熒光法在生物樣品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用進(jìn)展

蔣 瑩

（遼寧省職業(yè)病防治院，遼寧 沈陽 110005）

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熒光法在生物樣品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用進(jìn)展

蔣 瑩

（遼寧省職業(yè)病防治院，遼寧 沈陽 110005）

【摘要】目前，熒光法由于它的靈敏度相對(duì)較好，特異性強(qiáng)、容易操作、定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)，被廣泛地應(yīng)用到生物樣品理化檢測領(lǐng)域。國家標(biāo)準(zhǔn)、職業(yè)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等也在不斷增強(qiáng)，修訂的頻率更是不斷加快。依據(jù)已有標(biāo)準(zhǔn)中生物樣品所采用的熒光檢測方法，進(jìn)行了一個(gè)簡單的總結(jié)。分析熒光法在生物樣品檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用。提出了對(duì)熒光檢測的未來發(fā)展方向的展望。以供讀者參考。

【關(guān)鍵詞】熒光法；生物樣品；理化檢測

在工業(yè)化高度發(fā)展的同時(shí)，我國在大范圍的運(yùn)用全新的工業(yè)技術(shù)。這些直接導(dǎo)致我國毒物中毒事件屢見不鮮，引起全國高度關(guān)注。因?yàn)樗鼘?duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)和諧穩(wěn)定有重要影響，它更直接與千千萬萬人民健康安全息息相關(guān)。熒光法檢測技術(shù)是通過輻射躍遷理論的高級(jí)檢測方法［1］。在檢測生物樣品時(shí)，工作人員一般都是將樣品放在特定波長的激光下檢測，因?yàn)閮H限于特定結(jié)構(gòu)在這種條件下才會(huì)發(fā)出光芒。該波長由生物樣品中毒物種類所決定，而反應(yīng)強(qiáng)度又與其濃度密切相關(guān)。檢測人員也是根據(jù)這兩個(gè)特點(diǎn)進(jìn)行定性、定量檢測。熒光檢測具有強(qiáng)大的優(yōu)越性，與傳統(tǒng)的檢測方法相比，熒光法檢測生物樣品更加科學(xué)方便，更加具有準(zhǔn)確度，更加具有選擇性，更加具有靈敏性能［2-3］。這種高級(jí)檢測方法已在生物樣品檢測范圍使用，但生物樣品熒光檢測法在我國檢測標(biāo)準(zhǔn)中卻沒有形成完整詳盡的論述。該文章總結(jié)了現(xiàn)代標(biāo)準(zhǔn)體系中我國所普遍運(yùn)用的熒光檢測方式，如原子熒光分析法、熒光分光光度法等。

1 分子熒光法在檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用

出現(xiàn)熒光所需要具備的前提：第一就是分子它擁有吸收激光的構(gòu)造；其次，分子具有比較高的量子效率，其內(nèi)涵就是熒光物質(zhì)在吸收光能之后所發(fā)射的熒光量子數(shù)量以及所吸收的激發(fā)光量子數(shù)值都相對(duì)比較多。我國在生物樣品檢測中已經(jīng)廣泛使用熒光分光光度法、薄層色譜-熒光法等方法。

1.1熒光分光光度法：我們可以直接把生物樣品放入熒光檢測比色器皿中，然后再通過其所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量檢測，這也是我國所能運(yùn)用的生物檢測中最普遍使用的分光光度檢測方法。無分離直接檢測方法對(duì)前期處理凈化要求也相當(dāng)嚴(yán)格，因此熒光分光光度法就常常與層析凈化法相結(jié)合，共同使用［4-5］。

鑒于以上特點(diǎn)，熒光分光光度法通常作為檢測標(biāo)準(zhǔn)的篩選方法，即對(duì)大批量的樣品進(jìn)行初步篩選，對(duì)于無熒光信號(hào)的可直接鑒定為陰性樣品，有熒光信號(hào)的進(jìn)行再次檢測，采用高效液相色譜-熒光法或高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行進(jìn)一步分離和結(jié)構(gòu)解析，從而實(shí)現(xiàn)單一化合物的精確定性定量檢測。

