.05).Compared with model group, the content of ET-1 was obviously decreased in high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group, the differences were statistical significance (P<0.05).Compared with Zhengtian pill group, the content of ET-1 were obviously decreased in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, and the content of 5-HT was obviously increased, the differences were statistical significance (P<0.05).There was no statistical significance on ET-1 and 5-HT between Zhengtian pill group and low dose group (P>0.05).Compared with high dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, there was statistical significance on ET-1 and 5-HT in middle dose group (P<0.05), and there was no statistical significance in low dose group (P>0.05).ConclusionQufeng-qingre-dingtong decoction has significant analgesic effect, can regulate the contents of serum 5-HT, ET-1 in migraine rats, it could be the one of the analgesia mechanism.

收稿日期：(2014-03-09)

※ 項目來源：河北省中醫藥管理局2011年度中醫藥類科研計劃課題(編號：2011141)

1河北省新樂市長壽街道辦事處社區衛生服務中心，河北新樂050700

2陜西中醫藥大學藥學院中藥教研室，陜西咸陽712046

3河北省灤平縣中醫院內甘肅天水市中醫醫院成甘肅中醫藥大學附院科，河北灤平068250

Observation of Qufeng-qingre-dingtong decoction on Analgesia effects and the content of ET-1, 5-HT in migraine ratsLIRuijie*,JIXu,BAIXingqiang,etal.*DepartmentofStroke,XinleCityHospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Xinle050700

【Key words】Migraine; Expelling wind; Clearing heat; Analgesia; Traditional Chinese Medicine; Paregoric (Chinese herbs); Radioimmunoassay; Endothelin; Serotonin; Disease models；Animal

偏頭痛是一種具有遺傳性及復發性的頭痛綜合征，其發病機制至今無統一理論解釋，目前多認為其發作與神經血管痛覺傳導通路的活化及神經遞質表達密切相關。偏頭痛發作過程中始終存在單胺類神經遞質如5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)及血管活性物質如內皮素(ET)、降鈣素相關基因肽(CRRP)等含量異常[1]。祛風清熱定痛方是我院臨床治療偏頭痛的經驗方，臨床療效確切[2-3]。為進一步明確其作用機制，我們通過實驗研究觀察祛風清熱定痛方對大鼠的鎮痛效應及對硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿中ET-1、5-HT含量的影響，探討其治療偏頭痛作用機制。

1材料與方法

1.1材料

1.1．1實驗動物SD大鼠72只，SPF級，雌雄各半，體質量(280±20)g，由第四軍醫大學動物實驗中心提供，動物合格證號SCXK(軍)2009-005。

1.1.2藥材及試劑祛風清熱定痛方(藥物組成：川芎20 g，白芍藥10 g，柴胡10 g，香附10 g，白芷12 g，地龍10 g，藁本9 g，薄荷 6 g, 黃芩10 g,羌活8 g，甘草6 g)水煎液，由陜西中醫藥大學中藥藥理研究室制備。正天丸(華潤三九醫藥股份有限公司，國藥準字Z44020711，6 g/袋)，硝酸甘油注射液(四環藥業股份有限公司，國藥準字H20057880，5 mg/mL)。ET- 1(HY-10047)、5-HT(HY-10164)放免試劑盒 (北京科美東雅生物技術有限公司)。

1.1.3主要儀器冷熱板痛覺測痛儀(上海玉研科學儀器有限公司)，放免儀(XH6080型，西安核儀器廠)、電子天平(EX-200013，上海第一儀器廠)，溫度計、秒表、手術器械、低溫離心機、移液槍等實驗器械，由陜西中醫藥大學藥理實驗室提供。

1.2實驗方法

1.2.1動物分組將72只SD大鼠適應性飼養1周后隨機分為6組，即空白組、模型組、正天丸組和祛風清熱定痛方大、中、小劑量組，每組各12只。各組互相隔離飼養，實驗室室內溫度維持在 17～24 ℃，12 h為1個光照周期，喂養顆粒型普通大鼠飼料，自來水為大鼠飲用水。

1.2.2給藥方法正天丸按臨床用藥劑量用蒸餾水配制成1.24 g/kg懸濁液，祛風清熱定痛方按人體等效量用蒸餾水配制成大劑量(0.6 g/kg)、中劑量(0.3 g/kg)、小劑量(0.15 g/kg)懸濁液置冰箱冷藏備用。空白組及模型組大鼠予1 mL/100 g 0.9%氯化鈉注射液灌胃，正天丸組和祛風清熱定痛方大、中、小劑量組予等容積相應藥液灌胃給藥，均每日1次，連續7 d。

