正交試驗法優選香元消痔巴布貼提取工藝

李文兵　王洛臨　李智勇　張誠光　范宋玲廣東省第二中醫院，廣東　廣州　510095

正交試驗法優選香元消痔巴布貼提取工藝

李文兵王洛臨李智勇張誠光范宋玲
廣東省第二中醫院，廣東廣州510095

【摘要】目的:優選香元消痔巴布貼的最佳水提工藝.方法:采用正交試驗法，以浸膏質量和小檗堿的含量為指標，對加水用量、提取時間、提取次數進行優選.結果:香元消痔巴布貼水提的最佳提取工藝為每次加10倍量水，提取2次，每次1. 5h.結論:優選的水提取工藝方法可行、工藝穩定、重現性好.

【關鍵詞】香元消痔巴布貼;提取工藝;小檗堿;正交試驗

Optimization of Extract Technology for Xiangyuan xiaozhi cataplasm by Orthogonel Design

LI Wen－bing WANG Luo－lin LI Zhi－yong ZHANG Cheng－guang FAN Song－ling
Guangdong Second Provincial Traditional Medicine Hospital，Guangzhou 510095，China

Abstract:Objective To optimize the extract process of Xiangyuan xiaozhi cataplasm．Methods The optimum conditions of Xiangyuan xiaozhi cataplasm were selected with the extractum and the active components berberine hydrochloride as the indicators．Results The optimal process was 10 times water adding into herbal pieces，then reflux extracting 2 times and 1. 5 hours for each time．Conclusion The optimal extration process is stable and reasonable，which can effectively extract the active ingredients of Xiangyuan xiaozhi cataplasm．

Key words:Xiangyuan xiaozhi cataplasm; Orthogonel Design; berberine hydrochloride

香元消痔巴布貼處方是廣東省第二中醫院的經驗處方，由黃柏、地榆、元胡等八味中藥材組成，具有清熱解毒、散寒除濕、涼血止血的功效，主要用于濕熱所致的內外痔、混合痔瘡.黃柏為本方的君藥.現代研究表明，黃柏中的生物堿為有效成分，試驗選擇小檗堿含量和水溶性固形物質量為評價指標，對影響提取效果的提取次數、加水量和提取時間進行優化，以確定其最佳提取工藝[1－3].現報道如下.

1　儀器與試藥

1. 1儀器安捷倫1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司) ; DHG9203A型電熱鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司) ; HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司) ; XS205DU型分析天平(瑞士梅特勒托利多).

1. 2試藥小檗堿對照品(批號110713－200301，中國食品藥品檢定研究院) ;黃柏、槐花、地榆、元胡等購于廣州市藥材公司，經廣東省第二中醫院李慶勇副主任中藥師鑒定，均為《中華人民共和國藥典》2010年版收載的正品;水為超純水;甲醇為色譜純;其余試劑均為分析純.

2　方法與結果

2. 1正交試驗因素水平的確定采用正交試驗法，在預試驗結果的基礎上，以提取液中總浸膏得量和小檗堿的含量為評價指標，對影響提取工藝的主要因素有加水倍量、提取時間、提取次數進行優選，因素水平設計見表1.

表1　水提工藝試驗因素水平設定

2. 2藥材提取

2. 2. 1樣品的制備按處方比例，稱取藥材共9份，按照L9( 3)4正交表安排分別進行各實驗提取，過濾，合并，提取液濃縮并定容至500ml，即得;分別測定固形物得量和小檗堿含量.

2. 2. 2陰性對照溶液制備按處方比例稱取除黃柏外的其余藥材，按“2. 2. 1”項下方法制備陰性樣品溶液.

2. 3總固形物得量的測定精密量取各正交試驗樣品25ml，置已知恒重的蒸發皿內，水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷卻0. 5h，稱重，計算總固體得量.計算公式:

2. 4小檗堿的含量測定

2. 4. 1色譜條件色譜柱: Kromasil C18色譜柱( 4. 6mm× 250mm，5μm) ;柱溫: 25℃;流動相:乙腈－0. 1 %磷酸( 50∶50) (每100ml流動相加入十二烷基硫酸鈉0. 1g) ;流速: 1ml/min;檢測波長: 265nm;進樣量: 10μl，理論塔板數以鹽酸小檗堿計不低于4000.

2. 4. 2對照品溶液的制備精密稱取小檗堿對照品適量，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含1. 005mg小檗堿的對照品溶液.

