標本稀釋對乙型肝炎病毒核心抗體檢測結果的影響

康素花 陳俊偉 張春山

標本稀釋對乙型肝炎病毒核心抗體檢測結果的影響

康素花 陳俊偉 張春山

【摘要】目的 探討標本稀釋對乙型肝炎病毒核心抗體檢測結果的影響。方法 收集ELISA初篩試驗HBcAb結果陽性標本200例，其中HBsAg、HBeAg或HBeAb、HBcAb陽性標本94例設為乙肝攜帶組，HBsAb或HBeAb、HBcAb陽性標本106例設為健康組。分別將待測血清作1：30倍稀釋，再用ELISA法進行HBcAb的檢測。結果 94例乙肝攜帶組標本稀釋后HBcAb結果與原倍結果一致，仍為陽性，P＞0.05，差異不具有統計學意義；106例健康組標本經稀釋后21例結果陽性，85例結果陰性，P＜0.05，差異具有統計學意義。結論 用ELISA法直接稀釋檢測標本的核心抗體易造成低濃度的標本結果呈現假陰性，造成核心窗口期患者的漏檢，不僅給臨床診斷帶來麻煩，也會對安全輸血造成很大的隱患，建議在基層醫療機構開展兩對半檢測應采用原倍血清進行試驗。

【關鍵詞】乙型肝炎病毒；核心抗體；標本稀釋；酶聯免疫吸附試驗；結果影響

作者單位：361000廈門市湖里區江頭街道社區衛生服務中心檢驗科

To Explore the Effect of Specimen Dilution on Detection of Hepatitis B Virus Core Antibody

KANG Suhua CHEN Junwei ZHANG Chunshan Xiamen City Huli District Jiangtou Street Community Health Center Laboratory, Xiamen 361000, China

[Abstract]Objective To explore the effect of specimen dilution on the detection of hepatitis B virus core antibody. Methods Selected 200 cases with HBcAb positive specimens at the screening tests of the ELISA assay, Wherein the HBsAg, HBeAg or HBeAb, HBcAb positive specimens of 94 cases of design for hepatitis B virus carrying group, HBsAb or HBeAb, HBcAb positive specimens of 106 patients with design for the healthy group. Then make 1:30 times dilution of serum respectively, and detected the HBcAb by the ELISA assay. Results HBcAb in 94 cases of hepatitis B virus carrying group were consistent with the results of the original, and remained positive, P>0.05, had no difference statistically significance, HBcAb in 106 cases of healthy group, 21 cases were positive and 85 cases were negative, P<0.05, had difference statistically signifiance. Conclusion The low concentration of the specimens will present false negative results by use ELISA assay direct dilution to detect hepatitis B virus core antibody, it is easy to cause patients missing who just in the core window. The ending not only make trouble for clinical diagnosis, but also can cause a lot of hidden trouble to the safety of blood transfusion, suggest that in the primary medical institutions to carry out the hepatitis B virus antibody test should better use the original times serum.

[Key words]Hepatitis B virus, Core antibody, Specimen dilution, ELISA, Results effect

乙型肝炎病毒（HBV）是乙型肝炎的病原體。HBV在全世界范圍內廣泛流行，全世界半數以上人口被乙型肝炎病毒感染過。我國是乙肝的高發區，累計HBV感染人群達60%以上[1]。HBcAb檢測是乙型肝炎流行病學調查的良好指標，而酶聯免疫吸附試驗（ELISA）競爭法是檢測HBcAb的常用方法，因方法簡便、速度快捷而在臨床實驗中普遍應用[2]。目前市場上常用的ELISA法檢測HBcAb的試劑盒通常是建議將原倍血清檢測結果用于流行病學的調查，而臨床診斷則需要用1：30倍稀釋的標本進行檢測。但在實際的工作中，我們發現1：30倍稀釋后的標本檢測結果會導致許多低濃度的HBcAb標本呈假陰性。通過對200例原倍HBcAb陽性的標本進行1：30倍稀釋后檢測，比較200例標本稀釋前后的結果差異，探討臨床工作中開展HBcAb檢測是否需要稀釋，具體報告如下。

1　材料與方法

1.1 標本來源

選取門診用ELISA法檢測HBcAb結果陽性的標本200例，其中HBsAg、HBeAg或HBeAb、HBcAb陽性標本94例設為乙肝攜帶組，年齡7～65歲，平均（42.3±1.8）歲；HBsAb、或HBeAb、HBcAb陽性標本106例設為健康組，年齡11～72歲，平均（36.8±2.1）歲。兩組在年齡、性別上對比，P＞0.05，差異不具有統計學意義。

