乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的分析

崔俊林，曹　娟

(1.鐘祥市人民醫院檢驗科，湖北鐘祥 431900；2.臺州恩澤醫療集團(中心)路橋醫院檢驗科，浙江臺州 318050)

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·臨床研究·

乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的分析

崔俊林1，曹娟2

(1.鐘祥市人民醫院檢驗科，湖北鐘祥 431900；2.臺州恩澤醫療集團(中心)路橋醫院檢驗科，浙江臺州 318050)

摘要:目的探討乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少(EDTA-PTCP)的原因及鑒別要點和防范措施，減少或防止誤診誤治。方法對2013年1～12月鐘祥市人民醫院檢驗科發現的3例EDTA-PTCP患者分別用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管、肝素抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈血，而后用全自動血液分析儀分別測定血小板數量，并用毛細血管血進行血小板手工計數，且制作EDTA-K2抗凝血涂片和毛細血管血涂片，并用瑞氏染色鏡檢。結果EDTA-K2抗凝血的機測血小板結果均很低(<50×109/L)，血小板直方圖存在曲皺、尾部上翹、拖尾、無擬合曲線等異常；枸櫞酸鈉抗凝血和肝素抗凝血機測結果正常，血小板直方圖也正常；手工計數血小板數量正常，且涂片可見分布正常。3例均明確為EDTA-PTCP。結論EDTA-K2抗凝劑可引起血小板聚集，造成血小板假性減少。用全自動血細胞分析儀檢測EDTA-K2抗凝血時，若出現血小板減低而患者無出血傾向、血栓形成等相關血小板減少癥時，應進一步進行人工計數、血涂片復查和更換抗凝劑等方法復檢，以減少或避免誤診誤治。

關鍵詞:血小板；乙二胺四乙酸；假性血小板減少

目前，全自動血液分析儀在臨床檢驗工作中廣泛應用，乙二胺四乙酸(EDTA)是國際血液學標準化委員會(ICSH)推薦的血細胞分析儀計數的抗凝劑。它的原理是能與血液中的鈣離子結合成螯合物，而使鈣離子失去凝血作用，從而阻止血液凝固。但其偶可誘導血小板發生體外聚集，血細胞自動分析儀又不能加以識別，導致血小板計數低于實際值，而出現假性血小板減少現象，即EDTA依賴性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)，易造成誤診誤治，甚至引發醫療糾紛[1-2]。鐘祥市人民醫院2013年1～12月共發生3例EDTA-PTCP，現結合相關文獻分析報道如下。

1資料和方法

1.1一般資料本組3例，男2例，女1例，其中2例男性為接受健康體檢者，1例女性為擇期剖宮產手術的住院患者。3例患者均無皮膚黏膜出血、紫癜等明顯出血傾向。乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝的靜脈血用全自動血細胞分析儀計數均發現PLT<50×109/L，但末梢血涂片染色后鏡檢發現血小板分布正常，而且用肝素抗凝真空采血管、枸櫞酸鈉抗凝真空采血管重抽后血液分析儀計數和末梢血手工計數的血小板數量均在正常范圍。

1.2儀器和試劑Sysmex XE-2100 全自動血細胞分析儀及其配套試劑，德國賽力斯BE-XRM血凝儀及配套試劑，EDTA-K2真空采血管、枸櫞酸鈉抗凝真空采血管及肝素抗凝真空采血管(均由浙江康是醫療器械有限公司生產)，SP-1000i 推片機，OLYMPUS-BX41顯微鏡，Neubauer 計數盤，載玻片(由天津玻璃廠生產)，手工計數血小板稀釋液及瑞氏染液均參照《全國臨床檢驗操做規程》[3]由本實驗室配制。

1.3臨床排查 仔細查體觀察患者有無皮膚、黏膜出血，排除血小板減少的相關性疾病，檢測凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、凝血酶時間(TT)。

1.4血小板復查

1.4.1儀器法 分別用EDTA-K2抗凝管、肝素抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管采患者靜脈血2 mL，充分混勻，嚴格按照操作規程，在30 min內應用Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀分別測定血小板。血小板的參考范圍是(100～300)×109/L。