1.2.3觀察指標及方法

1.2.3.1痛閾值測定除空白組外，其余5組大鼠首先進行基礎痛閾值(0 min)測定，末次給藥后30、 60、120及180 min分別檢測大鼠痛閾值。方法：分別將各組大鼠放在(55±5) ℃冷熱板痛覺測痛儀上，即開始計時，待大鼠出現添后足則停止計時，這段時間為大鼠痛閾值。如出現跳躍、快速走動等逃避反應則淘汰此大鼠。60 s規定為痛閾最高值,如果超過60 s，痛閾值則記為60 s。

1.2.3.2ET- 1、5-HT測定痛閾值測定實驗結束后，除空白對照組外，其余5組大鼠分別予硝酸甘油注射液10 mg/kg腹部皮下注射，復制偏頭痛模型，以大鼠出現煩躁、撓頭、臉紅、拍臉、爬籠次數增多為造模成功。空白組予等容量0.9%氯化鈉注射液腹部皮下注射。模型制備成功4 h后，6組大鼠以10%烏拉坦1 mL/100 g腹腔麻醉，頸總動脈插管取血2 mL，迅速注入抗凝管中，混勻，4 ℃，3 000 r/min離心10 min，分離血漿，置-20 ℃冰箱備用。放射免疫分析法測定ET-1、5-HT含量，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3統計學方法應用 SPSS 17.0 統計軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，組間比較差采用單因素方差分析，采用t檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2結果

2.15組大鼠不同時段痛閾值比較見表1。

表1　5組大鼠不同時段痛閾值比較　s， ± s

表1　5組大鼠不同時段痛閾值比較　s， ± s

組 別n0min30min60min120min180min模型組1219.31±5.3819.41±5.4819.51±5.1119.61±6.2919.21±5.44正天丸組1219.31±5.4122.3±5.0125.01±7.1227.01±5.95*24.75±6.52*祛風清熱定痛方大劑量組1221.44±4.5423.01±4.6125.11±5.73*28.31±6.91*25.32±5.05*祛風清熱定痛方中劑量組1219.51±6.1523.21±5.5126.61±7.51*31.12±6.52*26.21±7.64*祛風清熱定痛方小劑量組1219.51土6.6021.42±7.0623.62±7.5627.01±5.31*24.32±8.24*

與模型組同期比較，*P<0.05

由表1可見，5組大鼠基礎痛閾值無明顯差異(P>0.05)。與模型組同期比較，祛風清熱定痛方大、中劑量組60、120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)，祛風清熱定痛方小劑量組、正天丸組120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)。

2.26組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較見表2。

表2　6組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較　pg/mL， ± s

表2　6組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較　pg/mL， ± s

組 別n劑量(g/kg)ET-15-HT空白組12—107.54±5.065008.84±948.89模型組12—143.46±5.52*2513.45±450.65*正天丸組121.24117.25±12.09△3036.66±655.63△祛風清熱定痛方大劑量組120.6117.20±13.63△#3266.98±805.40△#祛風清熱定痛方中劑量組120.3121.56±14.01△#○3101.13±361.92△#○祛風清熱定痛方小劑量組120.15119.53±13.29△2927.94±715.70△

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與正天丸組比較，#P<0.05 ；與祛風清熱定痛方大劑量組比較，○P<0.05

由表2可見，與空白組比較，模型組血漿ET-1含量增高，5-HT含量降低(P<0.05)，提示造模成功。與模型組比較，祛風清熱定痛方大、中、小劑量組及正天丸組ET-1含量均明顯降低，5-HT含量均明顯增加，比較差異有統計學意義(P<0.05)。與正天丸組比較，祛風清熱定痛方大、中劑量組ET-1含量明顯降低，5-HT含量明顯增加,差異有統計學意義(P<0.05)，小劑量組ET-1和5-HT含量無統計學意義(P>0.05)。與祛風清熱定痛方大劑量組相比，祛風清熱定痛方中劑量組ET-1和5-HT含量比較差異有統計學意義(P<0.05)，小劑量組無統計學意義(P>0.05)。

