熱毒寧與頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉對泛耐藥鮑曼不動桿菌的體外抑菌作用

李新，陳化禹，楊桂芳，耿潔，賈志杰(天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津300193)

熱毒寧與頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉對泛耐藥鮑曼不動桿菌的體外抑菌作用

李新，陳化禹，楊桂芳，耿潔，賈志杰
(天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津300193)

摘要:目的探討體外環境下中藥熱毒寧聯合頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉(SCF)對泛耐藥鮑曼不動桿菌(XDR-AB)的抑菌作用。方法取33株XDR-AB培養傳代，采用微量肉湯棋盤稀釋法檢測SCF和熱毒寧的單獨及聯合最低抑菌濃度(MIC)、熱毒寧聯合SCF對XDR-AB的抑菌濃度指數(FICI)，以FICI≤0.5為協同作用。結果熱毒寧與SCF聯合用藥時與單獨用藥時相比MIC下降，熱毒寧與SCF聯合用藥時的FICI均≤0.5。結論體外環境下，熱毒寧聯合SCF對XDR-AB有很好的協同作用。

關鍵詞:泛耐藥鮑曼不動桿菌;熱毒寧;中藥;頭孢哌酮鈉;舒巴坦鈉;抑菌試驗;體外試驗

鮑曼不動桿菌為條件致病菌，常引起呼吸道感染、泌尿系統感染、敗血癥、繼發性腦膜等。近年來，隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應用，鮑曼不動桿菌的耐藥性不斷增加，出現了泛耐藥鮑曼不動桿菌(XDRAB)。XDR-AB對常用抗菌藥物幾乎全部耐藥，僅對多黏菌素和替加環素敏感［1，2］，給臨床治療帶來巨大挑戰。本研究觀察了熱毒寧與頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉(SCF)聯合對XDR-AB的體外抑菌作用。現報告如下。

1　材料與方法

1.1材料33株XDR-AB分離自2014年1～10月份天津中醫藥大學第一附屬醫院住院患者，其中30份來源于痰液標本、3份來源于尿液標本。根據《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)選用法國梅里埃公司VITEK-2 Compact全自動微生物分析系統及配套的分析卡進行菌種鑒定和藥敏的篩選。質控菌株為大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。SCF購自美國輝瑞公司，熱毒寧注射液購自江蘇康緣藥業，藥敏紙片為美國輝瑞公司提供的SCF紙片。

1.2檢測方法

1.2.1 SCF對XDR-AB的最低抑菌濃度(MIC)將XDR-AB菌株培養傳代，分離單個菌落，用比濁儀配制細菌懸液1×108CFU/mL，再用M-H肉湯以1∶100稀釋(含菌量約106)備用。用M-H肉湯將SCF原液倍比稀稀成256、128、64、32、16、8、4、2 μg/mL的藥液，分別取50 μL依次加入96孔板中，將備用菌液50 μL加入已加藥的孔中，使最終接種菌量約5×105CFU/孔。另設無菌對照孔(孔內只加MH肉湯100 μL)和無藥對照孔(孔內只加M-H肉湯和菌液各50 μL)，振蕩1min混勻后，35℃恒溫培養箱孵育20 h，肉眼觀察結果，記錄MIC。

1.2.2熱毒寧對XDR-AB的MIC制備終濃度為原液的1、0.80、0.64、0.51、0.41、0.33、0.26、0.21、0.17倍的熱毒寧，分別取50 μL按濃度由低到高依次加入96孔板中。分別取備用菌液50 μL加入已加藥的孔中，另設無菌對照孔和無藥對照孔。振蕩1min混勻后，35℃恒溫培養箱孵育20 h，肉眼觀察結果，記錄MIC。

