新型含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物的合成及其抗腫瘤活性*

張　磊，王　京，林　婭，朱心玲，姚其正(.遵義醫學院藥學院，貴州遵義　563003; .中國藥科大學藥學院，江蘇南京　0009)

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新型含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物的合成及其抗腫瘤活性*

張磊1，王京1，林婭1，朱心玲1，姚其正2
(1.遵義醫學院藥學院，貴州遵義563003; 2.中國藥科大學藥學院，江蘇南京210009)

摘要:以4-甲氧基苯乙酮為原料，設計并合成了5個新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e)，其結構經1H NMR，13C NMR，IR和ESI-MS表征。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細胞HepG2增殖的體外活性。結果表明:3-乙酰基-2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)具有較好的抑制活性，其IC50為28.04 μM，優于5-氟脲嘧啶(37.57 μM)。

關鍵詞:1，3，4-噁二唑啉;吡唑;合成;抗腫瘤活性

mail:lei_chang@ yeah.net

近年來，吡唑類氮雜環化合物因其良好的生物活性而逐漸成為抗腫瘤新藥的研究熱點。Vujasinovic等［1－3］報道了以吡唑結構為母核的3-苯基-1-芳香甲基吡唑類化合物具有較強的抗腫瘤活性，其抗腫瘤機制主要在于促進腫瘤細胞凋亡或自噬。

1，3，4-噁二唑啉是一類重要的氮雜環化合物，其廣泛的生物活性如:抗腫瘤、抗真菌和抑制單胺氧化酶等［4－6］。據Wong等［7－8］報道，含有1，3，4-噁二唑啉母核的化合物A-105972是通過對乳腺癌、肝癌、肺癌和前列腺腫癌等多種癌細胞有較好的抑制活性。

Scheme 1

本課題組通過綴合3-苯基-1-芳香甲基吡唑與1，3，4-噁二唑兩種抗腫瘤藥效團，合成了一系列新型的含1，3，4-噁二唑的吡唑類化合物［4］。在此基礎上，本文以4-甲氧基苯乙酮(1)為原料，設計并合成了5個新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e，Scheme 1)，其結構經1H NMR，13C NMR，IR和ESI-MS表征。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細胞HepG2增殖的體外活性。

1　實驗部分

1.1儀器與試劑

Mel-TEMP型熔點儀(溫度未校正); Bruke Avance-300 MHz型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內標);Nicolet Impact-410型紅外光譜儀(KBr壓片);Agilent 1100 LC/DAD/MSD型質譜儀。

3-(4-甲氧基苯基)-1H-5-吡唑甲酸乙酯(2)［9］，1-芳甲基-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-甲酸乙酯(3)［10］和1-芳甲基-3-(4-甲氧基苯基)吡唑-5-甲酰肼(4)［11］按文獻方法合成;其余所用試劑均為分析純。

1.2 6a～6e的合成(以6a為例)

在反應瓶中依次加入乙醇5 mL，4 322 mg(1 mmol)，3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲醛(5a)182 mg(1 mmol)和冰醋酸2滴，氮氣保護下回流反應6 h(TLC檢測)。冷卻至室溫，抽濾，濾餅用冰乙醇(3×1 mL)洗滌，干燥得固體A。

在反應瓶中加入固體A和醋酸酐5 mL，氮氣保護下回流反應3 h～4 h(TLC檢測)。冷卻至室溫，倒入冰水中，劇烈攪拌至油狀物固化，過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥后經硅膠柱層析［洗脫劑:V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)=1∶8］純化得3-乙酰基-2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)。

用類似的方法合成6b～6e。

6a:淡黃色固體，收率66%，m.p.141℃～143℃;1H NMR δ:2.25(s，3H，COCH3)，2.29(s，3H，COCH3)，3.72(s，3H，OCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，5.77～5.79(dd，J=21.5 Hz，2H，CH2in Bn)，6.79(s，2H，ArH)，6.96(d，J=8.7 Hz，2H，ArH)，7.11(s，1H)，7.23～7.36(m，6H，ArH)，7.80(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:20.57，21.78，55.03，55.56，56.53，91.94，103.69，106.60，114.59，124.92，127.16，127.57，128.01，128.76，128.97，129.49，134.99，137.57，147.71，150.67，152.51，159.77，167.68，168.49; IR ν:3 451，3 126，2 922，2 850，1 767，1 671，1 609，1 469，1 436，1 402，1 364，1 291，1 251，1 201，1 173，1 129，1 055，953 cm－1; ESI-MS m/z:571.2{［M + H］+}。