1.2 儀器與試劑

英科新創（廈門）科技有限公司HBcAb試劑盒，BIORAD 1 575自動微孔洗板機，BIORADiMark酶標儀，電熱恒溫水浴箱，移液器，定時器。

1.3 方法

將待測的200份血清分別用生理鹽水作1：30倍稀釋，按照試劑盒說明書進行檢測，每板均設置陰陽性對照，顯色后在酶標儀上進行結果判讀。

1.4 統計學方法

采用SPSS13.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05，差異具有統計學意義。

2　結果

94例乙肝攜帶組標本經稀釋后HBcAb結果與原倍結果一致，均為陽性，P＞0.05，差異不具有統計學意義；106例健康組標本經稀釋后21例結果陽性，85例結果陰性，P＜0.05，差異具有統計學意義。見表1。

3　討論

血液中的HBcAb是HBcAg的相應抗體，由于HBcAg主要存在于病毒顆粒的核心，游離的HBcAg極少，所以血液中檢測不到HBcAg，也造成HBcAb對乙肝沒有保護作用[3]，但是HBcAg具有很強的免疫原性，HBV感染者幾乎均可以檢測出HBcAb。因此HBcAb的測定有助于診斷HBsAg陰性的輕型和亞臨床型乙型肝炎患者，亦可有助于篩選獻血員。它是HBV感染后血清中最早出現的抗體，繼HBsAg和HBeAg之后就可以在血清中檢出，早期以IgM為主，急性感染恢復期和慢性持續性感染以IgG型為主。其持續時間長，甚至終身存在。高濃度的HBcAb見于急、慢性肝炎和乙肝攜帶者，并表明HBV復制可能仍活躍，血清具有傳染性。低濃的HBcAb則表示既往感染過HBV或處于感染的早期，不排除具有傳染性[4]。臨床上常遇到單項HBcAb陽性的情況，可見于：（1）既往感染、HBsAb濃度太低檢出不出。（2）低水平的病毒攜帶，HBsAg因效價低而檢測不出。（3）核心窗口期，血清中HBsAg 和HBeAg消失，HBsAb尚未出現，此時可出現單項的HBcAb陽性。（4）被動獲得HBcAb，如經輸血和胎盤獲得。（5）HBcAb假陽性。所以HBcAb檢測結果的可靠性顯得尤為重要，但很多實驗室的工作人員碰到單項HBcAb陽性的結果往往是直接將陽性改為陰性，這種做法是極其不負責任的。乙肝攜帶組標本經稀釋后仍為陽性，即為急、慢性肝炎或乙肝攜帶者的標本，他們血液的HBcAb濃度比較高，經稀釋后仍能在競爭中占優勢，與包被在微孔上的抗原相結合，顯示陽性結果。對照的健康組為既往感染者，HBcAb的效價隨著時間延長不斷降低，經1：30稀釋后的濃度完全失去競爭優勢，試驗結果顯示這部分標本多顯示假性陰性。當然對于這部分既往感染者其檢測出來的HBcAb結果對并不會臨床的診斷造成嚴重的影響，但是對于那些單項HBcAb陽性的患者，如果只是一刀切地用1：30倍稀釋來檢測，則很可能導致處于核心窗口期的患者出現漏診，對臨床的確診、對獻血者的篩查以及院感的監控都會造成不良后果。因此對于基層醫療機構，在科室設備比較不完善的情況下采用一刀切稀釋檢測核心抗體的做法并不合適，對于單項HBcAb陽性的患者應建議一段時間后復查兩對半或去大型醫療機構檢測HBV-DNA來最后確診。

表1　兩組標本稀釋前后的陽性率比較

參考文獻

[1] 張卓然，倪語星. 臨床微生物學和微生物檢驗[M]. 北京：人民衛生出版社，2003：374.

[2] 鄒映東，林云，張興宗，等. 不同稀釋及洗板方式對競爭法檢測乙肝核心抗體結果的影響[J]. 國際檢驗醫學雜志，2013，34（12）：1569-1570.

[3] 邱豫新. 841人乙肝核心抗體（抗HBc）測定[J]. 廣東衛生防疫資料，1985（4）：5-8.

[4] 張碧瑩，邢延芳，王珍珠，等. 血清稀釋與否對檢測乙型肝炎核心抗體結果的影響[J]. 中國實驗診斷學雜志，2014，18（3）：428-430.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.19.022

【文章編號】1674-9308（2015）19-0031-02

【文獻標識碼】B

【中圖分類號】R446.1