旋光法用于硫酸慶大霉素化學濃度檢測的方法學驗證

曾 莉

（四川省樂山市長征藥業股份有限公司，四川樂山 614006）

旋光法用于硫酸慶大霉素化學濃度檢測的方法學驗證

曾 莉

（四川省樂山市長征藥業股份有限公司，四川樂山 614006）

由于旋光法測定濃度快速且準確的特性，因此在藥品生產質量檢驗中的應用日益廣泛。在硫酸慶大霉素提煉工序成品液的質量控制中，如何確保旋光法應用的切實可行，就需要從線性、重現性、回收率、溫度、專屬性五個方面對該方法進行驗證。

旋光法；線性；重現性；回收率

旋光法是一種很早就出現并應用廣泛地研究分子非對稱性結構的光學方法。由于旋光法所用的儀器簡單，操作方便快速，普遍適用于制藥廠或醫院藥房對中間體的質量控制與快速分析。根據硫酸慶大霉素有旋光性的特點，在該藥品提煉工序成品液的質量控制中，本文將從線性、重現性、回收率、溫度、專屬性五個方面對該方法進行驗證，得出旋光法適用于硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學濃度檢測的結論。

1 旋光法的基本原理

1.1 旋光

普通光波是一種在各個方向上振動的射線，它們與光的傳播方向垂直。如果令其通過一個尼科爾（Nicol）棱鏡（平面偏振片），則只有那些振動方向和棱鏡晶軸平行的射線才能通過。這種只在一特定面上振動的光叫做平面偏振光。一束平面偏振光可以看成是由兩個振幅和速度相同而螺旋前進方向恰好相反的圓偏振成分疊加而成。一般規定，若螺旋前進方向是順時針時，稱為右旋偏振光；反之，若螺旋前進方向是逆時針時，稱為左旋偏振光。由于硫酸慶大霉素結構中含有不對稱的碳原子，具有左旋性質，故可以用旋光儀測定其濃度。

1.2 旋光度

將一束平面偏振光通過介質，若左右旋偏振光在某種介質中的折射率不同，則它們通過介質的速度將不相同，因而由疊加產生的平面偏振光的振動方向也會改變。平面偏振光振動方向的改變相當于原有的振動平面在通過介質后轉了一個角度α，稱為旋光度。在一定的波長和溫度條件下，硫酸慶大霉素溶液濃度的高低與旋光度的大小成正比。

2 旋光法測定儀器、器具和藥品

2.1 儀器

WZZ-2S數字式自動旋光儀（光源為GP20Na-1型鈉光燈），編號L500275，上海精密科學儀器有限公司；PL203型電子分析天平（感量為0.1mg），編號1229050162，梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司。

2.2 器具

100mL容量瓶；50mL容量瓶；燒杯。

2.3 硫酸雙氫鏈霉素原粉藥品

四川長征藥業股份有限公司，批號SC－GM-20161001，生物效價610u/mg（濕品）。

3 旋光法試驗操作及分析

3.1 旋光法測定操作步驟

將樣品放至室溫。打開WZZ-2S數字式自動旋光儀的電源開關，預熱20min，再打開測量開關。將新鮮蒸餾水緩緩注入長1dm的旋光管，使無氣泡存在，蓋上擦干的玻璃片，旋上金屬帽，用紗布擦干外部，放入樣品槽中，蓋上箱蓋，校正零點，復測3次。打開箱蓋，取出空白旋光管，將樣品緩緩注入旋光管中，同上操作，測定樣品旋光度，復測3次，用測得的旋光度查回歸曲線表，即得硫酸慶大霉素的化學濃度。

3.2 線性范圍試驗

3.2.1 認可標準

相關系數R≥0.999 9。

3.2.2 試驗步驟與結果

用硫酸慶大霉素原粉作為標準品，批號SC-GM-20161001，濕品效價610u/mg，精密稱取適量置50mL容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻。配成1萬u/mL、4萬u/mL、7萬u/mL、10萬u/mL、13萬u/mL、16萬u/mL、19萬u/mL的標準溶液，分別在旋光儀上測定旋光值，根據旋光值，作線性回歸方程并計算相關系數。