6b:白色固體，收率70%，m.p.128℃～131 ℃;1H NMR δ:2.22(s，3H，COCH3)，2.27(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，COCH3)，5.71～5.83(dd，J=22.1 Hz，2H，CH2in Bn)，6.95(d，J=8.7 Hz，2H，ArH)，7.17～7.37(m，9H，ArH)，7.43(d，J=8.4 Hz，2H，ArH)，7.80(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.27，21.71，55.06，55.57，91.35，106.58，114.59，122.81，124.90，127.15，127.62，128.05，128.46，128.70，129.03，134.17，137.57，147.74，150.64，152.05，159.76，167.41，169.60; IR ν:3 492，3 061，3 026，2 923，2 853，1 759，1 669，1 611，1 512，1 470，1 437，1 400，1 368，1 302，1 249，1 220，1 167，1 052，1 027，913 cm－1; ESI-MS m/z:511.2{［M +H］+}。

6c:白色固體，收率69%，m.p.149℃～151 ℃;1H NMR δ:2.23(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.76(s，2H，CH2in Bn)，6.95(d，J=8.6 Hz，2H，ArH)，7.21～7.36(m，7H，ArH)，7.42～7.51(m，2H，ArH)，7.74(s，1H，ArH)，7.80(d，J=8.6 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.61，55.10，55.61，89.90，106.53，114.62，124.88，127.17，127.56，128.03，128.46，128.54，128.97，130.28，131.59，132.06，133.69，136.15，137.51，147.55，150.66，159.81，167.50; IR ν:3 421，3 125，3 089，3 072，3 031，3 003，2 938，2 837，2 360，2 342，1 665，1 610，1 589，1 419，1 435，1 404，1 351，1 299，1 245，1 175，1 103，1 047，1 030，976 cm－1; ESI-MS m/z:521.1{［M + H］+}。

6d:淡黃色固體，收率66%，m.p.158℃～159℃;1H NMR δ:2.22(s，3H，COCH3)，2.27(s，3H，COCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.70～5.83(dd，J=24.0 Hz，2H，CH2in Bn)，6.96(d，J=8.5 Hz，2H，ArH)，7.17～7.49(m，11H，ArH)，7.80(d，J=8.5 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:21.28，21.72，55.05，55.57，91.23，106.59，114.59，120.45，124.12，124.53，124.88，127.16，127.62，128.04，128.66，129.01，130.49，137.54，138.25，147.75，150.65，151.15，159.77，167.57，169.57; IR ν:3 421，3 132，2 923，2 825，2 359，1 760，1 661，1 613，1 471，1 446，1 412，1 365，1 302，1 248，1 212，1 178，1 052，1 026，942 cm－1; ESI-MS m/z:511.3{［M + H］+}。

6e:黃白色固體，收率74%，m.p.145℃～147℃;1H NMR δ:2.24(s，3H，COCH3)，2.26(s，3H，COCH3)，3.75(s，3H，OCH3)，3.77(s，3H，OCH3)，5.71～5.83(dd，J=21.6 Hz，2H，CH2in Bn)，6.94～6.98(m，3H，ArH)，7.12～7.37(m，9H，ArH)，7.81(d，J=8.7 Hz，2H，ArH);13C NMR δ:20.80，21.72，55.05，55.55，56.32，91.56，106.58，111.63，114.58，119.07，123.81，124.91，127.16，127.59，128.03，128.72，129.00，135.44，137.56， 140.89，147.72，150.66，151.52，159.77，167.52，168.93; IR ν:3 474，3 132，2 923，2 852，2 359，1 772，1 658，1 608，1 509，1 478，1 449，1 405，1 363，1 259，1 196，1 177，1 142，1 050，1 033，900 cm－1; ESI-MS m/z:541.3{［M + H］+}。

1.3抗腫瘤活性

以5-FU和紫杉醇為陽性藥［4］，用MTT法測定6a～6e對人肝癌細胞HepG2的體外抗增殖活性。HepG2經消化和計數、配制為c=3.5×104個· mL－1的細胞懸液，接種于96孔細胞培養板，每孔100 μL;于37℃，5%CO2培養箱中培養24 h。用完全培養基稀釋藥物至所需c，每孔加入100 μL含藥培養基;相同條件下培養72 h。將96孔板用MTT染色(5 mg·mL－1，每孔20 μL)，繼續培養4 h。棄去培養基，每孔加入DMSO 150 μL，輕搖10 min后測定490 nm處各孔OD值，并計算半數抑制濃度(IC50)。

