黔產八角蓮屬藥材總黃酮成分含量差異研究

萬明香　張麗艷　何順志*．貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴州　貴陽　55000; ．貴陽中醫學院藥學系，貴州　貴陽　55000

黔產八角蓮屬藥材總黃酮成分含量差異研究

萬明香1張麗艷2何順志2*
1．貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴州貴陽550001; 2．貴陽中醫學院藥學系，貴州貴陽550002

【摘要】目的:研究黔產八角蓮屬藥材不同種質資源間總黃酮含量的差異。方法:用紫外分光光度法測定四份八角蓮屬藥材種質資源根、莖和葉的總黃酮含量。結果:黔產八角蓮屬藥材種質資源間總黃酮含量的差異較大。川八角蓮的總黃酮含量最高，為2.64%;貴州八角蓮次之;八角蓮樣品的最低，僅有1.03%;八角蓮屬藥材不同部位中總黃酮含量高低的分布規律為根＞葉＞莖。結論:川八角蓮根樣品的總黃酮含量最高，可作為人工栽培時的原種利用，研究結果為川八角蓮的種質資源篩選和人工栽培提供了試驗依據。

【關鍵詞】貴州;八角蓮屬;種質資源;總黃酮含量

Differences of Total Flavone Content in Guizhou Dsosma Different Germplasm Resources

WAN Ming－xiang1ZHANG Li－yan2HE Shun－zhi2*
1.The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，China;
2.Department of Pharmacy，Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China

Abstract:Objective To study the differences of total flavone content in Guizhou Dysosma among different germplasm resources．Method The total flavone is extracted from Guizhou Dysosma by UV．With rutin as standard substance，the content of total flavone in root，stem and leaf of four Dysosma germplasm resources harvested in Guizhou was determined by UN．In addition，with naringin as standard substance．Result There was significant difference about the content of total flavone in Guizhou Dysosma among different germplasm resources．Morespecifically，the content of total flavone in Dysosma samples was the highest at 2.64%，followed by Dysosma samples at 1.03%，and the least in Dysosma versipellis samples．Moreover，the content of total flavone in different parts of Dysosma followed atrend of root＞leaf＞stem．Conclusion Dysosma harvested from Dysosma County could be used as the original species for artificial cultivation because of the highest content of total flavone。

Key words:Guizhou; Dysosma; Germplasm resources; Total flavone content

黔產八角蓮屬藥材主要為八角蓮[Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng ex Ying]、貴州八角蓮[D.majorensis(Gagnep。)Ying]、川八角蓮[D.veitchii(Hemsl.et Wils。)Fu ex Ying]和小八角蓮[D.difformis(Hemsl.et Wils。)T.H.Wang ex Ying]。具化痰散結、祛瘀止痛、清熱解毒的功效，主要用于咳嗽、咽喉腫痛、瘰疬、疔瘡、毒蛇咬傷、跌打損傷等證[1－5]。特別用于治療食道癌、子宮癌。化學成分研究發現其根和根莖中含有抗癌成份鬼臼毒素、脫氧鬼臼毒素、金絲桃苷、槲皮素等，具有極其廣闊的開發前景。

近年來，由于八角蓮屬藥材顯著的藥用價值而遭到人為嚴重破壞，導致該屬植物數量日趨減少。其中，八角蓮Dysosma versipellis為瀕危植物，在第一批國家珍稀瀕危保護植物名錄中被列為三級保護植物。八角蓮屬藥材通常以根入藥，而大量的莖葉沒有得到充分利用，因此有必要對八角蓮屬藥材地上部分與地下部分總黃酮含量進行對比研究，以期為充分利用八角蓮屬藥材自然資源提供科學依據

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1研究材料主要對貴州龍里、荔波、貞豐和赫章等縣市的八角蓮屬藥材資源進行了野外考察和樣品收集，收集的八角蓮屬藥材樣品由貴陽中醫學院生藥教研室何順志教授鑒定，分別為貴州八角蓮Dysosma majorensis(Gagnep.)Ying、八角蓮D.versipellis(Hance)M.Cheng ex Ying、小八角蓮D.difformis(Hemsl.et Wils.)T.H.Wang ex Ying和川八角蓮D.veitchii(Hemsl.et Wils.)Fu ex Ying.

1.1.2儀器島津UV－2501PC分光光度計; FA2004分析天平;植物粉碎機，均購自上海精科公司。

1.1.3試劑蘆丁(批號0080－9705，中國藥品生物制品檢定所)，其余試劑均為分析純。

1.2八角蓮屬藥材總黃酮含量的測定

1.2.1最大吸收波長的選擇[6]將標準品溶液和樣品溶液以60%乙醇、0.1mol/L三氯化鋁溶液、0.1mol/L醋酸鉀溶液為顯色劑，以試劑為空白對照，在250nm～500nm進行掃描，結果顯示標準品溶液和樣品溶液在417nm處均有最大吸收，故選定417nm為測定波長。

1.2.2對照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品3.57mg，置于25ml容量瓶中，加60%的乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得對照品溶液(142.8μg/ml)。

