高效液相色譜法測定纈沙坦膠囊的溶出度

楊　靜,徐軼飛,苗愛東，尹娜娜, 王文習

[作者單位]　100071北京，北京軍區聯勤部藥品儀器檢驗所(楊靜、徐軼飛、苗愛東)，266101山東 青島，青島市黃海制藥有限責任公司(尹娜娜), 050081 石家莊，白求恩國際和平醫院藥劑科(王文習)

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高效液相色譜法測定纈沙坦膠囊的溶出度

楊靜,徐軼飛,苗愛東，尹娜娜, 王文習

[作者單位]100071北京，北京軍區聯勤部藥品儀器檢驗所(楊靜、徐軼飛、苗愛東)，266101山東 青島，青島市黃海制藥有限責任公司(尹娜娜), 050081 石家莊，白求恩國際和平醫院藥劑科(王文習)

[摘要]目的建立高效液相色譜法(HPLC)測定纈沙坦膠囊溶出度的方法。方法采用《中國藥典》2010年版中纈沙坦膠囊溶出度測定條件，以磷酸鹽緩沖液(調節pH 6.8)1000 ml為溶出介質，100 r/min，30 min取樣。液相色譜柱為Extend C18(4.6 mm×250 mm,5 μm), 以乙腈-水-冰醋酸(500:500:1)(v/v)為流動相，檢測波長：230 nm,流速：1.0 ml/min，柱溫：30℃。結果纈沙坦在0.004～0.06 mg/ml范圍內線性關系良好，線性方程為Y=28.771X-28.145(r=0.9997,n=8),平均回收率為101.27%(RSD=1.07%，n=9)。HPLC與紫外-可見分光光度法(UV)溶出度測定結果有一致性。結論高效液相色譜法測定纈沙坦膠囊溶出度的方法準確度高、簡便、快速，適用于該制劑的質量控制。

[關鍵詞]纈沙坦膠囊；溶出度；高效液相色譜法

纈沙坦膠囊是一種特異性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，用于治療各類輕至中度高血壓。纈沙坦的主要劑型有膠囊、片劑和分散片，膠囊劑最為常用。《中國藥典》收載的對其溶出度的檢查方法為紫外分光光度法[1]，而含量測定、有關物質采用的均是高效液相色譜法(HPLC)，目前已見其它藥物采用HPLC測定溶出度的報道[2-7]，本文采用HPLC不需稀釋，僅通過調節進樣量，對6個不同廠家、2個不同規格的纈沙坦膠囊進行了溶出度測定，并與紫外分光光度法測定溶出度的結果進行了比較，結果基本一致。

1儀器和試藥

Agilent1200高效液相色譜儀和化學工作站(美國Agilent公司)，UDT-812GS溶出儀(鎮江祿根儀器有限公司)，UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津公司)，MettLerAG285型電子天平(瑞士梅特勒公司)。纈沙坦對照品(批號：100651-201203，含量：99.8%，中國食品藥品檢定研究院生產)；纈沙坦膠囊(6個不同廠家的產品批號分別是：A廠：1411023；B廠：140406；C廠：140104；D廠：141001；E廠：X1766；F廠：20141229。其中A、B、C、D、E廠的產品規格均為80 mg,F廠產品規格為40 mg)；乙腈(Fish公司，色譜純)；水為自制超純水；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、冰醋酸均為分析純。

2方法與結果

2.1溶液的制備對照品溶液的制備：精密稱取60℃減壓干燥2 h的纈沙坦對照品0.02004 g于50 ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液溶解并定容，即得濃度為400 μg/ml的對照品儲備液。準確量取5 ml于50 ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液定容得到每1 ml含40.08 μg的對照品溶液。供試品溶液的制備：取供試品6粒，分別投入6個溶出杯中，按照《中國藥典》2010年版中纈沙坦膠囊溶出度測定條件，以磷酸鹽緩沖液(調節pH 6.8)1000 ml為溶出介質，轉速100 r/min，溫度(37±0.5)℃，分別于5、10、15、20、25、30 min時，取溶出液10 ml(同時補充10 ml 37℃的溶出介質)，過濾，去除初濾液2 ml，取續濾液即得供試品溶液。6個不同廠家的供試品分別依法操作。

2.2色譜條件與系統適應性實驗色譜柱：Agilent Extend C18(4.6 mm×250 mm)；流動相：乙腈-水-冰醋酸(500:500:1)(v/v)；流速：1.0 ml/min；檢測波長230 nm；柱溫：30℃；進樣20 μl(A、B、C、D、E廠規格為80 mg的產品：進樣10 μl)。理論板數按纈沙坦峰計算應不低于4000。取“2.1”項下對照品溶液和供試品溶液進樣分析，見色譜圖1。

2.3方法驗證

2.3.1線性關系考察：分別準確移取“2.1”項下對照品儲備液0.1、0.2、0.4、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 ml至10 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，得到濃度分別為4、8、16、20、30、40、50、60 μg/ml的系列對照溶液，按“2.2”項下色譜條件進行測定，以纈沙坦對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線。回歸方程為Y=28.771X-28.145，r=0.9997。表明纈沙坦濃度在4～60 μg/ml范圍內與峰面積線性關系良好。

2.3.2精密度試驗：取纈沙坦線性考察系列溶液中濃度為40 μg/ml的對照品溶液，按上述色譜條件，進樣20 μl，連續進樣6次，測得的峰面積的RSD為0.44%。

