厄貝沙坦氨氯地平片溶出度評價

厄貝沙坦氨氯地平片溶出度評價

李國瓊1，肖文禮2，楊貴方2， 王俊2，劉啟兵3*

(1.海南省藥品審核認證管理中心，海口570216；2.海南中濟醫藥科技有限公司，海口570208；3.海南醫學院藥學院，海口571199)

摘要：目的以國外原研的厄貝沙坦氨氯地平片為參比制劑，考察自研制劑與參比制劑在不同pH條件下溶出行為的相似性。方法依據2010 年版《中國藥典( 二部)》和日本《醫療用藥品品質情報集》中的溶出度實驗條件，采用HPLC法，分別以鹽酸溶液(pH=2.0)、醋酸鹽緩沖液(pH=4.5)、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)和水為溶出介質進行測定，溶出方法為槳法，轉速為50 r·min`(-1)，并通過f2相似因子法評價自制與參比厄貝沙坦氨氯地平片溶出曲線的相似性。結果3個批號自制片與原研片在不同溶出介質中溶出度相似因子均大于50%。結論自制片與參比片的溶出曲線相似，提示自制厄貝沙坦氨氯地平片處方合理，生產工藝穩定可靠。

關鍵詞：厄貝沙坦；氨氯地平；溶出度；f2相似因子法

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.017

中圖分類號：R944

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2015)03-0275-04

Abstract:ObjectiveTo investigate the similarity of dissolution behavior between the reference preparation tablets ( the listed abroad Irbesartan and Amlodipine Tablets, and the self-prepared(domestic) preparations in dissolution media with different pH. Methods The HPLC method was adopted to determine the dissolubility according to Chinese Pharmacopoeia (edition 2010) and referring to the dissolution test condition in Japan′s Medical Drugs Quality Informations Set. Water， hydrochloride acid(pH=2)， acetate buffer(pH=4.5) and phosphate buffer (pH=6.8) were sepatately used as the dissolution media and the paddle method was adopted with the rotational speed of 50 r·min`(-1). The similarity of dissolution curve was evaluated by f2 similarity factor method. ResultsThe similarity factor of self-made tablets in different dissolution media to the imported tablets was above 50%．ConclusionThe dissolution curve of self-made and imported Irbesartan and Amlodipine Tablets is similar，which prompts that this test preparation has the rational prescription and the production technology is stable and reliable.

基金項目：海口市2013年科技計劃項目(編號：HK2013-17)

作者簡介：李國瓊，女，主管藥師

收稿日期：(2014-10-18)

Dissolution evaluation of Irbesartan and Amlodipine Tablets

LI Guoqiong1， XIAO Wenli2， YANG Guifang2， WANG Jun2， LIU Qibing3*(1. Center for Drug Evaluation and Certification of Hainan Province， Haikou 570216，China； 2. Hainan Zhongji Pharmaceutical Technology Limited Company, Haikou， 570208，China；3.Department of Pharmacy， Hainan Medical College， Haikou 571199，China)

Key words: irbesartan； amlodipine； dissolution；f2similarity factor

*通信作者：劉啟兵，男，博士，副教授

厄貝沙坦和苯磺酸氨氯地平組成的復方片劑是由日本住友制藥株式會社研發的，于2012年9月在日本上市[1]。其中，厄貝沙坦(irbesartan)為血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)受體抑制劑，能抑制AngⅠ轉化為AngⅡ，特異性地拮抗血管緊張素轉換酶1受體(AT1)，對AT1的拮抗作用大于AT2 的8 500倍，通過選擇性地阻斷AngⅡ與AT1受體的結合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產生降壓作用[2]。苯磺酸氨氯地平(amlodipine besylate)屬于鈣通道阻滯劑(CCB)，其主要通過阻滯心肌和血管平滑肌細胞外的鈣離子通道，發揮抗高血壓及抗心絞痛作用[3]，二者組成的復方制劑可協同降壓，優勢互補，能更好地平穩控制患者血壓在正常范圍[4-5]。

