富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體5、血管內皮生長因子及其受體2在胃腺癌組織中表達

劉　寧

(青海大學附屬醫院胃腸腫瘤外科，青海　西寧　810001)

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富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體5、血管內皮生長因子及其受體2在胃腺癌組織中表達

劉寧

(青海大學附屬醫院胃腸腫瘤外科，青海西寧810001)

摘要〔〕目的應用免疫組化方法檢測胃腺癌中富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體(LGR)5、血管內皮生長因子(VEGF)和其受體(VEGFR)2的表達。方法58例胃腺癌患者的臨床資料及術后蠟塊組織作為研究組，選擇上述患者在距腫物邊緣>5 cm、經病理主治醫師證實為非癌組織的胃黏膜組織的蠟塊組織47例作為對照組，應用免疫組化方法檢測LGR5、VEGF和VEGFR2的表達。結果研究組中LGR5、VEGF和VEGFR2的陽性率均明顯高于對照組，研究組中LGR5、VEGF和VEGFR2的陽性率與浸潤深度和脈管浸潤相關，LGR5的陽性率與分化程度、Ki67增殖指數相關，VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的最大徑相關。相關性分析顯示研究組中LGR5和VEGF、VEGF和VEGFR2均具有正相關性。結論LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌術后組織中高表達，三者可以促進腫瘤的形成和進展。LGR5可能與VEGF和VEGFR2蛋白的表達有協同作用。

關鍵詞〔〕胃腺癌；胃腺癌中富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體5；血管內皮生長因子；血管內皮生長因子受體2

第一作者：劉寧(1977-)，男，主治醫師，碩士，主要從事胃腸道外科及胃腸腫瘤研究。

胃癌最主要的病理類型是腺癌，病變進展時腫瘤細胞異型性明顯，增殖活躍，常丟失其極性及分化。間質血管生成是腫瘤生長迅速及分化差的重要原因。近年研究顯示腫瘤血管生成與血管內皮生長因子(VEGF)有直接關系，VEGF在作用過程中可以與其受體(VEGFR)2起協同作用〔1，2〕。富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體(LGR)5是近年學者關注的一種新的7次跨膜G蛋白耦聯受體家族成員，其可能對干細胞和分化較原始的細胞具有標記作用，同時具有促進腫瘤細胞生成的作用〔3，4〕。本文分析胃腺癌中LGR5、VEGF和VEGFR2的表達及其相關性。

1資料與方法

1.1一般資料近3年在我院行胃腺癌根治手術的患者作為研究組，留取臨床資料及術后腫瘤標本，共58例，男37例，女21例，年齡46～79歲，平均(60.4±6.4)歲。選擇上述患者在距腫物邊緣>5 cm、經病理主治醫師證實為非癌組織的胃黏膜組織的蠟塊組織47例作為對照組，男24例，女23例，年齡48～76歲，平均(61.9±5.6)歲。兩組均經病理主治醫師閱片復診，嚴格按WHO中的標準判定。兩組一般資料均衡可比。

1.2LGR5、VEGF和VEGFR2表達的檢測應用免疫組化SP法、應用二氨基聯苯胺(DAB)染色(DAB在染色時現場配制)。操作過程依據說明書進行，由病理科同一技師完成，減少人為誤差，做好質控工作。

1.3結果判定LGR5、VEGF和VEGFR2均以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，研究組選擇上皮細胞巢分布集中的區域進行計量，對照組選擇上皮黏膜的分布區，每個病例選擇3個400倍視野，取平均值，以<25%為陰性，以≥25%為陽性。

1.4統計學方法采用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗或線性相關性分析。

2結果

2.1兩組中LGR5、VEGF和VEGFR2表達陽性率的比較對照組中LGR5不表達，研究組中LGR5、VEGF和VEGFR2表達陽性率明顯高于對照組(P<0.000 1)。見表1。