1.4.2手工法取毛細血管血20 μL按《全國臨床檢驗操作規程》(3版)的操作方法進行血小板手工計數。

1.4.3瑞氏染色分別用患者毛細血管血涂片1 張，EDTA-K2抗凝靜脈血涂片1 張，用瑞氏染液染色，在顯微鏡下觀察血小板分布情況。

2結果

本組均排除采血不當、抗凝劑與血液混勻不均導致的血小板減少。查體發現3例均無皮膚、黏膜出血，且凝血功能檢測正常。EDTA-K2抗凝靜脈血用儀器法檢測的血小板數量仍很低(<50×109/L)，且血小板直方圖存在曲皺、尾部上翹、拖尾、無擬合曲線等異常，散點圖也有異常情況，血涂片顯示血小板聚集、巨大血小板、血小板衛星現象等。枸櫞酸鈉抗凝靜脈血和肝素鋰抗凝靜脈血用儀器法檢測的血小板數量都處于正常范圍，且血小板直方圖圖形正常。用手工法計數的毛細血管血小板數量也處于正常范圍，并且毛細血管血涂片顯示血小板分布正常，血小板2～4個聚集或散在分布，未見明顯片狀聚集現象。EDTA-K2抗凝血涂片顯示，血小板大量聚集，成簇甚至成片，偶見散在在分布。根據上述結果，明確3例均為EDTA-PTCP，詳見表1。

表1　　3例患者的血小板檢測結果(×109/L)

3討論

3.1EDTA-PTCP的病理機制EDTA-PTCP的病理機制并不是很明確，目前認為EDTA-PTCP的發生可能與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關[4-5]。由于EDTA鹽可導致血小板活化，血小板形態發生改變，致使血小板表面某種隱匿性抗原表位構象改變，這些活化的血小板與存在于血漿中的自身抗體結合后，激活了細胞膜中某些能活化血小板纖維蛋白原受體的活性物質，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團;也有研究資料表明，EDTA-PTCP是由于EDTA鹽抗凝時可誘導血小板互相聚集，堆積發生衛星現象(血小板圍繞在單核細胞或淋巴細胞周圍呈現衛星現象)[6]，致使全自動血細胞分析儀不能確認血小板而計數偏低[7]。

3.2防范EDTA-PTCP的措施在日常檢驗工作中，對EDTA 抗凝的標本進行血細胞分析儀計數時出現血小板減少的現象，必須認真查看并分析其血小板直方圖，看有無擬合曲線或血小板聚集警告提示，并制作血涂片染色鏡檢，觀察有無血小板聚集成堆或成簇的現象。對于PLT<50×109/L的患者，應及時和臨床醫生溝通，在了解患者無紫癜且無出血癥狀與體征，凝血功能正常的情況下，要重新采樣復查，并進行不同的方法比對，如末梢血手工稀釋計數、枸櫞酸鈉和肝素抗凝血計數，同時制作血涂片瑞氏染色，顯微鏡下觀察血小板是否有聚集現象，獲得準確的實驗數據，避免因為EDTA鹽作為抗凝劑造成的血小板假性減少的情況。當然，這種情況發生率極低。一旦發生，會給臨床醫生帶來錯誤指導，就會給患者增加一些臨床不必要的檢查，甚至出現誤診、誤治現象。因此，檢驗人員一定要有高度的責任心，提高檢驗質量，避免上述情況的發生。

參考文獻

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[5] 樂家新，叢玉隆，王海，等． Sysmex XE-2100 血細胞分析儀血涂片復檢規則的應用研究[J]． 現代檢驗醫學雜志，2010，25(1):30-36．

[6] Zandecki M,Genevieve F,Gerard J,et al.Spurious counts and spuriousresults on haematoloy analysers:Areview.Part I platelets[J].Int J LabHematol,2007,29(1):14-20.

[7] 宓慶梅,施巍宇,郝婉瑩,等.EDTA依賴性血小板減少癥1例[J].中華檢驗雜志,2004,27(7):719-720.

(收稿日期：2015-07-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.049

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)01-0105-02