固體制劑的體外溶出度實驗對評價其內在質量至關重要，其中不同溶出介質中溶出曲線的相似性研究已成為揭示不同制劑工藝差別和品質優劣的有效方法和手段[6-7]。溶出曲線相似性的評價方法有多種，自1999 年美國FDA 頒布采用f2因子比較法以來，該法己被普遍采用[8-9]。以國外上市的原研產品為參比制劑，參照日本“藥品品質再評價工程”， 在溶出度研究中模擬人體消化道內體液的4 種基本介質，考察自研制劑與原研產品在不同介質中的溶出情況，采用f2因子法對溶出曲線的相似性進行評價，剖析自研制劑的內在質量。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-2010CHT高效液相色譜儀、LC Solution工作站(日本島津公司)；RC-6溶出度測試儀(天津市國銘醫藥設備有限公司)。

1.2試藥厄貝沙坦氨氯地平片(日本住友株式會社，規格：100/5 mg，批號：1005C)；厄貝沙坦氨氯地平片(自制，規格：100/5 mg，批號 121101)；厄貝沙坦對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號 100607-201202，HPLC法質量分數99.8%)；苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號 100374-200903，HPLC法質量分數99.4%)；磷酸(廣州化學試劑廠，分析純，批號 20110301-1)；三乙胺(廣東光華科技股份有限公司，化學純，批號 20120516)；乙腈(TEDIA，色譜純，批號 12115048)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Wondasil C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：磷酸緩沖液(取磷酸5.5 mL，置于950 mL水中，用三乙胺調節pH值至3.2，用水稀釋至1 000 mL)-乙腈(50∶50)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：237 nm；進樣量：20 μL。

2.2溶出介質4種溶出介質分別為：鹽酸溶液(pH=2.0)、醋酸鹽緩沖液(pH=4.5)、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)和水，溶出介質體積為1 000 mL。

2.3溶液制備

2.3.1對照品溶液制備取苯磺酸氨氯地平對照品約17 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加甲醇5 mL使溶解，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，作為氨氯地平對照品儲備液；取厄貝沙坦對照品約50 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為厄貝沙坦對照品儲備液。精密量取厄貝沙坦儲備液5 mL,置于50 mL量瓶中，再精密加入氨氯地平儲備液2 mL，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3.2供試品溶液制備在不同時間點，每次取樣10 mL(同時補充相同體積、溫度一致的溶出介質)，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.4專屬性實驗分別取對照品溶液、空白輔料溶液和空白溶劑各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，4種溶出介質同法測定。實驗結果顯示，在4種介質中，空白溶劑和空白輔料溶液在兩個主成分峰處均無色譜峰，溶劑和輔料對測定無干擾。

2.5精密度實驗照2.3項下的方法，分別用4種溶出介質制備對照品溶液，分別連續進樣6次，記錄色譜圖，計算氨氯地平及厄貝沙坦主峰面積的RSD，結果見表1。實驗結果表明，在4種介質中厄貝沙坦和氨氯地平主峰面積的RSD均小于2.0%，精密度良好。

表1厄貝沙坦氨氯地平片精密度實驗

Tab.1 The measurement precision test of Irbesartan and Amlodipine Tablets

溶出介質RSD/%氨氯地平厄貝沙坦鹽酸溶液(pH2.0)0.50.2醋酸鹽緩沖液(pH4.5)0.70.4磷酸鹽緩沖液(pH6.8)0.30.2水0.50.3

2.6濾膜吸附實驗照2.3項下的方法，分別用4種溶出介質制備對照品溶液，分別直接進樣和經0.45 μm微孔濾膜濾過后進樣，計算濾膜的吸附量，結果見表2。實驗結果表明，濾膜對氨氯地平和厄貝沙坦的吸附量均小于2.0%，濾膜吸附對溶出度測定的影響可以忽略不計。