表1　兩組中LGR5、VEGF和VEGFR2

2.2LGR5、VEGF和VEGFR2在研究組不同臨床特征分組中的比較見表2。研究組中LGR5、VEGF和VEGFR2的陽性率與浸潤深度和脈管浸潤相關，LGR5的陽性率與分化程度、Ki67增殖指數相關，VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的最大徑相關。

表2　LGR5、VEGF和VEGFR2陽性表達在研究組

2.3研究組中LGR5、VEGF和VEGFR2的相關性LGR5和VEGF(r=0.48，P=0.042 1)、VEGF和VEGFR2(r=0.54，P=0.027 0)均具有正相關性。

3討論

胃腺癌發生因素較多，目前學者關注其發生過程中蛋白的變化。腫瘤血管生成中常以血管內皮增生繁殖為主，當其加速生長時，形成枝芽狀的實性團，此時血管無功能，當被血流沖擊后可以形成管腔，才具有血管的形態和功能〔5〕。VEGF的作用主要是促進血管內皮細胞的增生和繁殖，在作用過程中，VEGF通過與VEGFR2途徑促進間質的血管新生。此途徑被認為是酪氨酸激酶受體途徑〔6〕。VEGFR2由一個胞外結構域、一個跨膜結構域和一個胞質內酪氨酸激酶結構域組成，其胞外結構域有7個免疫球蛋白樣的袢。當VEGF與VEGFR2結合后，形成二聚體及酪氨酸發生自身磷酸化，激活并將細胞膜及細胞質激酶級聯反應信號傳遞到細胞核，可以引發一系列的變化，包括鈣離子內流、凝血酶的產生及整合素的表達。也有研究認為VEGFR2還參與由VEGF介導的血管通透性改變〔7〕。LGR5是G蛋白耦聯受體，由907個氨基酸組成，其具有7次跨膜蛋白，含有17個富含亮氨酸重復序列〔8，9〕。近來有研究顯示LGR5為WNT信號通路的靶基因和腫瘤干細胞的重要標志物〔10，11〕。丁黎葭等〔12〕通過研究LGR5在Barrett食管和早期食管鱗癌中的表達后，發現LGR5在腺上皮和鱗狀上皮蛋白表達部位不一致，并認為LGR5可能作為輔助診斷Barrett食管和早期食管鱗癌的生物學指標。近來不同學者也發現LGR5表達升高可能在一定程度上與血管生成因子有關聯〔13，14〕。

本研究提示LGR5、VEGF和VEGFR2表達升高是促進胃腺部形成的蛋白因素。LGR5、VEGF和VEGFR2高表達可以促進腫瘤的侵襲性生長過程，使腫瘤以蟹足樣的生長，對周圍組織的破壞作用明顯增強，同時腫瘤細胞對脈管的侵襲能力增加，使腫瘤細胞具有明顯的血管破壞能力，同時使腫瘤細胞進入血液循環，為腫瘤細胞經血道遷移創造了重要前提。提示LGR5參與腫瘤的分化過程中，使腫瘤細胞的分化成熟過程發生障礙，腫瘤停滯于幼稚的階段，細胞的異型性大，增殖活躍，侵襲性強。VEGF和VEGFR2表達升高是腫瘤生長的重要因素，此結果也與VEGF和VEGFR2促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養有關。LGR5/VEGF/VEGFR2可能具有協同正向作用，即LGR5可以正向調節VEGF/VEGFR2這一血管生成通路，LGR5是腫瘤血管生成的重要影響因素。這個結果也說明LGR5有促進血管生成的作用，其作用機制是通過誘導VEGF/VEGFR2這一通路實現的。綜上，LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌術后組織中高表達，三者可以促進腫瘤形成和進展。LGR5可能與VEGF和VEGFR2蛋白表達有協同作用。

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〔2014-11-24修回〕

(編輯苑云杰)

中圖分類號〔〕R735〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0111-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.050