HPLC法測定復方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷的含量

楊玲霞朱旭江葉艷芬.甘肅省食品藥品檢驗研究院，甘肅　蘭州　730000; .甘肅省天水市岐黃藥業(yè)有限責任公司，甘肅　天水　74000

HPLC法測定復方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷的含量

楊玲霞1朱旭江1葉艷芬2
1.甘肅省食品藥品檢驗研究院，甘肅蘭州730000; 2.甘肅省天水市岐黃藥業(yè)有限責任公司，甘肅天水741000

【摘要】目的:測定復方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量.方法:采用HPLC法，以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑，流動相為乙腈－0. 2%磷酸(15∶75)，檢測波長為256 nm，流速為1. 0 ml/min.結果:金絲桃苷進樣量在3. 56～71. 2 μg/ml范圍內與峰面積具有良好的線性關系(r =0. 999);平均加樣回收率為98. 93%，RSD =1. 98%(n =6).結論:該方法穩(wěn)定、準確，可用于復方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量測定.

【關鍵詞】復方羅布麻片Ⅰ;金絲桃苷;高效液相色譜法

Determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I by HPLC

YANG Ling－xia，ZHU Xu－jiang，YE Yan－fen

Institute for Food and Drug Control of Gansu Province，Lanzhou 730000，China; Tianshui City，Gansu Province Qihuang Pharmaceutical Co，Ltd．Tiunshui 741000，China

Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I．MethodsThe HPLC method was used with a mixture of accetonitrile－0. 2% phosphate(15∶75)as the mobile phase．The determination wavelength was set at 256nm with the flow rate of 1. 0ml/min．ResultsThere was a good linearrelationship between the sample volume and the peak area in the range of 35. 6μg～71. 2μg(r =0. 999)．The average recovery rate was 98. 93%，RSD =1. 98%(n =6)．ConclusionsThe method is stable and accurate．It can be used for the content determination of Hyperoside in Compound luobuma tablets I．

Key words:Compound luobuman tablets I; Hyperoside; HPLC

復方羅布麻片Ⅰ收載于《化學藥品地方標準上升國家標準(第十一冊)》，由羅布麻葉、野菊花、防己、硫酸雙肼嗪等組成，為中西藥復方制劑.方中羅布麻葉具有平肝安神、清熱利水之功，對本方發(fā)揮臨床療效有重要作用.原標準中未對羅布麻葉進行質量控制.現(xiàn)代藥理研究表明，羅布麻葉降血壓、降血脂主要活性成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷含量最高[1].為有效控制復方羅布麻片Ⅰ的質量，促進臨床用藥安全，本試驗建立了以反相高效液相色譜法測定復方羅布麻片Ⅰ中金絲桃苷含量的方法.

圖1　金絲桃苷對照品高效液相色譜圖

1　儀器與試藥

1. 1儀器島津LC－2010A高效液相色譜儀; AE－240型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司).

1. 2試藥金絲桃苷對照品(批號: 111521－200303，中國藥品生物制品檢定所);復方羅布麻片Ⅰ(批號: 120802，山西津華暉星制藥有限公司;批號: 0130201，山西云鵬制藥有限公司;批號: 121202，山西亨瑞達制藥有限公司);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純.

2　方法與結果

2. 1色譜條件色譜柱: Kromasil C18(250×4. 6mm，5μm);流動相:乙腈－0. 2%磷酸(15∶75);柱溫: 30℃;流速: 1. 0ml/min;檢測波長: 256nm.在此色譜條件下，供試品色譜圖中，以金絲桃苷峰計算，理論板數(shù)為10126.

2. 2對照品溶液的制備精密稱取金絲桃苷對照品適量，加甲醇溶解，制成30μg/ml的溶液，作為對照品溶液.

2. 3供試品溶液的制備取復方羅布麻片Ⅰ適量，研細，精密稱取約3g，至錐形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

2. 4陰性對照溶液的制備按處方比例及制備工藝，配制不含羅布麻葉的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液.

2. 5系統(tǒng)適用性實驗精密吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各10μl，按照上述色譜條件測定，結果表明陰性對照溶液在對照品溶液的相同保留時間處無雜質峰干擾.對照品色譜圖、供試品色譜圖、陰性對照色譜圖見圖1～3.

圖2　樣品高效液相色譜圖

圖3　陰性對照高效液相色譜圖

2. 6線性關系精密吸取對照品溶液(濃度μg/ml)1、5、10、15、20μl，依法進樣，以峰面積積分值為橫坐標，對照品進樣量為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程為: C =4×10－7A－0. 0234，r =0. 999.試驗結果表明，金絲桃苷在3. 56～71. 2μg范圍內呈良好的線性關系.

2.7穩(wěn)定性實驗精密吸取同一供試品溶液10μl，分別于0、3、6、9、18h注入液相色譜儀，測得待測成分峰面積積分值的

RSD為2.02%，結果表明供試品溶液在18h內基本穩(wěn)定.

2. 8精密度實驗精密吸取金絲桃苷對照品溶液10μl，重復進樣6次，計算得峰面積積分值的RSD為1. 82%，表明本法精密度良好.

2. 9重復性試驗精密稱取同一樣品(批號: 121202)6份，按樣品測定法測定，結果每g含金絲桃苷分別為0. 36、0. 35、0. 36、0. 34、0. 36、0. 35mg(RSD = 2. 3%，n = 6)，表明本法重現(xiàn)性良好.

2. 10加樣回收率試驗取復方羅布麻片Ⅰ(批號: 121202，金絲桃苷含量為0. 35mg/g)6份，精密稱定，分別精密加入一定量的金絲桃苷對照品(35. 6μg/ml)，照供試品測定方法進樣測定，計算回收率.結果表明，本方法具有較好的準確度.見表1.

表1　加樣回收率試驗

2. 11樣品的含量測定取復方羅布麻片Ⅰ按“2. 3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，進樣10 μl記錄色譜圖峰面積，以峰面積計算樣品中金絲桃苷的含量.結果見表2.

表2　樣品含量測定結果(n =2)

3　討論

本試驗比較了用50%甲醇與甲醇加熱回流提取的結果，發(fā)現(xiàn)用50%的甲醇加熱回流法提取效率高于甲醇加熱回流提取法.因此，選用50%甲醇作為提取溶媒.

復方羅布麻片Ⅰ為中西藥復方制劑.由于其價格便宜，療效可靠，在高血壓病人中得到廣泛應用.通過對3批復方羅布麻片Ⅰ樣品的測定，發(fā)現(xiàn)其中所含金絲桃苷的含量存在較明顯的差異.由此可見，對復方羅布麻片Ⅰ中羅布麻葉進行質量控制，很有必要.

參考文獻

[1]許虎，劉訓紅，王媚，等．羅布麻葉研究現(xiàn)狀及設想[J]．現(xiàn)代中藥研究與實踐，2012，26(3): 85－87．

收稿日期:( 2014. 12. 30)

作者簡介:楊玲霞，副主任藥師，從事食品藥品檢驗工作.E－mail: aluo009@ sina. com

【文章編號】1007－8517(2015)06－0014－02

【文獻標志碼】A

【中圖分類號】R284. 1