西安市2 841例女性人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析

楊瑞利，翟華麗，沈建軍王飛霞

(長安醫院檢驗科，陜西 西安 710016)

西安市2 841例女性人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析

楊瑞利，翟華麗，沈建軍王飛霞

(長安醫院檢驗科，陜西 西安 710016)

目的 分析西安市女性宮頸上皮細胞人乳頭瘤病毒(HPV)感染狀況和基因亞型分布特點，以了解本地區HPV感染現狀，為宮頸癌的防治提供參考依據。方法采用聚合酶鏈反應(PCR)-反向點雜交技術，對2013年1月至2014年12月來我院婦科就診的2 841例女性患者的宮頸黏液進行HPV分型檢測，分析HPV在女性人群中的感染率、基因型分布和年齡分布特點。結果2 841例樣本中HPV陽性樣本639例，總感染率為22.49%。檢出的高危亞型中前3種型別依次為HPV52型、58型、16型；低危型感染以HPV6型最高，其次是HPV11型。感染者以≤20歲年齡組最高，不同年齡段的HPV感染率差異有統計學意義(χ2=61.87，P＜0.01)。結論該地區女性HPV感染常見亞型為HPV52型、58型、16型，年輕女性感染率最高，HPV基因的準確分型對宮頸癌的早期預防和診斷有重要意義。

西安；人乳頭瘤病毒；基因型；分布

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種具有高度特異性的嗜上皮性病毒，屬雙鏈閉環的球形小DNA病毒，廣泛存在于自然界，多數情況下HPV感染為一過性，然而高危型HPV的持續感染是引起宮頸癌發病的重要因素，低危型HPV持續感染主要與尖銳濕疣有關。目前宮頸癌是僅次于乳腺癌，嚴重危害女性健康的第二大惡性腫瘤，中國每年新發宮頸癌13萬余人，占世界新發病例的28.8%，發病人群趨于年輕化[1]。研究表明，HPV基因型的分布具有明顯的年齡和地區分布特征，因此，本研究對西安市女性宮頸上皮細胞HPV感染和基因分布情況進行分析，同時與其他地區文獻報道的HPV感染狀況進行比較，對今后本地區制定宮頸癌篩查方案以及研發應用HPV疫苗提供有價值的參考資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年12月到本院婦科就診并進行HPV分型篩查的2 841例患者，年齡16～80歲，平均48歲。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 均由專科醫生使用陰道窺器暴露宮頸，用無菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物后，將宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉5周，將所有標本置于有細胞保存液的取樣管中，密閉送檢。

1.2.2 試劑及儀器 HPV分型檢測試劑盒購自達安基因股份有限公司，可檢測21個HPV亞型，包括高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、CP8304，低危型：6、11、42、43、44；儀器為達安DA7600 PCR擴增儀。

1.2.3 DNA提取 取含0.5 ml含宮頸細胞的保存液，按試劑說明書步驟操作，提取DNA模板。

1.2.4 PCR擴增 按照說明書加人DNA模板后瞬時離心，PCR反應條件為:93℃，3 min預變性，然后按93℃40 s、55℃40 s、72℃40 s擴增，40個循環，最后72℃延伸7 min。

1.2.5 雜交洗膜顯色 嚴格按照試劑盒說明書進行膜條雜交、洗滌、顯色，最后觀察結果。

1.2.6 HPV基因分型雜交結果判定 檢測結果陽性點為清晰可見的藍色圓點，每個雜交膜上的生物素結合點及PC點必須顯色，否則實驗無效。除PC點外：(1)陰性質控品不應該出現藍圓點；(2)陽性質控品應該出現藍圓點；(3)依據膜條HPV分型分布圖判斷陽性點為何種HPV亞型；如觀察到1個藍色圓點為單重感染，出現2個及以上藍圓點為多重感染。

1.3 統計學方法 應用SPSS 12.0統計軟件進行數據分析，定性資料用率(百分比%)表示。不同年齡段人群HPV感染率比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HPV檢測結果分析 在2 841例篩查樣本中，HPV檢出感染病例639例，總感染率為22.49% (639/2 841)，其中單重感染者586例，占篩查人數的20.63%(586/2 841)，多重感染者53例，占篩查人數的1.87%(53/2 841)。

2.2 HPV感染的年齡分布 將2 841例患者按不同年齡分為≤20歲、21～25歲、26～30歲、31～35歲、36～40歲、41～45歲、46～50歲、＞50歲8個組，統計分析各組HPV感染情況，結果見表1。以≤20歲組HPV感染率最高，達46.91%(38/81)，21～25歲組次之，感染率為28.07%(172/659)，隨著年齡的增加，感染率逐漸下降，而到46～50歲組又上升到24.11%(27/112)，50歲以后又開始下降，各年齡段感染率比較差異有統計學意義(χ2=61.87，P＜0.01)，見表1。

表1 2 841例篩查者中各年齡組女性HPV感染情況[例(%)]