3討論

疼痛可由多種原因導致，對于藥物鎮痛研究分物理刺激法和化學刺激法。熱板反應為高級中樞參與的物理刺激反應，可反應中樞鎮痛作用，故本研究選用熱板法研究祛風清熱定痛方的鎮痛作用。由于硝酸甘油誘發偏頭痛動物模型造模簡單、易成功、動物易于獲得，且硝酸甘油能導致明顯的中樞和周圍血管擴張，從而產生搏動性頭痛的相似性，因此實驗選擇皮下注射硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型。

ET是由21個氨基酸組成的生物活性多肽，是至今發現體內最強的血管收縮因子。腦血管是ET-1較敏感的效應器官之一，ET-1可導致腦血管強烈而持久的收縮[4]，導致偏頭痛發作[5]。既往研究發現，偏頭痛患者血漿、腦脊液中ET含量較正常明顯增高，說明血漿ET水平的升高和持續異常共同構成了偏頭痛的病理生理學基礎[6]。5-HT是偏頭痛發作中重要的神經遞質，在偏頭痛發生過程中通過誘導或激活血管內皮細胞及各種酶類，加速一氧化氮(NO)、ET合成或釋放的同時，自身亦降解，而致血管擴張產生頭痛癥狀[7]，5-HT代謝紊亂是偏頭痛發病的核心[8]。因此，ET-1和5-HT是觀察藥物治療偏頭痛的重要治療靶目標。

偏頭痛屬中醫學中頭痛范疇，其病位在頭，與肝、腎、脾密切相關，風、火、痰、瘀、虛為主要致病因素。其中風邪為首要致病因素，諸邪皆可化熱，熱極又可生風，風熱上擾清竅，致氣血逆亂，腦脈痹阻，不通則痛。據此，我們認為偏頭痛的病機特點多為風熱上擾，腦脈痹阻。治宜清熱祛風，活血止痛，擬祛風清熱定痛方治療。現代藥理研究證實，方中川芎嗪通過抑制組胺、5-HT的合成及釋放起到抗炎、止痛作用[9]；白芍藥具有鎮痛、鎮靜、抗炎等作用[10]；香附具有解熱、鎮痛等作用[11]；白芷鎮痛效果顯著，尤其在血管神經性頭痛中被廣泛應用[12]；地龍有解熱、鎮靜、鎮痛、降壓等作用[13]。對照藥物正天丸具有疏風活血、養血平肝、通絡止痛的功效，在臨床上廣泛用于外感風邪、瘀血阻絡、血虛失養、肝陽上亢引起的偏頭痛、緊張性頭痛、神經性頭痛、頸椎病型頭痛、經前頭痛，故選為對照藥物。

本研究結果顯示，祛風清熱定痛方大、中、小劑量組和正天丸組均有鎮痛作用，以祛風清熱定痛方大、中劑量組鎮痛作用最強，優于正天丸組，提示祛風清熱定痛方具有一定的中樞鎮痛作用。模型組大鼠應用硝酸甘油誘導使5-HT明顯下降，ET-1增高，提示血漿中神經遞質和血管收縮因子含量紊亂，產生偏頭痛癥狀。給藥后，該方各劑量組均能降低血漿中ET-1含量，增加5-HT含量，以大、中劑量組作用最強，且優于正天丸組，提示祛風清熱定痛方具有調節血漿ET-1、5-HT含量的作用，這可能是該方治療偏頭痛的作用機制，值得進一步研究。

參考文獻

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(本文編輯：曹志娟)

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首屆“互聯網+”中醫藥創新論壇7月5日在京召開。來自互聯網界、中醫藥界與投資界的權威人士共同探究互聯網給中醫藥帶來的機遇與挑戰。國家中醫藥管理局副局長、中華中醫藥學會副會長馬建中表示，要充分發揮“互聯網+”的優勢，進一步加強國家層面和相關領域中醫藥二級信息平臺的建設，通過云計算、物聯網、大數據等信息化技術，使中醫藥信息化建設發展覆蓋全國中醫醫療、教學、科研機構及中醫藥企業要充分發揮“互聯網+”的優勢，推動中醫藥文化傳播，努力構造新的中醫藥文化現代傳播體系，豐富傳播手段，創新傳播方式，建立多樣化的中醫藥文化傳播平臺，推動中醫藥文化建設形成新載體，加速中醫藥文化的國內、國際傳播。通過互聯網醫療，可提高中醫藥健康服務水平，做到“未病先防”，方便患者及時治療，進而在醫生指導下，制定有中醫特色的、量身定做的調護方案，真正做到“病后防復”，也對提升基層中醫藥服務能力和水平有重要意義。

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