表2厄貝沙坦氨氯地平片濾膜吸附實驗

Tab.2 The filter membrane absorption test of Irbesartan and Amlodipine Tablets

溶出介質吸附量/%氨氯地平厄貝沙坦鹽酸溶液(pH2.0)0.40.1醋酸鹽緩沖液(pH4.5)0.60.2磷酸鹽緩沖液(pH6.8)0.40.1水0.30.3

2.7線性關系考察照2.3項下的方法，分別制備氨氯地平對照品儲備液和厄貝沙坦對照品儲備液，精密量取氨氯地平對照品儲備液1.0，2.5，4.0，5.0和6.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，分別精密加入厄貝沙坦對照品儲備液0.4，1.0，1.6，2.0和2.4 mL，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，制成氨氯地平質量濃度(C1)分別為0.99，2.448，3.96，4.95和5.94 μg·mL-1及厄貝沙坦質量濃度(C2)分別為20.0，50.1，80.2，100.2和120.2 μg·mL-1的線性實驗溶液。分別用4種溶出介質制備線性實驗溶液，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以溶液質量濃度(X)為橫坐標，以主峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，結果見表3。實驗結果表明，氨氯地平在0.99～5.94 μg·mL-1、厄貝沙坦在20.0～120.2 μg·mL-1質量濃度范圍內，溶液質量濃度與主峰面積線性關系良好。

表3厄貝沙坦氨氯地平片線性回歸方程

Tab.3 The linear regression equations of Irbesartan and Amlodipine Tablets

溶出介質回歸方程r鹽酸溶液(pH2.0)Y=75464X+9211.30.9995Y=55051X+1666.40.9996醋酸鹽緩沖液(pH4.5)Y=79222X-3358.30.9994Y=58128X-104220.9996磷酸鹽緩沖液(pH6.8)Y=74773X+5540.50.9998Y=57985X-101160.9998水Y=79178X+5005.60.9992Y=54094X+106220.9997

2.8回收率實驗照2.3項下的方法，分別制備氨氯地平對照品儲備液和厄貝沙坦對照品儲備液，精密量取氨氯地平對照品儲備液1.0，1.6和2.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，分別精密加入厄貝沙坦對照品儲備液2.0，4.0 和5.0 mL，按處方比例加入空白輔料，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為回收率實驗50%，80%和100%濃度的溶液，各濃度平行配制3份。分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。4種介質同法進行測定，將測得的峰面積代入線性方程計算氨氯地平和厄貝沙坦的實測質量濃度，以實測質量濃度/理論質量濃度計算回收率，結果見表4。實驗結果表明，4種介質中各濃度水平下氨氯地平和厄貝沙坦回收率的平均值均在98%～102%范圍內，RSD均小于2.0%，該測定方法準確度良好。

表4厄貝沙坦氨氯地平片回收率實驗

Tab.4 The recovery test of Irbesartan and Amlodipine Tablets

溶出介質濃度水平/%氨氯地平回收率/%厄貝沙坦回收率/%平均值RSD平均值RSD鹽酸溶液(pH2.0)醋酸鹽緩沖5099.38098.910099.65099.40.50.798.599.199.699.40.60.3液(pH4.5)磷酸鹽緩沖液(pH6.8)水80100.210099.15098.60.399.999.398.70.48099.510099.899.599.05098.78099.210098.50.599.199.698.50.6

2.9溶液穩定性實驗取不同溶出介質的供試品溶液，于室溫下放置，分別于第0，2，4，6和8 h精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算氨氯地平和厄貝沙坦主峰面積的RSD，結果見表5。實驗結果顯示，在4種介質中氨氯地平和厄貝沙坦主峰面積的RSD均小于2.0%，供試品溶液室溫下8 h內穩定。