2.3 HPV各基因亞型結果分析 HBV感染基因亞型分布情況見表2。由于檢測標本存在單重和多重感染病例，故639例感染標本實際檢出亞型頻數為693，人群感染以高危型為主，共檢出高危亞型頻數為553，檢出率為79.80%(553/693)；檢出低危型頻數為140，檢出率為20.20%(140/693)。檢出的高危亞型前三位依次為52型、58型、16型，感染率分別為15.44%、10.10%、8.80%，低危亞型分別為6型、11型、43型，感染率分別為10.53%、6.20%、3.90%。高危型別中單重感染頻數最多的前三個型別為52型、58型和16型，二重以上感染頻數較多的亞型分別為52型，16型和Cp3804型；低危型別中單重感染頻數和二重及以上感染頻數一致，分別為6型、11型、43型。

表2 639例HPV感染基因亞型分布情況[頻次(%)]

3 討 論

近年來，宮頸病變已經成為影響女性身心健康的主要疾病，也是女性常見的惡性疾病之一。高危型人乳頭瘤病毒陽性是誘發宮頸病變尤其是宮頸上皮內瘤變的主要因素[2]，早期積極地預防與治療高危型人乳頭瘤病毒對減少宮頸病變、降低宮頸癌的發生率具有重要意義。研究證實，在世界范圍內罹患宮頸癌的患者中，有93%以上能檢測到HPV感染。

目前實驗室已分離出110余種HPV DNA，其中30多種與宮頸感染和病變有關[3-5]。本研究結果顯示：常見HPV感染及基因型分布存在地理差異:2841例篩查樣本中，有639例感染者中檢出19種HPV基因亞型，單重感染586例，占篩查人數的20.63%(586/2 841)，多重感染53例，占篩查人數的1.87%(53/28 41)。高危亞型頻次為553(79.80%)，低危亞型頻次為140(20.20%)，總體感染率為22.49%(639/2 841)，明顯高于文獻報道金華地區為13.6%，北京地區為17.0%[6-7]，但低于紹興地區(54.75%)和武漢地區(64.5%)[8-9]，這可能與人群及地區差異有關。人群感染以高危型為主，其中前三位的高危亞型依次為HPV 52型、58型、16型，而全球范圍內，前三位分別是HPV16型、18型、58型。廖京平[10]對北京大學第一醫院報道門診人群中HPV16型、58型和52型是這一人群中常見的型別。彭永排等[11]對廣州市1 285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調查顯示前三位的HPV亞型是52型、31型、16型。蔣衛平等[12]對浙江麗水地區288例HPV感染檢出居前三位的依次是16型、58型、52型。本研究中52型感染率最高與彭永排等[11]報道的一致，其余均有差異，這可能與人群地域性和標本取材或研究對象都有一定關系。

本研究還表明，HPV感染年齡分布存在差異，HPV感染的高峰年齡為≤20歲，感染率達46.91%。其感染率隨著年齡的增長而降低，而46～50歲感染率又上升到24.11%，50歲以上又開始下降，各年齡段感染率比較差異有統計學意義，≤20歲的女性HPV高危型感染率較21～50歲偏高，與席金甌[13]報道的婦女生殖道HPV感染的高峰年齡是18～28歲基本一致，這可能是因為人在青少年期其免疫系統還未被致敏，導致初次性生活時極易感染HPV[14]。

綜上所述，西安地區女性HPV感染檢出率居前三位的亞型依次為HPV52型、58型、16型，以單重感染為主，≤20歲年齡組感染率最高，說明對年輕人普及健康知識教育很有必要；對篩查出高危型HPV感染的人群進行追蹤檢測和干預，能夠有效減少宮頸病變，降低宮頸癌的發病率，因此，掌握本地區女性HPV感染狀況和基因型分布特征不僅是流行病學調查的需要，而且對宮頸癌的早期診斷、治療和特異性疫苗的研制具有重要的指導意義。

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Infection status and genotype distributions of human papillomavirus infection in 2 841 women of Xi'an,Shaanxi, CHINA.

YANG Rui-li,ZHAI Hua-li,SHEN Jian-jun,WANG Fei-xia.Department of Clinical Laboratory,the Hospital of Chang'an,Xi'an 710016,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo analyze the infection status and gene distribution of human papillomavirus(HPV)infection in Xi’an,so as to provide data support for the prevention and control of cervical cancer and the clinical application of cervical cancer vaccine.MethodsHPV genotype of cervical mucus of 2 841 screening women in our hospital from January 2013 to November 2014 was detected by polymerase chain reaction(PCR)and reverse dot blot hybridization.The infection rate,genotype and age distribution in the females were analyzed.ResultsAmong the 2 841 women, 639 women were infected by HPV,and the total infection rate of HPV was 22.49%.The first three high-risk HPV subtypes were HPV52,58,16.The infection rate of HPV6 was highest in the low-risk genotypes,followed by HPV11.The infection rate of≤20-year-old group was significantly higher than that of the other groups.There was a significant difference in the infection rate among the various age groups(χ2=61.87,P＜0.01).ConclusionHPV52,HPV58 and HPV16 were the major subtypes in the women of Xi′an.The infection rate of young women was higher than that of the other age groups.The detection of HPV genotypes is very meaningful in early prevention and diagnosis of cervical cancer.

Xi′an;Human papillomavim;Genotype;Distribution

R711.7

A

1003—6350（2016）06—0885—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.009

2015-09-23)

沈建軍。E-mail:172454089@qq.com