2.3.3穩定性試驗：取濃度為40 μg/ml的對照品溶液，室溫放置，分別于制備后的0、2、4、6、8、10、12 h按上述色譜條件進樣測定，計算結果RSD為0.53%。表明在此濃度下纈沙坦在12 h內穩定。

圖1　纈沙坦液相色譜圖A為對照品，B為供試品，1為纈沙坦峰

2.3.4回收率試驗：按照“2.4.1”項下方法，對供試品B進行溶出度檢查，于30 min時，取9份理論濃度為80 μg/ml的溶出液5 ml于10 ml量瓶中，平均分為3組，每組分別精密加入對照品儲備液0.6、1.0、1.4 ml，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，取續濾液按上述色譜條件進樣10 μl進行測定，計算對照溶液的實際加入量及回收率。低、中、高3種濃度的回收率結果見表1。

表1　不同濃度下供試品溶出度回收率測定結果

2.4兩法測定溶出度結果及溶出曲線比較

2.4.1溶出度檢查:按《中國藥典》[1]方法，以磷酸鹽緩沖液(調節pH6.8)1000 ml為溶出介質，溫度37℃，轉速100 r/min，分別于5、10、15、20、25、30 min時，取溶出液10 ml，過濾，去除初濾液2 ml，取續濾液5 ml至25 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。準確移取對照品儲備液4 ml至100 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為16 μg/ml對照溶液，照紫外-可見分光光度法，在250 nm的波長處測定吸光度，分別計算在6個不同取樣時間點的溶出量。另取“2.1”制備的供試品溶液，按照“2.2”色譜條件進樣測定，以纈沙坦峰面積按外標法計算6個不同取樣時間點的溶出量。6個不同廠家的供試品分別同法測定。

2.4.2兩法的溶出參數比較:HPLC與紫外-可見分光光度法(UV)溶出度測定結果見表2，經t檢驗，兩種方法獲得的溶出參數差異無統計學意義(t=0.313，P=0.7558)。

表2　兩種方法測定纈沙坦膠囊溶出度結果比較(%)

2.4.3兩法溶出曲線考察情況見圖2。

圖2　6個廠家纈沙坦膠囊HPLC和UV法的溶出曲線HPLC為高效液相色譜法，UV為紫外-可見分光光度法

3討論

6廠家產品均為國產，溶出過程中膠囊殼全部溶解無殘留，雖溶出曲線存在差異，但30 min時溶出值均達到80%，符合藥典規定。B、C、E、F廠產品溶出迅速，5 min內溶出值即達到90%以上，從試驗結果可看出，兩種方法獲得的溶出度值基本一致，HPLC獲得的溶出曲線更加平穩。方法學驗證結果表明：采用HPLC測定纈沙坦膠囊的溶出度結果準確、科學可靠，不需稀釋，取樣濾過后直接進樣，不僅簡化了操作過程，定量也更為準確，測定結果的精密度更高[8-13]，纈沙坦在本文的色譜條件下峰型較好，數據信息也更加完整、真實，本法中的溶液濃度與藥典中含量測定的濃度一致，可與含量測定同時檢測，既可提高效率、降低成本，對于纈沙坦膠囊的制劑工藝、藥品質量控制也具有重要的意義。

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(收稿時間：2015-09-22修回時間：2015-10-24)

綜述

·論著·

High Performance Liquid Chromatography in Determination of Dissolution of Valsartan Capsules

YANG Jing1, XU Yi-fei1, MIAO Ai-dong1, YIN Na-na2, WANG Wen-xi3(1. Institute for Drug and Instrument Control, Combined Logistic Department of Beijing Military Area Command，Beijing 100071，China； 2. Qingdao Huanghai Pharmaceutical Co., Ltd., Qingdao, Shandong 266101, China； 3. Department of Pharmacy, Bethune International Peace Hospital of PLA， Shijiazhuang 050000, China)

[Abstract]ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method to detect dissolution of Valsartan capsules. MethodsBased on detection conditions in the Chinese Pharmacopoeia (2010 edition), the dissolution of Valsartan capsules was detected by phosphate buffer (pH 6.8) 1000ml as the dissolution medium with 100 r/min, and samples were obtained after treatment for 30 min. Liquid chromatographic column was Extend C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm), mobile phase was composed of acetonitrile， water and glacial acetic acid [500∶500∶1 (V/V)], and the wavelength was 230 nm. The flow rate was 1.0 ml/min with 30℃ column temperature. ResultsValsartan showed good linear correlation in the range of 0.004-0.06 mg/ml, and the linear equation was Y=28.771X-28.145 (r=0.9997, n=8), and the average recovery was 101.27% [relative standard deviation (RSD)=1.07%, n=9]. The HPLC had concordance with ultraviolet and visible spectrophotometry (UV) in detection of the dissolution. ConclusionHPLC method in determination of the dissolution of Valsartan capsule is accurate, simple and quick, and it can be applied to the quality control of the preparation.

[Key words]Valsartan capsules; Dissolution; High performance liquid chromatography

[DOI]10.3969/j.issn.2095-140X.2015.12.025

[文獻標志碼][中國圖書資料分類號]R446.1A

[文章編號]2095-140X(2015)12-0109-04

[通訊作者]王文習：E-mail：64462039@qq.com