HPLC法測定忍冬藤顆粒中牛蒡苷的含量*

郭　敏，徐世紅，李季文，姜　華

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

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·藥學(xué)研究·

HPLC法測定忍冬藤顆粒中牛蒡苷的含量*

郭敏，徐世紅，李季文，姜華

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

摘要目的：建立忍冬藤顆粒中牛蒡苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(25∶75)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫30 ℃進(jìn)行檢測。結(jié)果：牛蒡苷的線性范圍為15.00～300.00 mg/L (r=0.992 1)，平均加樣回收率為99.75%(RSD=1.11%)。結(jié)論：該法穩(wěn)定、快速、簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于忍冬藤顆粒中牛蒡苷的含量測定。

關(guān)鍵詞忍冬藤顆粒/藥效學(xué)；牛蒡苷；含量測定；HPLC

忍冬藤顆粒是由忍冬藤、牛蒡子、黃柏、木瓜、川芎、僵蠶、地龍、蒲公英、澤瀉等9味中藥組成，具有清熱利濕、通絡(luò)消腫之效，臨床主要用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和急性炎癥的治療。其君藥牛蒡子性味苦、寒，具有疏散風(fēng)熱、宣肺透疹、解毒利咽之效，用于治療風(fēng)熱感冒、麻疹、風(fēng)疹等[1]?，F(xiàn)代藥理研究顯示，牛蒡子的主要化學(xué)成分為牛蒡苷[2-7]，是其抗炎、抗菌及免疫調(diào)節(jié)功能的有效成分[5]，故采用HPLC對忍冬藤顆粒中的牛蒡苷進(jìn)行含量測定[8]。

1藥品、試劑與儀器

忍冬藤顆粒(批號 140301，140302，140901，140902，141201，141202，141203，150401，150402，150403)，由甘肅省中醫(yī)院中藥研究所提供。牛蒡苷對照品，供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供，批號110819-200404；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。1525高效液相色譜儀，包括2487紫外可見檢測器、1525自動進(jìn)樣器等，美國Waters公司產(chǎn)品； Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，美國Agilent 公司產(chǎn)品；B-220旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；10-1112超聲波清洗儀，寧波新芝生物科技股份有限公司產(chǎn)品；JY4001型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；HHS21-4B電熱恒溫水浴鍋，上海醫(yī)療器械五廠產(chǎn)品； DL-5-B臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-水(25∶75)，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣體積10 μL，檢測波長280 nm，柱溫30 ℃。

2.2對照品溶液的制備

取牛蒡苷化學(xué)對照品適量，精密稱定。用甲醇定容于25 mL棕色量瓶中，制成750 mg/L的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取忍冬藤顆粒適量，研細(xì)，混勻，取粉末約0.1 g，精密稱定，加甲醇15 mL，超聲提取2次，每次30 min，合并提取液，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ莸?5 mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.4提取溶劑考察

采用單因素考察的方法。取忍冬藤顆粒適量，研細(xì)，混勻，取粉末3份，每份約0.1 g，精密稱定;分別加甲醇、乙醇、乙酸乙酯各15 mL，超聲提取2次，每次30 min；合并提取液，濾過；濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ莸?5 mL量瓶中，作為供試品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖，計(jì)算牛蒡苷含量，結(jié)果見表1。

2.5線性關(guān)系考察

精密吸取2.2項(xiàng)下對照品溶液0.2,0.5,1.0,2.0,4.0 mL，分別置10 mL棕色量瓶中，用甲醇定容，搖勻，按2.1項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣10 μL，測定，記錄色譜圖。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得到回歸方程為：Y=0.000 4X+0.01，r=0.992 1，線性范圍為15.00～300.00 mg/L。結(jié)果表明：牛蒡苷在此質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75 mg/L的牛蒡苷對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL ；以2.1項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖；牛蒡苷峰面積的RSD值為1.97%。結(jié)果表明：儀器進(jìn)樣精密度較好。

2.7專屬性試驗(yàn)

分別取對照品溶液、供試品溶液及按供試品溶液制備方法制備的缺牛蒡子陰性樣品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件操作，記錄色譜圖。結(jié)果：供試品與對照品溶液均在相同保留時(shí)間出現(xiàn)吸收峰，缺牛蒡子陰性溶液無此峰，忍冬藤顆粒中除牛蒡子外其他藥物對測定無干擾。本試驗(yàn)條件下牛蒡苷與其他組分可達(dá)基線分離，見圖1。

2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)

取批號為150401的忍冬藤顆粒，研細(xì)、混勻；取粉末6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，記錄色譜圖；計(jì)算牛蒡苷的平均含量為 26.96 mg/g，RSD值為1.66 %。結(jié)果表明：方法重現(xiàn)性良好。

2.9回收率試驗(yàn)

取批號為150401的忍冬藤顆粒(牛蒡苷含量按26.96 mg/g計(jì))，研細(xì)，混勻；取粉末約50 mg，精密稱定，精密加入750.00 mg/L的牛蒡苷對照品溶液0.9，1.8，3.6 mL，按2.1項(xiàng)下方法，每個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)制備3份加樣回收供試品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2.10樣品含量測定

取10批忍冬藤顆粒，研細(xì)，混勻，取粉末適量，精密稱定，按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，測定，計(jì)算10批樣品中牛蒡苷的平均含量為26.90 mg/g，RSD值為0.05%。結(jié)果見表3。

3小結(jié)

本研究在選擇提取溶劑時(shí)，采用單因素考察的方法，比較了甲醇、乙醇、乙酸乙酯的提取效果，結(jié)果甲醇提取率高，牛蒡苷與其他成分分離較好，故選用甲醇作為牛蒡苷含量測定的提取溶劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以本文方法進(jìn)行忍冬藤顆粒中牛蒡苷的含量測定，方法簡單可靠，重復(fù)性好，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

4參考文獻(xiàn)

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(編輯陶珠)

文章編號:1001-6910(2016)04-0066-03

中圖分類號:R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

doi:10.3969/j.issn.1001-6910.2016.04.31

通信作者：姜華，主任藥師，huajiang931@sina.com

* 基金項(xiàng)目：蘭州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(生物醫(yī)藥)(2013-4-86)

收稿日期：2015-08-20；修回日期：2016-01-26