大黃滴眼液質量標準研究

大黃滴眼液質量標準研究

汪映宇

(蘇州市食品藥品檢驗所，蘇州215004)

摘要：目的建立大黃滴眼液的質量標準。方法選用TLC法鑒別制劑中大黃有效成分大黃酸；進行pH等項目的檢查；選用HPLC法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃酚的含量。結果薄層色譜斑點清晰，分離度好。蘆薈大黃素在2.532～50.646 μg·mL`(-1)范圍內呈良好的線性關系(r=1.000 0)，平均回收率為91.8%，RSD為0.79%。大黃酸在3.764～75.280 μg·mL`(-1)范圍內呈良好的線性關系(r=1.000 0)，平均回收率為99.4%，RSD為1.46%。大黃素在2.608～52.160 μg·mL`(-1)范圍內呈良好的線性關系(r=1.000 0)，平均回收率為92.4%，RSD為0.87%。大黃酚在2.499～49.989 μg·mL`(-1)范圍內呈良好的線性關系(r=0.999 9)，平均回收率為92.6%，RSD為0.85%。結論該方法操作簡單，結果可靠，可用于大黃滴眼液的質量控制。

關鍵詞：大黃滴眼液；質量標準；薄層色譜；高效液相色譜

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.007

中圖分類號：R282

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2015)03-0241-04

Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard for Dahuang Eye Drops.Methods Thin-layer chromatography was used to identify rhein； the pH of this formulation and other items were checked； and the content of aloe-emodin， rhein，emodin and chrysophanol were determined by HPLC. Results The TLC identification was distinct and the spots were clear. The linear range of aloe-emodin was 2.532-50.646 μg·mL`(-1)(r=1.000 0) with an average recovery of 91.8% (RSD=0.79%). The linear range of rhein was 3.764-75.280 μg·mL`(-1)(r=1.000 0) with an average recovery of 99.4% (RSD=1.46%). The linear range of emodin was 2.608-52.160 μg·mL`(-1)(r=1.000 0) with an average recovery of 92.4% (RSD=0.87%). The linear range of chrysophanol was 2.499-49.989 μg·mL`(-1)(r=0.999 9) with an average recovery of 92.6% (RSD=0.85%).Conclusion This method is simple and reliable， so it could be used for the quality control of Dahuang Eye Drops.

收稿日期：(2014-10-23)

Study on the quality standard for Dahuang Eye Drops

WANG Yingyu(Suzhou Institute for Food and Drug Control， Suzhou 215004，China)

Key words: Dahuang Eye Drops； quality standard； TLC； HPLC

大黃滴眼液為蘇州市中醫醫院眼科經驗方，由大黃、黃芩素、硼酸、硼砂、羥苯乙酯、氯化鈉組成，臨床上用于急慢性結膜炎、紅眼及對西藥過敏的眼疾患者，療效顯著。大黃作為其主藥，對多種細菌均有不同程度的抑制作用[1]。由于傳統醫院制劑存在質量不穩定的缺點[2],且質量標準水平普遍較低[3]，為更好地控制大黃滴眼液的質量，本文選用TLC法鑒別制劑中的主藥大黃有效成分大黃酸[4]，選用HPLC法測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚的含量，以期建立可行的質量標準，為保證其臨床用藥安全有效提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器拍照系統：CAMAG TLC VISVALIZER(瑞士卡瑪公司)；HPLC：Waters e2695/waters 2489 UV Detector(美國Waters公司)。

1.2試藥大黃滴眼液(批號140312，140324，140331)；大黃對照藥材(批號200402)、蘆薈大黃素對照品(批號201007，質量分數98.0%)、大黃酸對照品(批號200206，質量分數100.0%)、大黃素對照品(批號200110，質量分數100.0%)、大黃酚對照品(批號201118，質量分數99.5%)，均由中國藥品生物制品檢定所提供；鹽酸為優級純(國藥集團化學試劑有限公司)；磷酸為優級純(國藥集團化學試劑有限公司)；水為超純水；甲醇為色譜純(SIGMA-ALDRICH)；其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1性狀本品為紅棕色澄明液體。

2.2薄層色譜(TLC)鑒別取本品20 mL，加鹽酸3 mL，加熱回流30 min，冷卻，用乙醚振搖提取4次(30，20，10和10 mL)，合并乙醚液，揮干，殘渣加適量甲醇溶解,并定容至5 mL量瓶中，作為供試品溶液。取陰性樣品(不加大黃)，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。另取大黃對照藥材0.1 g，加甲醇20 mL，浸泡1 h，濾過，取濾液5 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[5](《中國藥典》2010年版附錄 B)實驗，吸取上述溶液各5 μL分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干。置于紫外光燈(365 nm)下檢視。陰性色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，無斑點。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光主斑點，置于氨蒸氣中熏后，斑點變為紅色；陰性對照無干擾。

2.3檢查參照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅠY要求制定本品的檢查項目，包括pH值、可見異物、滲透壓濃度、無菌、重金屬檢查、砷鹽檢查項。

