血紅素加氧酶-1基因多態性與急性心肌梗死的關系

血紅素加氧酶-1基因多態性與急性心肌梗死的關系

范廣慈崔國方秦琴李玉耕王剛

【摘要】目的 探討血紅素加氧酶-1基因多態性與急性心肌梗死發病風險之間的關系。方法 選取連續的80例急性ST段抬高性心肌梗死患者和85例健康體檢者（對照組），采用聚合酶鏈反應和凝膠電泳方法分析HO-1基因啟動子區域c的分布是否存在差異。結果 HO-1基因啟動子區域（GT）n重復序列存在差異；急性心肌梗死組和對照組L/L基因型（P=0.003）及L型等位基因（P=0.001）頻率分布差異具有統計學意義；多因素回歸分析顯示HO-1基因多態性、吸煙史、高血壓、糖尿病及總膽固醇水平是急性心肌梗死的預測因子。結論 血紅素加氧酶-1基因啟動子區域遺傳多態性與急性心肌梗死的發病、以及疾病進展密切相關。

【關鍵詞】急性心肌梗死；血紅素加氧酶-1；多態性

作者單位：266000 青島市海慈醫療集團心血管二科

急性心肌梗死是臨床常見的急重癥，是致殘與致死最主要也是最重要原因之一。急性心肌梗死的發病基礎為冠狀動脈粥樣硬化病變，是由多個基因位點和基因多態性控制。血紅素加氧酶（Heme oxgenase，HO）是將血紅素分解為膽綠素合成過程中的限速酶，在這過程中釋放出鐵（Fe2+）和一氧化碳（CO）。HO-1分布于動脈粥樣硬化斑塊，平滑肌細胞及血管內皮細胞中，在各種外界刺激下如氧化應激、炎癥會釋放增加。具有抗內皮細胞增值、抗炎、抗氧化和抗細胞凋亡的作用。HO-l基因的轉錄調控區位于啟動子的5’端，近年來對HO-1最關注的是（GT）n雙核苷酸鏈的多態性，提示（GT）n重復頻率越高HO-l基因的表達水平越低，因此，在外界因素刺激下，HO-1表達水平的不一致性可能是其在許多疾病發病中發揮作用的機制之一。

1　資料與方法

1.1研究對象

研究對象分成兩組：選取自2010年10月～2013年3月入我院接受急診PCI的STEMI患者80例，平均年齡（60.90±2.38）歲。入選標準：（1）出現癥狀12小時內（典型胸痛持續30分鐘）。（2）心電圖至少兩個相鄰導聯J點后60 ms的ST段抬高≥2 mm。排除標準：冠脈搭橋術后，合并嚴重的瓣膜病，左或右束支傳導阻滯，有慢性充血性心力衰竭病史，慢性腎臟疾病。 體檢健康者共85例（健康對照組），平均年齡（62.00±2.26）歲。

1.2方法

1.2.1DNA提取 抽取受試者外周靜脈血4 ml，應用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，加入裂解液進行裂解，然后提取DNA，在-20℃條件下，TE緩沖液溶解后保存。

1.2.2引物設計與合成 應用PCR方法對HO-1的GT重復序列進行擴增：

正義引物 5′-AGAGCCTGCAGCTTCTCAGA-3′

反義引物 5′-ACAAAGTCTGGCCATAGGAC-3′

反應條件94℃變性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，共完成30個循環。

1.2.3電泳 配制15 ml 8%非變性聚丙烯酰胺溶液，加樣PCR擴增產物，調整至適當電壓開始電泳，最后進行染色和基因型判定。

1.3統計學處理

采用SPSS 13.0統計軟件分析。計數資料選用χ2檢驗，計量資料進行t檢驗，方差分析及其兩兩比較采用q檢驗。各因素之間相關性應用多因素Logistic回歸分析。P＜0.05認為差異具有意義。