2. 4. 3供試品溶液的制備分別精密吸取正交試驗所得各樣品溶液2ml，置25ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0. 45μm微孔濾膜，取續濾液，作為供試品溶液.

2. 4. 4系統性試驗按“2. 4. 1”項下色譜條件，分別取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl進樣，進行系統性試驗，結果見圖1－3，小檗堿分離度良好，陰性無干擾，理論塔板數按小檗堿峰計算不低于4000.

圖1　小檗堿對照液相色譜圖

圖2　供試品溶液液相色譜圖

圖3　陰性對照液相色譜圖

2. 4. 5線性關系考察精密取上述對照品溶液2、5、10、15、20 μl注入高級液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積對數為縱坐標，進樣量為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y =2. 53X－33. 44，r = 0. 9998，結果表明，小檗堿在濃度范圍2. 01～20. 1μg內線性關系良好.

2. 4. 6精密度試驗精密吸取上述對照品溶液10μl，重復進樣6次，按“2. 4. 1”項下色譜條件測定.結果小檗堿峰面積的RSD為1. 26%，表明儀器精密度良好.

2. 4. 7穩定性試驗取同一份樣品，分別于0、1、2、4、8、12h，進樣10μl，按“2. 4. 1”項下色譜條件測定.結果小檗堿峰面積積分值RSD為1. 58%，表明供試品溶液在12h內穩定性良好.

2. 4. 8重復性試驗取同一批樣品5份，按“2. 4. 3”項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積并計算含量.結果測得小檗堿平均含量的RSD為0. 55%，表明該方法重復性良好.

2. 4. 9加樣回收率試驗精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入小檗堿對照品1. 005 mg，按2. 4. 1項下方法測定，計算加樣回收率，結果小檗堿平均回收率為98. 86%，RSD為1. 76%，表明此方法可行.

2. 5數據處理與工藝優選用綜合加權評分法，總固形物量和小檗堿含量9次試驗的最大值為100分，將各指標成分的總量分別轉換為評分值，總固體得率的加權系數為0. 4，小檗堿含量的加權系數為0. 6，將每次試驗的各指標成分的評分值乘以相應的加權系數后求和，得綜合評分值，以綜合評分值計算正交試驗結果，并進行方差分析，結果見表2、3.

表2　水提正交試驗設計及結果

表3　方差分析

結果表明，由直觀分析可知因素主次為提取次數( A)＞提取時間( C)＞水用量( B).方差分析表明，三個因素對試驗結果均有顯著的影響，確定最佳提取工藝為:每次分別加10倍量水，提取1. 5K，回流提取2次，即A2B2C3.

2. 6最佳工藝驗證按正交試驗結果的最佳工藝驗證試驗3次，結果見表4.

表4　最佳工藝驗證試驗結果

驗證試驗結果表明，三個平行試驗的綜合評分結果與正交試驗結果之間差異不大，提示所優選的提取工藝條件基本穩定.

3　討論

本文選擇將香元消痔巴布貼中黃柏、槐花、地榆、元胡等水提取進行工藝研究，根據各藥材化學成份性質分析，黃柏中的主要有效成分鹽酸小檗堿為季銨鹽易溶于水，課題組經過多次試驗顯示，鹽酸小檗堿轉移率較高，最后確定以提取液中總固形物含量和小檗堿的含量為評價指標，對提取工藝進行優選，最佳提取工藝為:每次分別加10倍量水，提取1. 5h，回流提取2次，即A2B2C3.

通過驗證該提取工藝，用高效液相色譜法測定小檗堿的含量，數據準確、方法簡便、重復性好，能有效地控制該制劑的質量，而且該工藝生產成本低、生產工藝穩定、有效成分提取率高，適合于醫院制劑小規模的生產.

參考文獻

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010: 286－287．

[2]楊明艷，馬相鋒，李洪玉，等．正交設計法優選消癖健乳巴布膏水提工藝[J]．現代醫院，2012，12 ( 1) : 60－62．

[3]尹華，章建華，許叢輝，等．三黃散瘀巴布劑中黃柏的提取工藝研究[J]．中華中醫藥學刊，2011，29 ( 2) : 235－237．

收稿日期:( 2014. 11. 19)

作者簡介:李文兵( 1972－)，廣東湛江人，主任藥師，主要從事醫院藥學研究.E－mail: liwenbing312@163. com

基金項目:廣東省中醫藥局立項資助科研課題(編號: 20131117).

【文章編號】1007－8517 ( 2015) 04－0017－03

【文獻標志碼】A

【中圖分類號】R283. 6