觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠心臟移植的免疫調(diào)節(jié)作用

趙敏 王慧琴

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觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠心臟移植的免疫調(diào)節(jié)作用

趙敏 王慧琴

【摘要】目的 探究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠心臟移植的免疫調(diào)節(jié)作用。方法 選取實(shí)驗(yàn)動物中心健康雄性SD大鼠與Wistar大鼠，將其分成A、B、C三組，建立大鼠心臟移植模型，貼壁法分離培養(yǎng)大鼠MSC（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞），由受體頸外靜脈注入，觀察移植后大鼠的存活時(shí)間，HE（蘇木精-伊紅）染色觀察移植心臟淋巴細(xì)胞浸潤程度。結(jié)果 B、C兩組與A組對比，大鼠平均存活時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），B、C兩組對比平均存活時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。B、C兩組與A組移植心臟病理學(xué)分級評分對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B、C兩組移植心臟病理學(xué)分級評分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論在體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中MSC能抑制T細(xì)胞增殖，但在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中沒有觀察到移植物存活時(shí)間顯著延長及沒有減輕淋巴細(xì)胞浸潤。

【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；心臟移植；免疫調(diào)節(jié)

研究表明人體MSC與同種異體T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)不能引起T細(xì)胞增殖，并抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，且不受組織相容性復(fù)合物限制[1]。MSC在體外混合培養(yǎng)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用已被證實(shí)[2]，但其在體內(nèi)試驗(yàn)的有關(guān)數(shù)據(jù)不足。本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖球?yàn)證MSC對大鼠心臟移植免疫調(diào)節(jié)作用。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取實(shí)驗(yàn)動物中心健康雄性SD大鼠與Wistar大鼠，將其分成A、B、C三組，A組同種同系移植組，供受體全部為SD大鼠；B組同種異系非給藥對照組，供體Wistar大鼠，受體SD大鼠；C組同種異系給藥實(shí)驗(yàn)組，供體Wistar大鼠，受體SD大鼠。每組各8例，4例觀察存活時(shí)間，4例術(shù)后第5天觀察移植心臟病理變化。

1.2 方法

建立大鼠心臟移植模型[3]，貼壁法分離培養(yǎng)大鼠MSC（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞），由受體頸外靜脈注入。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察移植后大鼠的存活時(shí)間，HE（蘇木精-伊紅）染色觀察移植心臟淋巴細(xì)胞浸潤程度。排斥反應(yīng)分為0～3級[4]（采用ISHT標(biāo)準(zhǔn)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)、計(jì)量資料行χ2檢驗(yàn)/t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

培養(yǎng)48 h后，發(fā)現(xiàn)少量貼壁細(xì)胞，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣。7 d左右85%以上呈現(xiàn)纖維細(xì)胞樣，細(xì)胞不均，核仁清晰可見。11 d左右單層細(xì)胞形成。傳代后細(xì)胞分布均勻，呈典型成纖維細(xì)胞樣。HE染色方法[5]鑒定表明貼壁細(xì)胞（包括小圓形細(xì)胞）為MSC而非造血干細(xì)胞。A、B、C組大鼠平均生存時(shí)間分別為（20.5±4.4）d、（6.4±0.6）d、（6.7±1.0）d。B、C兩組與A組對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），B、C兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。術(shù)后5 d，A組心肌細(xì)胞出現(xiàn)輕度水腫，細(xì)胞結(jié)構(gòu)無變化，骨髓間質(zhì)未見淋巴細(xì)胞侵潤；B、C兩組可見淋巴細(xì)胞侵潤。病理分級評分：A、B、C組評分分別為（0.21±0.25）分、評分為（2.97±0.51）分、（3.03±0.57）分。B、C兩組與A組對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），B、C兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

同種原位心臟移植被應(yīng)用到末期心臟病治療中，術(shù)后排斥反應(yīng)影響心臟移植成敗、患者生存期、生活治療等問題顯現(xiàn)出來。同種移植排斥反應(yīng)以T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)為主要機(jī)制，已被證實(shí)體外培養(yǎng)MSC可抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，有效抑制T細(xì)胞增殖，其不受供體、受體或第三者M(jìn)SC限制，均具有免疫調(diào)節(jié)作用[6]。MSC獨(dú)特的免疫特性使其能夠在同種異基因存活[7]，根據(jù)其這種特性理論上有理由推斷MSC在異基因移植宿主內(nèi)長期存活，避免宿主免疫監(jiān)視[8]，而本次研究將MSC異基因移植到大鼠體內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)大鼠存活時(shí)間明顯延長或是降低淋巴細(xì)胞侵潤程度。

綜上，在體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中MSC能抑制T細(xì)胞增殖，但在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中沒有觀察到移植物存活時(shí)間顯著延長及沒有減輕淋巴細(xì)胞浸潤。

參考文獻(xiàn)

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·護(hù)理研究·

作者單位： 450000 鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部

To Observe the Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells on the Immune Regulation of Heart Transplantation in Rats

ZHAO Min WANG Huiqin, School of Basic Medical Sciences, Zhengzhou Shuqing Medical College, Zhengzhou 450000, China

[Abstract]Objective To explore the effect of bone marrow mesenchymal stem cells on heart transplantation in rats.Methods From the experimental animal center of healthy male SD rats and Wistar rats, divided into A, B, C three groups,to establish the model of rat heart transplantation, adherent cultured rat MSC (mesenchymal stem cells), injected by the external jugular vein of the recipient after transplantation, observe the survival time of rats, HE (hematoxylin and eosin) staining of cardiac allograft lymphocyte infiltration.Results B, C two groups compared with the A group, the average survival time difference was statistically significant (P＜0.05), B, C two groups compared with the average survival time difference was not statistically significant (P＞0.05).There was a significant difference in B, C two group and A group (P＜0.05).There was no significant difference in B and C two groups (P＞0.05).Conclusion MSC can inhibit the proliferation of T cells in vitro, but not significantly prolonged the survival time of grafts in vivo, and no significant decrease of lymphocyte infiltration.

[Key words]Bone marrow mesenchymal stem cells, Heart transplantation, Immune regulation

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.07.142

【文章編號】1674-9308（2016）07-0206-02

【中圖分類號】R654

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A