2　結果

2.1患者一般資料

兩組在年齡和性別無統計學差異。入選患者主要為男性，在冠狀動脈危險因素方面包括糖尿病，高血壓，年齡和吸煙，兩組比較無統計學差異。見表1。

2.2AMI組與健康對照組的HO-1比較

基因型頻率及等位基因頻率分布結果顯示，急性心肌梗死組（AMI）和對照組在L/L基因型頻率和 L 型等位基因頻率的分布，差異具有統計學意義（P=0.001），見表2。

2.3HO-1 基因多態性和急性心肌梗死之間的多因素Logistic回歸分析

將急性心肌梗死作為因變量，性別、吸煙史、冠心病的家族史、高血壓病、糖尿病、高脂血癥、TG、TC、和 HO-1 基因多態性作為自變量，進行多因素logistic 回歸分析，見表3。

表1　兩組患者一般情況［n，%］

表2　急性心肌梗死組與對照組 HO-1基因多態性分布

表3　多因素 Logistic 回歸分析結果

3　討論

急性心肌梗死是冠心病的急重癥之一，是導致臨床患者死亡的主要原因［1-2］。急性心肌梗死的發病機制十分復雜，近年來發現氧化應激、炎癥等因素在心肌梗死的發生、發展的生理機制中發揮著重要作用，血紅素加氧酶（heme oxygenase，HO）是一種參與血紅素代謝的限速酶，是作用于亞鐵血紅素代謝過程的一種包含多種功能的氧化酶，分布于人體的多個器官組織中，如肺臟、脾臟、肝臟、血管內膜和動脈粥樣硬化斑塊中［3］。HO-1有重要的抗炎抗氧化作用，研究顯示上調HO-1的表達水平，能明顯降低心肌梗死大鼠的梗死心肌面積［4］，動物研究表明GT 重復次數與HO-1的轉錄水平呈負相關，重復次數越少，HO-1的表達水平越高［5］，因此啟動子基因型分布頻率重復的次數與多種疾病的發病相關。

本研究發現，AMI組HO-1的基因型主要以L/L型和L/S型為主，對照組則以L/S型和SS型為主，統計結果表明兩組基因型頻率分布差異具有統計學意義（P＜0.05）；就等位基因頻率分布而言，急性心肌梗死組以L型為多見，而對照組以S型為主，兩組等位基因頻率分布具有統計學差異（P＜0.05），這進一步表明L型等位基因攜帶者罹患AMI的風險更高。另外，本研究在去除吸煙、高脂血癥、糖尿病和高血壓等危險因素后，發現HO-1基因啟動子區多態性仍與急性心肌梗死密切相關。這表明HO-1基因多態性作為危險因素之一，可能在急性心肌梗死的發生、發展的病理生理過程中發揮著重要作用。

參考文獻

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Relationship Between GT Repeat Polymorphism in Heme Oxygenase-1 and Acute Myocardial Infarction

FAN Guangci CUI Guofang QIN Qin LI Yugeng WANG Gang Department of Internal Medicine-cardiovascular，Qingdao Haici Medical Group，Qingdao 266000， China

【Abstract】

Objective The aim of this study was to investigate the relationship between heme oxygenase-1 gene polymorphism and acute myocardial infarction. Methods After exclusion， 80 patients with AMI and 85 cases of healthy check-up were prospectively enrolled in this study. Polymerase chain reaction and the modified polyacrylamide gel electrophoresis methods were used to analyze HO-1 gene promoter regions （GT）n distribution. Results There were obvious difference between two groups in HO-1 gene promoter regions （GT）n repetitive sequence.Acute myocardial infarction group and the control group L/L genotype （P=0.003） and L allele frequency （P=0.001） differences were statistically significant. Multiple factors regression analysis showed that HO-1 gene polymorphism， smoking history， hypertension， diabetes， and total cholesterol levels were predictors of acute myocardial infarction. Conclusion HO-1 gene promoter regions （GT）n repetitive sequence’s genetic polymorphism is associated with the occurrence and development of acute myocardial infarction.

【Key words】Acute myocardial infarction， Heme oxygenase-1， Polymorphism

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.19.119

【中圖分類號】R542.2

【文獻標識碼】B

【文章編號】1674-9316（2015）19-0154-03