2.4含量測定

2.4.1色譜條件與系統適用性實驗以TURNER 100A C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為填充劑；以甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(75∶25)為流動相；檢測波長為254 nm。理論板數按大黃素峰計算應不低于3 000。(流速：1 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL)。

2.4.2對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚對照品6.46，9.41，6.52和6.28 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，然后再稀釋10倍，至各質量濃度為12.662，18.820，13.040和12.497 μg·mL-1，作為混合對照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備精密量取本品20 mL，置于燒瓶中，加鹽酸溶液3 mL，加熱回流30 min，冷卻，用乙醚分4次萃取(30，20，10和10 mL)，合并乙醚液，揮干，用甲醇定容至10 mL量瓶中，離心，即得。

2.4.4專屬性實驗在2.4.1項下色譜條件，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚峰形良好，陰性樣品對主峰無干擾。見圖1。

圖1HPLC圖

A.對照品溶液；B.大黃滴眼液陰性樣品溶液；C.大黃滴眼液樣品溶液；1.蘆薈大黃素；2.大黃酸；3.大黃素；4.大黃酚

Fig.1 HPLC chromatograms

A.control substances；B.negative control；C.sample；1. aloeemodin；2.rhein；3.emodin；4.chrysophanol

2.4.5標準曲線及線性范圍分別精密吸取混合對照品溶液配制成相應質量濃度的對照品溶液，分別進樣10 μL，記錄峰面積，以質量濃度為橫坐標、峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程。結果表明，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃酚對照品質量濃度分別在2.532～50.646，3.764～75.280，2.608～52.160和2.499～49.989 μg·mL-1范圍內，均呈良好的線性關系。見表1。

表1標準曲線及線性范圍

Tab.1 Data of standard curves and linear ranges

成分線性范圍/μg·mL-1標準曲線方程相關系數r蘆薈大黃素2.532~50.646Y=56040X-337951.0000大黃酸3.764~75.280Y=46331X-393181.0000大黃素2.608~52.160Y=41602X-314051.0000大黃酚2.499~49.989Y=57953X-374230.9999

2.4.6精密度實驗精密吸取混合對照品溶液10 μL，按照2.4.1項下色譜條件連續進樣6次，記錄蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚的峰面積。結果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.260%，0.293%，0.378%和0.311%。

2.4.7重復性實驗分別精密量取同一份大黃滴眼液樣品6份，每份20 mL，按照2.4.3項下方法制備供試品溶液，按上述高效液相色譜條件測定。結果蘆薈大黃素含量的RSD為2.087%，大黃酸含量的RSD為1.980%，大黃素含量的RSD為1.453%，大黃酚含量的RSD為1.914%。

2.4.8穩定性實驗取混合對照品溶液，按2.4.1項下色譜條件分析，分別在0,1，2，4，6，8和12 h進樣10 μL，RSD分別為1.208%，0.511%，1.536%和0.668%，表明對照品溶液在12 h內穩定。

2.4.9加樣回收率實驗取同一批大黃滴眼液6份，精密量取10 mL，分別精密加入混合對照品溶液(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚的質量濃度分別為12.662，18.820，13.040和12.497 μg·mL-1)0.6 mL。照2.4.3項下方法制備供試溶液，按2.4.1項下色譜條件測定，計算回收率，結果見表2。

2.4.10樣品測定分取3批大黃滴眼液，按照4.3項下方法操作，提取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚的色譜峰面積，結果3批樣品中蘆薈大黃素的含量分別為3.328 2，3.346 6和3.397 6 μg·mL-1；大黃酸的含量分別為19.115 2，19.212 1和19.184 2 μg·mL-1；大黃素的含量分別為4.115 9，4.133 0和4.254 2 μg·mL-1；大黃酚的含量分別為3.647 8，3.674 3和3.744 6 μg·mL-1。

表2加樣回收率實驗結果

Tab.2 Results of recovery tests

( n=6)

3小結與討論

在供試品溶液制備中，預實驗考察了：加鹽酸的量(1，3，5和10 mL)；酸化回流時間(30，60和90 min)；用乙醚回流和不回流萃取(乙醚回流:考察加乙醚量10，20，30和40 mL和回流時間30，60和90 min)；用乙醚萃取的量(20，20，20和10或30，20，20和10 mL)。結果表明，加鹽酸3 mL，加熱回流30 min，不用乙醚回流，直接用乙醚(30，20，20和10 mL)萃取，提取效率最高。綜上所述，本研究制備工藝合理可行，質量標準科學可靠。

大黃滴眼液作為蘇州市中醫醫院眼科經驗方，沿用至今，療效顯著，成本低，在臨床長期使用中受到廣大患者的歡迎，是典型的傳統醫藥制劑。本文采用靈敏度高、重復性好的TLC和HPLC等方法建立和優化了其質量標準，并做了完整的方法學驗證，以期確保大黃滴眼液質量的穩定和安全，為臨床用藥安全有效提供依據。

參考文獻：

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