白血病患者血清VEGF和sFas水平及其相關性分析

杜小紅，陳列光，李空飛，張碧波

白血病患者血清VEGF和sFas水平及其相關性分析

杜小紅，陳列光，李空飛，張碧波

目的分析白血病患者血清血管內皮細胞生長因子（VEGF）和sFas水平及二者的相關性。方法運用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法對34例白血病患者行血清VEGF和sFas水平同步檢測，并分析其水平的相關性。結果難治/復發組與初發組VEGF和sFas水平較緩解組及正常對照組高（＜0.05），難治/復發組較初發組高（＜0.05），緩解組VEGF和sFas水平與對照組差異無統計學意義（＞0.05）。VEGF與sFas呈正相關。結論聯合檢測血清VEGF與sFas水平可用于血病的病理狀態及轉歸的評價。

白血??；血管內皮細胞生長因子；sFas

血管內皮細胞生長因子（VEGF）與血液系統惡性腫瘤存有緊密關聯性，其除了以旁分泌方式促進血管內皮細胞血管新生的作用之外，還可促進其增強化療藥物相應抵抗作用，最終產生細胞耐藥。Fas/FasL為一對膜蛋白分子，在腫瘤細胞凋亡進程中起到一定作用[1]?？扇苄訤as（sFas）是一種跨膜區缺乏，且具有可溶性的Fas分子，能以競爭性方式，與Fas形成FasL，進而阻斷由Fas介導所造成的細胞凋亡。白血病細胞多藥耐藥（MDR）是造成白血病化療失敗關鍵性因素，而MDR的發生，則與凋亡調控障礙緊密相關[2]。在白血病的發生與發展中，sFas、VEGF與之密切相關[2-3]，但在二者聯合檢測方面研究卻較少。本研究采用雙抗夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）法測定白血病患者的VEGF和sFas水平，并分析了二者相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年3月至2016年3月在寧波大學附屬鄞州醫院診治的白血病患者34例，排除嚴重活動性感染、糖尿病、肝腎功能異常及糖尿病者。其中男18例，女16例；年齡16～81歲，平均（36.4±2.6）歲。初發12例，難治/復發9例，完全緩解/部分緩解13例。另選取同期健康體檢者30例，設為對照組，其中男14例，女16例；年齡20～69歲，平均（25.4±1.6）歲。

1.2 標本采集于清晨空腹狀態下抽取靜脈血5 ml，不抗凝，并于2 h內用離心機2 000 r/min離心15 min，取血清標本，并將標本完成分裝，于―18℃凍存，不可反復凍融。

1.3 sFas和VEGF測定運用ELISA法分別對sFas及血清VEGF水平進行測定，選用武漢尚柏生物技術有限公司試劑盒，依據說明書步驟，完成各項操作。選用美國Therrno公司的MuLtiskanMK3，BIO-TEK公司的ELX800酶標儀。平衡血小板數差異所致系統誤差，每份樣本血小板計數（PLT）優化其VEGF測定值，最終將標化值VEGF/PLT（pg/106），作為本次的研究指標。1.4統計方法采用SPSS 19.0統計軟件進行處理，計量資料以均數±標準差表示，多組比較采用方差分析，多重比較采用LSD-檢驗；兩組比較采用檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 sFas、血清VEGF在白血病的表達

難治/復發組、初發組VEGF和sFas水平均高于對照組（均＜0.05）；難治/復發組VEGF和sFas水平高于初發組（均＜0.05）；緩解組與對照組差異無統計學意義（＞0.05）。見表1。

2.2 sFas、血清VEGF與乳酸脫氫酶（LDH）的關系LDH中位值設為188U/L，將患者分為A組（LDH≤188 U/L）和B組（LDH＞188 U/L），A組sFas、VEGF/ PLT低于B組（均＜0.01）。見表2。

