豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定技術(shù)探討

楊 恒

（河南省濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟(jì)源 454650）

豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定技術(shù)探討

楊 恒

（河南省濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟(jì)源 454650）

目的：研究和探討豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌感染的分離培養(yǎng)鑒定的相關(guān)技術(shù)問(wèn)題。方法：從山西省多個(gè)豬場(chǎng)送檢的270例疑似樣品實(shí)施副豬嗜血桿菌檢測(cè)。然后再用瓊脂擴(kuò)散的試驗(yàn)對(duì)分離菌株實(shí)施血清型進(jìn)行鑒別和評(píng)定。結(jié)果：在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株副豬嗜血桿菌，分離率為27.8%。結(jié)論：目前，副豬嗜血桿病有不同程度的感染，有血清1，4、5，12，13型，其中最為流行的是血清4型和血清5型。患上此類疾病跟季節(jié)以及豬的日齡是有關(guān)系的。

豬場(chǎng)；副豬嗜血桿菌；分離鑒定；技術(shù)探討

定居在健康豬的上呼吸道的一種常在菌是副豬嗜血桿菌，它在相應(yīng)的條件下侵入機(jī)體并且引發(fā)病豬的多發(fā)性漿膜炎，關(guān)節(jié)炎以及腦膜炎等疾病，近年來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的越來(lái)越大，患此疾病的病豬也越來(lái)越多，這不僅增加了斷奶到保育階段仔豬的發(fā)病率以及死亡率，也增加了養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。此類疾病現(xiàn)已得到越來(lái)越多的關(guān)注[1]。本文對(duì)相應(yīng)疑似品種采用細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)合多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)對(duì)從山西省11個(gè)市的多個(gè)豬場(chǎng)送檢的270例樣品實(shí)施副豬嗜血桿菌的分離鑒定，然后再用瓊脂擴(kuò)散的試驗(yàn)對(duì)分離菌株實(shí)施血清型進(jìn)行鑒別和評(píng)定，以分析此類疾病的發(fā)生跟季節(jié)以及豬日齡的關(guān)系，了解到副豬嗜血桿菌疾病的流行情況，以達(dá)到對(duì)此病的防控以及治療，具體報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

從山西省11個(gè)市的多個(gè)豬場(chǎng)送檢的270例疑似樣品的病豬，具體是采集它們的鼻拭子以及疑似發(fā)病豬，病死豬或者發(fā)病豬的腦，肺臟，關(guān)節(jié)，心臟等。

1.2 方法

副豬嗜血桿菌的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清是山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所保存提供的。一對(duì)特異引物是由上海生物工程有限公司合成的。其中上游引物是5-GTGATGAGGAAGGGTGGT-GT-3；下游引物為5-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3。通過(guò)無(wú)菌的操作采集了多個(gè)豬場(chǎng)的鼻拭子和疑似副豬嗜血桿菌病的病死豬或者發(fā)病豬的腦，肺臟，關(guān)節(jié)，心臟等。在腫瘤特異性移植抗原培養(yǎng)基上劃線接種NAD和新生的牛血清，把它放在37℃的培養(yǎng)箱中36～72 h，觀察其菌落特征。然后用革蘭氏染色鏡檢驗(yàn)其中圓形，光滑濕潤(rùn)，無(wú)色透明的露珠樣菌落，把檢驗(yàn)出可疑的菌落采取純培養(yǎng)的方式進(jìn)行培養(yǎng)。然后從副豬嗜血桿菌中分離株培養(yǎng)物中提取其DNA，采取直接煮沸的方法[2]。

1.3 觀察指標(biāo)

為了確定各分離株的血清類型，根據(jù)特定的方法制備來(lái)分離菌株的血清學(xué)分型抗原，用各種血清型標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)各種分離株，以此來(lái)進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散的試驗(yàn)。最終統(tǒng)計(jì)副豬嗜血桿菌分離出的陽(yáng)性率。陽(yáng)性率=（陽(yáng)性數(shù)/分離株數(shù)）*100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

組間差異采用ANOVA對(duì)不同時(shí)間以及不同年齡段的豬副豬嗜血桿菌的感染陽(yáng)性率進(jìn)行分析檢驗(yàn)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），調(diào)查分析副豬嗜血桿菌所分離的菌株不同血清型流行病學(xué)的情況。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間的副豬嗜血桿菌分離出菌株的檢測(cè)結(jié)果

在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株為陽(yáng)性。此種疾病發(fā)病率最高的時(shí)候是在每年3，4，10，11，12月份（P<0.05）。由此說(shuō)明，此疾病的發(fā)病率最低是在夏季，其他季節(jié)發(fā)病率都較高。詳見表1。

表1 不同月份副豬嗜血桿菌分離菌株的檢驗(yàn)情況

2.2 不同日齡豬副豬嗜血桿菌感染的情況

對(duì)75份副豬嗜血桿菌陽(yáng)性樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有23例的日齡是0～30日，35例日齡是31～50日，13例日齡是51～80，4例日齡是81日以上。從此統(tǒng)計(jì)可看出，31～50日齡的小豬是副豬嗜血桿菌的主要感染保育所舍的。

3 討論

現(xiàn)在已知的副豬嗜血桿菌的血清型已經(jīng)有15種，與國(guó)內(nèi)外流行的血清型還都不盡相同，所以對(duì)此疾病的防治有很大困難。它是豬上呼吸道的一種常在菌，在特定的條件下會(huì)侵入機(jī)體，從而引起全身性的疾病。其所影響的是2～4周齡的小豬，發(fā)病階段是在斷奶后和保育的時(shí)候。本文研究得知，在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株副豬嗜血桿菌，陽(yáng)性率為27.8%，通過(guò)血清型的鑒別和評(píng)定，顯示有血清1，4、5，12，13型，其中最為流行的是血清4型和血清5型，這跟蔡旭旺等人的研究結(jié)果有一定的不同，也許是因?yàn)榈赜虿煌h(huán)境差異所導(dǎo)致的。本研究還發(fā)現(xiàn)此種疾病發(fā)病率最高的時(shí)候是在每年3，4，10，11，12月份。由此說(shuō)明，此疾病的發(fā)病率最低是在夏季，其他季節(jié)發(fā)病率都較高，并且此種疾病多發(fā)于31～50日齡的小豬。所以通過(guò)本研究可以判定的是此疾病多發(fā)的季節(jié)以及豬的日齡，這為副豬嗜血桿菌病的防治提供了重要線索。

[1]張勇，趙興緒.陜西省規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及敏感藥物篩選[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，（4）.

[2]楊春蕾，池晶晶，張莉.天津部分豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，（3）.

（編輯：尹 云）

S858.28

B

1006-799X(2016)22-0099-02

楊 恒（1987-），男，河南濟(jì)源人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品的檢疫工作和其他有關(guān)動(dòng)物防疫的監(jiān)督管理執(zhí)法工作。