表5厄貝沙坦氨氯地平片溶液穩定性實驗

Tab.5 The solution stability test of Irbesartan and Amlodipine Tablets

溶出介質RSD/%氨氯地平厄貝沙坦鹽酸溶液(pH2.0)0.30.9醋酸鹽緩沖液(pH4.5)0.50.5磷酸鹽緩沖液(pH6.8)0.80.6水1.00.7

2.10溶出曲線測定照《中國藥典( 二部)》附錄XC第二法，分別以pH 2.0鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水1 000 mL為溶出介質，轉速為50 r·min-1，分別于第5，10，15，30，45，60，90，120，180，240和360 min時取溶液10 mL(當連續2個時間點溶出量達90%，且差值小于5%，可提前結束實驗；取樣后補充相同體積：溫度一致的溶出介質)，濾過，取續濾液作為供試品溶液，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另照2.3項下的方法制備對照品溶液，同法測定，記錄色譜圖。按外標法以峰面積分別計算每片中氨氯地平和厄貝沙坦在各時間點的溶出度并計算累積溶出量。自制制劑與參比制劑在4種介質中的溶出曲線見圖1。

-■-參比制劑中的氨氯地平；-□-自制制劑中的氨氯地平

-▲-參比制劑中的厄貝沙坦；-△-自制制劑中的厄貝沙坦

圖1自制制劑與參比制劑在4種不同溶出介質中的溶出曲線

A.鹽酸溶液(pH2.0)；B.醋酸鹽緩沖液(pH4.5)；C.磷酸鹽緩沖液(pH6.8)；D.水

Fig.1 Dissolution curve of self-prepared preparation and reference preparation in four different dissolution media

A. hydrochloric acid solution(pH2.0)；B. acetate buffer (pH4.5)； C. phosphate buffer pH(6.8)；D. Water

2.11自制制劑與參比制劑溶出曲線的相似性評價采用相似因子(f2)法對自制制劑與參比制劑溶出曲線的相似性進行評價，若50≤f2<100，則判定2條曲線相似；當參比制劑與自制制劑在15 min內溶出量均達85%以上時，無需計算相似因子，直接判定2條曲線相似。自制制劑與參比制劑在4種介質中溶出曲線的相似因子測定結果見表6。實驗結果表明，自制制劑與參比制劑在4種介質中的溶出曲線均相似。

表6自制制劑與參比制劑在4種介質中溶出曲線的相似性評價

Tab.6 The dissolution curve similarity evaluation of self-prepared preparation and reference preparation in four dissolution medium

溶出介質f2因子氨氯地平厄貝沙坦結論鹽酸溶液(pH2.0)—*62.9相似醋酸鹽緩沖液(pH4.5)—*95.8相似磷酸鹽緩沖液(pH6.8)—*67.2相似水63.175.7相似

注：*15 min內溶出量達85%以上。

3討論

f2因子法是美國食品與藥物管理局( FDA) 推薦使用定量比較實驗制劑與參比制劑溶出性質差異的方法，描述制劑體外溶出曲線相似性的非模型依賴方法[8]。該方法可判斷不同處方對藥物釋放的影響程度，從而篩選出與進口片劑溶出性能優異的產品的相似處方，為新藥申報注冊的生物等效性實驗做前瞻性預測。f2大于50 時即可認為曲線相似，f2越大表明曲線越相似[10-11]。

本品為復方制劑，包含氨氯地平和厄貝沙坦2種藥物。分別對氨氯地平和厄貝沙坦進行了紫外掃描，結果顯示，氨氯地平在237 nm波長處有最大吸收，厄貝沙坦在200～400 nm波長范圍內未顯示明顯吸收峰，我們考慮到制劑中氨氯地平的量遠小于厄貝沙坦，故選擇以氨氯地平的最大吸收波長237 nm作為溶出度測定波長(厄貝沙坦在該波長下也具有較強吸收)。本實驗評價了自制制劑與國外原研參比制劑在pH2.0鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水等4種介質中溶出曲線的相似性。實驗結果表明，自制制劑與參比制劑中的氨氯地平在pH2.0鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中15 min內溶出量均達85%以上，在水中的溶出曲線f2因子大于50，可判定自制制劑與參比制劑中的氨氯地平在4種介質中的溶出曲線相似；自制制劑與參比制劑中的厄貝沙坦在4種介質中溶出曲線的f2因子均大于50，可判定自制制劑與參比制劑中的厄貝沙坦在4種介質中的溶出曲線相似。結果表明，自制制劑與國外原研參比制劑在4種介質中溶出曲線的一致性，在一定程度上反映了自制制劑與原研制劑質量的一致性[12]。