1.2.3熱毒寧聯合SCF對XDR-AB的抑菌作用

采用微量肉湯棋盤稀釋法測定。稱量并配制2倍MIC濃度的藥物，SCF制備方法同1.2.1，熱毒寧制備方法同1.2.2。在96孔板上做好標記，SCF從上到下濃度依次遞減，熱毒寧從左到右濃度依次遞減，另設無菌對照孔和無藥對照孔。在96孔板中，每個對應孔加兩種藥液各50 μL和菌液100 μL后，振蕩1min混勻，35℃孵育20 h，觀察抑菌濃度指數(FICI)。FICI =(聯合用藥時SCF的MIC/單用時SCF的MIC)+(聯合用藥時熱毒寧的MIC/單用時熱毒寧的MIC)。FICI≤0.5為協同，0.5＜FICI≤1.0為相加，1.0＜FICI≤2.0為無關，＞2.0為拮抗。

2　結果

2.1熱毒寧和SCF單獨及聯合用藥的MIC見表1。

表1　熱毒寧和SCF單獨及聯合用藥的MIC

2.2熱毒寧聯合SCF對XDR-AB的抑菌作用熱毒寧與SCF聯合用藥時的FICI為0.345～0.468，均≤0.5。

3　討論

XDR-AB耐藥現象十分嚴重，對氨基糖苷類、氟喹諾酮類以及β-內酰胺類等抗菌藥物均有一定的耐藥性，給臨床治療造成極大困難。研究顯示，某些中藥具有提高抗菌藥物抑菌效果的作用［3］。中藥可直接作用于致病菌，通過干擾細菌的代謝過程，影響其結構與功能，如干擾致病菌細胞壁合成、阻礙菌體內蛋白質合成、抑制核酸代謝及干擾其他代謝途徑等［4～6］。另外，中藥還能夠激發調動機體內在的抗菌因素，通過調節免疫功能、增強機體免疫力而調動自身潛力抗感染，達到治療疾病的目的［7，8］。目前關于細菌對中藥產生耐藥性的報道很少，表明中藥聯合抗菌藥物治療抗耐藥菌具有廣闊的應用前景［9，10］。熱毒寧注射液為臨床常用中藥，具有清熱解毒之功效，其主要成分為青蒿、金銀花、梔子。現代藥理研究表明，青蒿、金銀花均有抑菌作用［11］。青嵩具有免疫抑制及細胞免疫促進作用;金銀花可破壞細菌細胞壁的肽聚糖層的結構，改變包膜屏障的通透性，從而抑制細菌生長［12］;梔子具有抗感染、鎮靜降溫的作用。臨床常用于抗菌、抗病毒治療，對細菌或病毒感染所致的上呼吸道疾病療效顯著［13，14］。

SCF是臨床常用廣譜抗菌藥物，廣泛用于革蘭陰性菌引起的中、重度感染細菌，但2014年我院XDR-AB對SCF的耐藥率已高達46.85%。本研究顯示，不同XDR-AB對SCF的敏感性不同，分別為128、64、32 μg/mL;聯合熱毒寧后，SCF的MIC降至2、4、8 μg/mL。表明SCF聯合熱毒寧后，菌株對SCF的敏感性明顯提高，SCF對XDR-AB的MIC明顯下降;且對SCF耐藥程度越高的菌株MIC下降越明顯。進一步觀察兩藥的協同作用，結果顯示，二者聯合用藥時的FICI均≤0.5，說明兩者有協同作用。XDR-AB是具有產β-內酰胺酶、膜通透性改變及多藥外排系統等多種復雜耐藥機制并存的細菌，熱度寧聯合SCF可能通過對某些細菌耐藥基因的改變，從而減少抗菌藥物用量或逆轉某些抗菌藥物的敏感性，減少藥物不良反應，提高療效。關于熱毒寧如何逆轉SCF敏感性將是我們下一步的研究目標。

綜上所述，體外環境下熱毒寧聯合SCF對XDR-AB有很好的協同作用，臨床治療XDR-AB可聯合使用SCF和熱度寧注射液。

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·綜述·

收稿日期:( 2015-01-26)

基金項目:天津市中醫藥管理局中醫中西醫結合科研課題(13065)。

文章編號:1002-266X(2015)34-0092-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R978.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.041