2　結果與討論

2.1表征

(1)1H NMR

由6a～6e的1H NMR分析可見，δ 2.23處單峰為甲酰胺中甲基的特征吸收峰，δ 5.78處雙二重峰為N1-位上取代芐基中亞甲基的特征吸收峰。

(2)IR

由6a～6e的IR分析可見，3 100 cm－1附近的弱特征峰為苯環C－H鍵的伸縮振動吸收峰，1 609 cm－1處的強特征峰為C=N伸縮振動吸收峰，3 450 cm－1處的弱特征峰和1 671 cm－1處的強特征峰為酯C=O鍵的伸縮振動吸收峰，1 767 cm－1處的強特征峰為酰胺C=O鍵的伸縮振動吸收峰。

2.2抗腫瘤活性

6a～6g的抗腫瘤活性見表1。由表1可見，6a～6e對HepG2均有一定抑制活性。其中，6a的抑制活性最強，其IC50為28.04 μM，優于陽性對照藥5-FU(37.57 μM)。初步的構效分析表明:在6a～6e的結構中，與噁二唑啉直接相連的苯環上連有供電子基團時，抗腫瘤活性較強，供電子基團數越多，活性越強，如6a和6d;但當2，4-位取代基為吸電子基Cl時，6c活性反而優于4-

表1　6a～6e對HepG2的抑制活性Table 1　The inhibition activities of 6a～6e against HepG2

圖1　不同c(6a)抑制HepG2增殖的倒置相差顯微鏡圖片Figure 1　Morphology images of different concentration of c(6a)inhibited the proliferation of HepG2

位取代基為甲氧基的6b。

圖1為c(6a)抑制HepG2增殖的倒置相差顯微鏡圖片。由圖1可見，空白組細胞數量較多，輪廓清晰且活力旺盛;實驗組細胞數量隨c(6a)增大而顯著減少，且細胞形態發生明顯皺縮或變圓等改變。

3　結論

依據藥效基團拼合原理，設計并合成了5個新型的含1，3，4-噁二唑啉的吡唑類化合物(6a～6e)。用MTT法測定了6a～6e抑制人肝癌細胞HepG2增殖的體外活性。結果表明:3-乙酰基-2-(4-乙酰氧基-3，5-二甲氧基苯基)-5-［3-(4-甲氧基苯基)-1-苯甲基-吡唑-5-基］噁二唑啉(6a)具有較好的抑制活性，其IC50為28.04 μM，優于陽性對照藥5-FU，具有進一步研究的價值。

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Synthesis and Anti-tumor Activities of
Novel Pyrazole Derivatives Containing 1，3，4-Oxadiazoline

ZHANG Lei1，WANG Jing1，LIN Ya1，ZHU Xin-ling1，YAO Qi-zheng2
(1.School of Pharmacy，Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China;
2.School of Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)

Abstract:Five novel pyrazole derivatives containing 1，3，4-oxadiazoline(6a～6e)were designed and synthesized from 4-methoxyacetophenone.The structures were characterized by1H NMR，13C NMR，IR and ESI-MS.The in vitro anti-tumor activities of 6a～6e were tested by MTT method.The results showed that 3-acetyl-2-(4-acetoxy-3，5-dimethoxyphenyl)-5-［3-(4-methoxyphenyl)-1-benzyl-pyrazol-5-yl］-oxadiazoline(6a)exhibited better inhibition activity against HepG2 with IC50of 28.04 μM than 5-FU(37.57 μM).

Keywords:1，3，4-oxadiazoline; pyrazole; synthesis; anti-tumor activity

通訊作者:王京，講師，Tel.0851-28609461，E-mail:wangjing0642320@126.com;姚其正，教授，Tel.025-86634730，E-mail:qz_yao@163.com

作者簡介:張磊(1986－)，男，漢族，江蘇宿遷人，博士，副教授，主要從事新藥分子設計與合成的研究。Tel.0851-28609461，E-

基金項目:貴州省科技廳資助項目{黔科合LH字［2014］7565號，黔科合LH字［2014］7557號，黔科合人才團隊［2014］4002號}

收稿日期:2014-08-25;

修訂日期:2015-04-28

DOI:10.15952/j.cnki.cjsc.1005－1511.2015.06.0499 *

文獻標識碼:A

中圖分類號:O626.21