目前，我國藥品申報中仿制藥申請占據了較大比例，化藥藥品注冊分類第3類的新藥本質上也是仿制國外已經上市的藥品。保證仿制藥品與國外上市藥品具有質量等同性，是仿制藥研究應該遵循的共同準則，仿制研究時應進行多層面的質量對比研究，其中溶出度對比研究是工藝處方篩選的重要依據之一。同時，本實驗還可為建立體內外相關性提供基礎數據。自研制劑和參比制劑的體內生物利用度是否等效還有待進一步考察。

參考文獻：

[1]Mori M， Takahashi S. Pharmacological and clinical

properties of AIMIX(R) combination tablets LD & HD， fixed-dose combination of irbesartan and amlodipine besilate[J]. Nihon Yakurigaku Zasshi， 2013， 142(1): 39-46.

[2]Lambers Heerspink H J， Weldegiorgis M， Inker L A，et al. Estimated GFR decline as a surrogate end point for kidney failure: a post hoc analysis from the reduction of end points in non-insulin-dependent diabetes with the angiotensin II antagonist losartan (RENAAL) study and irbesartan diabetic nephropathy trial (IDNT)[J]. Am J Kidney Dis， 2014，63(2): 244-250.

[3]Zhu D， Gao P， Holtbruegge W， et al. A randomized，double-blind study to evaluate the efficacy and safety of a single-pill combination of telmisartan 80 mg/amlodipine 5 mg versus amlodipine 5 mg in hypertensive Asian patients[J]. J Int Med Res， 2014，42(1):52-65.

[4]Bobrie G. I-combine study: assessment of efficacy and safety profile of irbesartan/amlodipine fixed-dose combination therapy compared with amlodipine monotherapy in hypertensive patients uncontrolled with amlodipine 5 mg monotherapy: a multicenter， phase Ⅲ， prospective， randomized， open-label with blinded-end point evaluation study[J]. Clin Ther， 2012， 34(8): 1705-1719.

[5]Bobrie G. I-add study: assessment of efficacy and safety profile of irbesartan/amlodipine fixed-dose combination therapy compared with irbesartan monotherapy in hypertensive patients uncontrolled with irbesartan 150 mg monotherapy: a multicenter， phase Ⅲ， prospective， randomized， open-label with blinded-end point evaluation study[J]. Clin Ther， 2012， 34(8): 1720-1734.

[6]脫鳴富，李新霞，林守峰，等. 鹽酸氨溴索口腔崩解片溶出度測定方法的考察[J]. 西北藥學雜志， 2010， 25(3)：46-48.

[7]孔愛英，謝沐風，郭長君，等. 卡馬西平片溶出度方法比較以及溶出曲線評價方法的探討[J]. 中國藥事， 2011， 25(2): 162-165.

[8]Costa P. An alternative method to the evaluation of similarity factor in dissolution testing[J]. Int J Pharm， 2001， 220(1): 77-83.

[9]陸步實，孫磊，周立新，等. 多條溶出曲線評價纈沙坦氨氯地平片的質量[J]. 中國醫院藥學雜志， 2012， 32(9): 704-707.

[10]Berry M R， Likar M D. Statistical assessment of dissolution and drug release profile similarity using a model-dependent approach[J]. J Pharm Biomed Anal， 2007， 45(2): 194-200

[11]Shah V P，Tsong Y，Sathe P，et al.Invitrodissolution profile comparison-statistics and analysis of the similarity factor，f2[J]. Pharm Res， 1998， 15(6): 889-896.

[12]Duan J Z， Riviere K， Marroum P.Invivobioequivalence andinvitrosimilarity factor (f2) for dissolution profile comparisons of extended release formulations: how and when do they match[J]. Pharm Res， 2011， 28(5): 1144-1156.