3.2.2.1 稱量

表1 試樣稱量 g

3.2.2.2 硫酸慶大霉素標準溶液理論濃度的計算

表2 硫酸慶大霉素標準溶液理論濃度

3.2.2.3 硫酸慶大霉素標準溶液旋光值的測定

表3 硫酸慶大霉素標準溶液旋光值

3.2.3 相關性

計算線性回歸方程為Y=5 599.129 1X-60.641 7；相關系數R=0.999 996 11。

3.2.4 試驗結果

試驗結果表明硫酸慶大霉素在1萬u/mL～19萬u/mL范圍內線性關系良好。

3.3 重現性試驗

3.3.1 認可標準

相對標準偏差RSD≤1.0%

3.3.2 試驗步驟與結果

取上述10萬u/mL的硫酸慶大霉素溶液，在旋光儀上連續測5次，記錄下5次所測的旋光值，帶入3.2.3的線性回歸方程計算出實測濃度。

表4 硫酸慶大霉素溶液實測濃度

3.3.3 相對標準偏差

計算5次平均濃度為100 881u/mL，相對標準偏差RSD為0.05%。

3.3.4 重現性結果

符合重現性試驗要求。

3.4 回收率試驗

3.4.1 認可標準

回收率≥99.0%。

3.4.2 試驗步驟與標準

將3.2.2.3所測得的旋光值帶入回歸方程進行計算，得實測硫酸慶大霉素溶液濃度，與標準濃度相比計算回收率。

表5 硫酸慶大霉素溶液回收率

3.4.3 試驗結果

試驗結果表明回收率平均值為100.15%；相對標準偏差為0.51%。試驗結果符合要求。

3.5 溫度對溶液旋光度的影響

3.5.1 認可標準

相對標準偏差≤1.0%

3.5.2 試驗步驟與結果

取3.2.2中的10萬u/mL的硫酸慶大霉素溶液分別在15℃、20℃、25℃、30℃下測定旋光值并計算相對標準偏差：

表6

3.5.3 平均濃度

10萬u/ml的硫酸慶大霉素溶液分別在15℃、20℃、25℃、30℃下測定旋光值經計算平均濃度100 864u/mL，相對標準偏差0.03%。

3.5.4 試驗結論

試驗證明用旋光法測定硫酸慶大霉素，溫度在10～30℃內對測定結果基本無影響。

3.6 專屬性試驗

3.6.1 認可標準

相對標準偏差≤1.0%

3.6.2 試驗步驟與結果

在硫酸慶大霉素提煉工序中，需要加入解吸氨解吸飽和樹脂，并用稀硫酸調pH，因此在本試驗中輔料以解吸氨和稀硫酸作為考察對象。取3.2.2中的10萬u/mL的溶液20mL測定旋光值（樣一），再加入1mL4.5%解吸氨溶液，并用6.0mol/L的硫酸溶液調節pH至4.8～5.5（樣二），測定旋光值并計算濃度進行比較。

表7 試樣旋光值及濃度對比

3.6.3

10萬u/mL未加輔料的硫酸慶大霉素溶液濃度為100 892u/ mL；10萬u/mL加了輔料并用6.0mol/L的硫酸溶液調節pH至5.4后的硫酸慶大霉素溶液濃度為100 892u/mL。兩種溶液的相對標準偏差RSD為0。

4 旋光法試驗結論及評價

試驗結果表明，用旋光法測定硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學濃度時，在線性、重現性、回收率、溫度、專屬性各方面都符合要求，由此認為旋光法測定硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學濃度切實可行。

[1] 藥品生產驗證指南[M].北京：化學工業出版社，2003.

Validation of Method for Determination of Chemical Concentration of Gentamicin Sulfate by Polarimetry

Zeng Li

Due to the rapid and accurate determination of concentration by optical method，it is widely used in pharmaceutical production quality inspection.It is necessary to verify the method in terms of linearity，reproducibility，recovery rate，temperature and specif city in the quality control of the f nished product liquid in the process of gentamicin sulfate extraction and how to ensure the practicability of the application of polarimetry.

polarimetry；linearity；reproducibility；recovery rate

R927

A

1003-6490（2016）11-0088-02

2016-10-10

曾莉（1981—），女，四川樂山人，工程師，主要研究方向為藥品檢驗、制藥工藝。