2.3 sFas與血清VEGF的相關性VEGF與sFas呈正相關（=0.662，＜0.01）。

3 討論

盡管化療方案和新化療藥物的日益增多，但諸多患者依然存有不同程度的細胞耐藥狀況，究其原因多為白血病細胞對化療藥物誘導抵抗的細胞凋亡。

VEGF作為正性血管生成調節因子，具較強的調節功能，其除了與白血病相應發生、發展有關外，還與腫瘤細胞耐藥有關。在凝血過程中，血小板可釋放VEGF，將其融入至血清中，所以對于血小板數目而言，其對血清VEGF水平具有明顯影響。本研究把VEGF/PLT作標化值顯示，難治/復發組血清VEGF水平高于正常對照組和緩解組（＜0.05），而緩解組與對照組差異無統計學意義（＞0.05）。提示VEGF可能與腫瘤細胞耐藥有關。有研究報道，將化療藥物及VEGF加入至CMK86細胞系中孵育，結果在整個未做處理的VEGF對照組中，經VEGF處理的CMK86細胞凋亡分數，所占比重為75%～80%，表明VEGF可抑制化療藥物誘導機制下的CMK86細胞凋亡[4]。有研究報道，在人早幼粒白血病細胞（HL-60）中轉染入VEGF165 cDNA后，HL-60細胞在集落及增殖所形成的活力顯著增加[5-6]。通過抑制VEGF，可提升白血病細胞針對所使用化療藥物的敏感性。

表14 組sFas及血清VEGF水平比較

Fas是一種跨膜糖蛋白，為腫瘤壞死因子的一部分。若Fas與抗Fas相結合，可將死亡信號傳遞給靶細胞內，激活Caspase酶原，造成敏感Fas陽性細胞，出現一定程度的凋亡狀況。如若Fas存有基因轉錄異常，可造成跨膜區出現缺乏Fas蛋白狀況，脫落于細胞膜中，形成sFas，其通過競爭性方式結合于膜Fas，最終便構成了FasL，對Fas介導相應細胞凋亡具有阻斷作用[7]。本研究顯示，難治/復發組與初發組sFas水平均高于對照組（均＜0.05），難治/復發組高于初發組（＜0.05），緩解組與對照組差異無統計學意義（＞0.05）。至此，可將sFas作為凋亡抑制因子，作用于白血病細胞MDR中，當出現持續升高的sFas，提示對化療不敏感，或細胞凋亡機制處于不利啟動狀態，造成細胞耐藥[8-9]。sFas、VEGF與白血病MDR間均存在不同程度的相關性。本研究顯示，白血病患者sFas的表達與VEGF呈正相關（＜0.05），表明二者抗凋亡機制存在一定關系，但仍然具有不清晰的相關機制，需要對其開展深入的研究工作。

表2 兩組sFas、血清VEGF間比較

[1]劉華,梁玉麗.慢性阻塞性肺病患者血清sFas和VEGF濃度的相關性研究[J].中國醫藥導報,2014,11(5):37-40.

[2]王心明,陳云波,賈明庫,等.可溶性Fas與VEGF及TIMP-1表達在乳腺癌淋巴結轉移中的相互關系[J].中國生物制品學雜志,2016,19(6):568-570.

[3]吳琪.CEA、VEGF、sFas聯合檢測在胸腹腔積液鑒別診斷中的作用[J].菏澤醫學?？茖W校學報,2013,23(2):21-22.

[4]金衛群.白血病患者大劑量化療后Ⅳ度骨髓抑制的舒適護理[J].現代實用醫學, 2014,21(1):76-77.

[5]羅偉,冀林華,崔森,等.當歸片對白血病患者血清葉酸、VB12及EPO的影響[J].中國生化藥物雜志,2016(1):56-58,61.

[6]張曉冬,李俊豐,趙倩倩,等.白血病血清吸收光譜的研究[J].激光與紅外,2013,38(3): 267-269.

[7]陳淑霞,王宇宵.白血病患者血清Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、紅細胞生成素及血小板生成素水平的變化[J].中國基層醫藥,2015,18(13):1739-1740.

[8]聶波,楊弘,武坤,等.WT1基因在白血病患者中的表達及臨床意義[J].昆明醫科大學學報,2014,20(4):24-26.

[9]謝麗麗.優質護理對白血病患者化療焦慮抑郁情緒和治療依從性的影響[J].中國繼續醫學教育,2016,8(10):247-248.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.12.009

R733.7

A

1671-0800(2016)12-1565-02

2016-05-20

（本文編輯：孫海兒）

315040寧波，寧波大學附屬鄞州醫院

杜小紅，Email: 1724321190@qq.com