1.2薄層色譜-熒光法：薄層色譜—熒光法是必須要在實(shí)現(xiàn)初步分離的步驟后才能進(jìn)行的一種半定量檢測步驟。首先要將生物樣品進(jìn)行提取、濃縮等完成之后，將生物樣品放置于薄層色譜板上面，然后通過已經(jīng)檢測好濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行參照。有以下幾點(diǎn)根據(jù)：第一，樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液的遷移距離相同；第二，樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液具有相同的熒光色度，依據(jù)這一點(diǎn)，我們可以判斷樣品是否含有我們所需要研究的化合物。第三，樣品熒光強(qiáng)度如果比標(biāo)準(zhǔn)溶液要低的話，那么樣品的含量就低于檢測的限度；第四，如果樣品比標(biāo)準(zhǔn)溶液高，那么我們就可以通過對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，使樣品強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)溶液強(qiáng)度保持基本一致，然后通過稀釋的倍數(shù)來計(jì)算樣品的本身的溶度。如果樣品中出現(xiàn)熒光雜質(zhì)，我們就可以通過橫向、縱向分離雜質(zhì)，再對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行檢測。我們?cè)跈z測生物樣品中抗血凝鼠藥時(shí)廣泛運(yùn)用其方法。

1.3高效液相色譜-熒光法：將高效液相色譜與熒光檢測器串聯(lián)，對(duì)待測樣品進(jìn)行基線分離后， 導(dǎo)入流通池進(jìn)行熒光檢測；當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)中所采用的色譜均為常規(guī)柱反相液相色譜。定量方面，依靠色譜峰高或者峰面積，采用外標(biāo)法即可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量分析；為降低柱外效應(yīng)，流通池體積需與色譜柱規(guī)格相匹配，因此光程相對(duì)于比色皿小，靈敏度稍低于分光光度法。定性方面，該方法雖不能提供結(jié)構(gòu)解析功能，但其綜合了保留時(shí)間和熒光波長兩項(xiàng)指標(biāo)，前處理再結(jié)合免疫親和層析凈化后，具有較大的可信性。目前部分標(biāo)準(zhǔn)將該法作為檢測的第一法，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為第二法，發(fā)現(xiàn)陽性樣品后實(shí)施第二法進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。該法是目前我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)體系中應(yīng)用最廣泛的分子熒光檢測方法，在獸藥殘留、人工色素、真菌毒素等檢驗(yàn)中獲得了普遍應(yīng)用。

2 原子熒光法在生物樣品檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用

原子熒光法主要是存在于原子發(fā)射光譜、原子吸收光譜之間的一種光譜分析技術(shù)。它的主要原理為：將帶有一定濃度的待測元素原子化，接著利用特定頻率的激發(fā)光源輻射，使其達(dá)到高能態(tài)。之后，選擇光輻射的形式將特征波長的熒光進(jìn)行發(fā)射。依據(jù)熒光的波長的特征，可以對(duì)其強(qiáng)度進(jìn)行定量。其一般特征為：靈敏度強(qiáng)、幾乎無干擾、進(jìn)樣量相對(duì)較少，被廣泛應(yīng)用到生物樣品理化檢測中。

2.1氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法：在一定條件下，砷、硒、碲、鉛、錫等八種元素，能夠被還原成氣態(tài)氫化物。這些氫化物的沸點(diǎn)都＜0 ℃，型選擇性研究［J］.中國新藥與臨床雜志，2010，29（1）:45-49.

［10］ 李娟，何海霞，丁黎，等.苯環(huán)喹溴銨長期經(jīng)鼻給藥對(duì)小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的影響［J］.中國新藥與臨床雜志，2011，30（7）:500-504.

［11］ 孫魯寧，丁黎，嚴(yán)拯宇，等.LC-MS/MS法研究苯環(huán)喹溴銨對(duì)大鼠肝微粒體CYP450酶的抑制作用［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，44（2）:134.

［12］ 李練兵，呂靜，馬明福，等.苯環(huán)喹溴銨染毒的大鼠一般生殖毒性試驗(yàn)［J］.毒理學(xué)雜志，2007，21（4）:317.

［13］ 李正，陳小平，李娟.苯環(huán)喹溴銨噴鼻劑的大鼠毒性作用研究［J］.中國藥業(yè)，2009，18（9）:6-7.

［14］ Li J，He HX，Zhou YD，et al.Subchronic toxicity and toxicokinetics of long-term intranasal administration of bencycloqiudium bromide: A 91-day study in dogs［J］.Regulat Toxicol Pharmacol，2011，59（3）:343-352.

中圖分類號(hào)：R9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-8194（2016）04-0045-02