1.2.3線性關系精密吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml蘆丁對照品溶液分別置于25ml容量瓶中，加60%乙醇至5.0ml，再分別加入3.0ml的0.1mol/L三氯化鋁溶液，5.0ml的0.1mol/L醋酸鉀溶液，加60%乙醇至刻度，搖勻，放置40min。以第1份作空白，在417nm測定吸光度。并以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲

線，計算回歸方程為: y =31.863x +0.0104; r =0.9999。結果表明，蘆丁在0.14mg～0.71mg范圍內含量與吸光度有良好的線形關系。

1.2.4精密度試驗取對照品溶液3ml，按照標準曲線項下測定方法，重復測定5次，結果得以蘆丁計的總黃酮的RSD為0.10%。

1.2.5重復性試驗精密稱取貴州八角蓮樣品0.5g，共5份，按樣品測定方法進行測定，結果得以蘆丁計的總黃酮平均含量RSD為2.84%

1.2.6穩定性試驗精密稱取同一批樣品0.5g，按樣品測定方法進行測定，顯色40min后，每隔20min測定1次，持續80min，總黃酮平均含量的RSD為2.66%，表明顯色40min后，80min內測定基本穩定。

1.2.7加樣回收率試驗精密稱取已知含量的貴州八角蓮樣品0.25g，平行6份，含量為2.43%，分別精密加入蘆丁對照品溶液，按樣品測定項下方法測定，計算回收率，結果見表1。

表1　以蘆丁計總黃酮的加樣回收率

1.2.8樣品測定精密稱取樣品(過40目篩)約0.5g，加氯仿適量索氏提取至無色，棄去氯仿液，揮干，加甲醇適量索氏提取至無色，回收甲醇并定量轉移至50ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為供試品溶液，取供試品溶液自“加60%乙醇至5.0ml”起，按標準曲線操作方法進行測定。按下式計算總黃酮含量。

式中:

C:顯色后樣品的濃度(mg/ml)

M:樣品稱樣量(g)

V:取樣體積(ml)

2　結果與分析

2.1貴州八角蓮屬藥材資源現狀根據貴州的地理環境和氣候特點確定黔東南、黔西、黔北、黔南4條調查路線并選擇施秉、荔波、遵義、龍里、貞豐和赫章等具有代表性的地區進行調查，實地調查結果表明，八角蓮屬植物中八角蓮主要分布于黔東南的施秉九龍山、云臺山，遵義的金鼎山、婁山關，黔南的荔波、三都、獨山、平塘等地;貴州八角蓮主要分布于龍里、遵義、道真、桐梓等地;小八角蓮主要分布于黔西南的安龍仙鶴坪自然保護區、貞豐龍頭大山等地;川八角蓮分布于納雍唇仁、赫章韭菜坪等地。在貴州八角蓮屬植物中四種藥用植物資源蘊藏量大小為:八角蓮＞貴州八角蓮＞小八角蓮＞川八角蓮。但過度采挖、全民藥用資源保護意識和法制觀念薄弱、毀林開荒、過度放牧以及城市建設破壞了生態環境和資源分布，導致八角蓮屬植物的蘊藏量很少，需要重點保護。

2.2不同產地及不同部位八角蓮屬藥材總黃酮含量的種質資源差異

2.2.1不同來源八角蓮屬藥材總黃酮含量由表2可知，川八角蓮總黃酮含量最高，為2.64%，貴州八角蓮其次，八角蓮總黃酮含量最低;總黃酮含量從高到低分別為:赫章川八角蓮＞龍里貴州八角蓮＞貞豐小八角蓮＞荔波八角蓮。

2.2.2貴州產八角蓮屬藥材不同部位的總黃酮含量差異同樣由表2可知，總黃酮含量為:根＞葉＞莖。

表2　貴州四種八角蓮屬植物中總黃酮的含量(n =3)

3　討論

對采自貴州各縣市八角蓮屬藥材種質資源總黃酮含量的測定結果表明，八角蓮屬藥材種質資源間總黃酮含量差異較大，以赫章川八角蓮的種質資源最好，荔波八角蓮的種質資源最差，因此在該區進行人工栽培時可直接利用赫章川八角蓮為種質來源。

對八角蓮屬藥材不同部位總黃酮的測定結果表明，八角蓮屬藥材總黃酮有效成分含量在根中含量最高，葉次之，莖最低。通常八角蓮屬藥材是以根入藥，由于八角蓮屬植物地下部分，生長緩慢，根莖呈結節狀，一年長一節，數年才能入藥用，而地上部分每年均可采收。因此從總黃酮成分和資源的保護、合理利用及可持續發展的角度出發，利用地上部分為好，可使八角蓮屬藥材資源實現可持續利用和發展。

參考文獻

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收稿日期:( 2014.11.03)

通信作者:何順志，教授。E－mail: hesz8899@126.com

作者簡介:萬明香(1980－)，女，研究生，侗族，主管藥師，主要從事中藥資源調查與中藥質量控制。

基金項目:國家中醫藥管理局科技項目(編號04－05zp59)。

【文章編號】1007－8517(2015)03－0016－02

【文獻標志碼】A

【中圖分類號】R284